稻米赖氨酸快速测定条件的探讨

以氨基酸自动分析仪测定稻米赖氨酸含量为参照标准。在“茚三酮测定赖氨酸含量”(A法)的基础上,对该法中大米蛋白质的提取温度和时间、色温度和时间及茚三酮用量等条件进行了探讨,提出了稻米赖氨酸含量快速测(B法)。提取条件为90℃5分钟,显色条件为90℃20分钟;茚三酮试剂用1 ml。用B法对10个大米样品进行测定,赖氨酸含量与氨基酸分析仪测得的赖含量基本上一致,无显著差异(P>0.05)。     

不同方法测定聚乙二醇化天花粉蛋白的修饰度

目的:建立测定PEG化天花粉蛋白修饰度的方法.方法:利用电泳法初步确定PEG-TCS的分子量、用质谱法进行验证;通过TNBS法和荧光胺法测定其修饰度.结果:从质谱法和电泳法可知PEG-TCS的理论修饰度为9.0909%,TNBS法测得的修饰度为9.8613%%,荧光胺法所测得值为8.5955%.TNBS法测定结果尽管偏大,但是操作简单,不需要专门的仪器;荧光胺法需要荧光分光光度计,且丙酮易挥发.结论:TNBS法可作为测定PEG-TCS修饰度的方法.     

加热洗脱硝酸纤维膜上保存的尿蛋白质

用膜保存尿蛋白质对于生物标志物的研发意义重大,从保存尿蛋白质的硝酸纤维膜上洗脱蛋白质的有效性,决定着保存方法被接受的程度和应用的范围。加热洗脱蛋白质的方法,通过提高硝酸纤维膜溶解时的温度等方式;并运用SDS-PAGE和LC-MS/MS分析加热洗脱方法所制备的尿蛋白质样品,将其与强烈涡旋洗脱方法和直接丙酮沉淀方法所制备的尿蛋白质样品比较。结果显示,加热洗脱方法比强烈涡旋洗脱方法获得更多的蛋白质(P0.05),且蛋白质无降解;加热洗脱方法和直接丙酮沉淀方法制备的蛋白质样品,质谱所鉴定到蛋白质重叠率无明显差异(分别是92.6%、96.8%),蛋白质丰度CV值20%的蛋白质占总蛋白质的比例均很高(分别是85.2%、94.4%)。加热洗脱法具有很好的技术重复性,操作更加高效、简单,有利于用膜保存尿蛋白质方法的推广应用。     

胰脏中淀粉酶的形成

Hokin在数篇很有兴趣的论文报告中,证明鸽胰脏组织切片在有葡萄糖和氨基酸存在、有氧情况下保温,淀粉酶的含量(用酶活力来测定)是增加了。我们已重复证实所有的这些观察。我们并且证明了这是淀粉酶蛋白质真正的重新合成,而不是由于先前存在结合状态酶的释放。为了这样的目的,我们建立了一个微量方法,从很小量的胰脏组织中提取淀粉酶。这个方法简单如下:胰脏组织用丙酮干燥,然后在过量的冷丙酮中磨成匀浆,很快地使其干燥。这粉末用磷酸缓冲液pH7.2抽提,不溶解的物质弃去,从这样的抽提液中,在零度时,使淀粉酶和一些其他的蛋白质吸附在Lintner淀粉(即可溶性淀粉)上,     

适于小麦叶片蛋白质组分析的样品提取方法研究

以‘铭贤169'小麦苗期叶片为材料,分别采用传统的TCA/丙酮沉淀法、酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法以及改进的TCA/丙酮沉淀-酚/SDS联合抽提法提取叶片总蛋白,进行双向电泳分离和胶体考染,以建立适用于小麦蛋白质组分析的样品制备方法.结果表明:TCA/丙酮沉淀法较酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法获得的蛋白杂质较少,在二维电泳图谱中的蛋白点较酚抽提-甲醇/醋酸铵沉淀法提取的蛋白点清晰且多.相比于以上2种提取蛋白样品方法,改进的TCA/丙酮沉淀-酚/SDS联合抽提法提取的小麦叶片蛋白杂质少、二维电泳图谱上的点明显增多、分辨率较高.所选小麦的代表性蛋白点能获得成功鉴定.该方法可推广应用于水稻叶片蛋白质组分析的样品提取.     

粉碎粒度和不同储藏条件对玉米赖氨酸含量的影响

选择2013年新收获的玉米品种坤臻(糯玉米)、正大999和百农5号,编号为K01、K02和K03,探讨粉碎粒度、储藏温度和储藏时间对不同品种的玉米样品中赖氨酸含量的影响。结果表明:粉碎粒度试验中,K01、K02和K03玉米样品分别经过20目、40目、60目和80目筛处理时,样品过40目或80目筛时赖氨酸含量都相对较高;单因素分析储藏温度(10℃、20℃和30℃)和储藏时间(2、4、6、8个月)对赖氨酸含量的影响时,随着储藏温度的升高和储藏时间的延长,K01、K02和K03样品中赖氨酸含量都有不同程度的下降,其中储藏时间对赖氨酸含量的影响较大,储藏温度次之,储藏8个月时,K01、K02和K03样品中的赖氨酸含量分别下降33.3%、37.1%和39.4%。     

微量蛋白质的定性检测

微量蛋白质的检测,是医学及生物学实验室经常遇到又最棘手的问题之一。我们在应用铜试剂(二乙基二硫代氨基甲酸)间接测定微量蛋白质时,曾利用三氯甲烷来抽提有色的铜试剂-铜络合物,以加深色度。实验过程中,样品中蛋白浓度越高,三氯甲烷相颜色越深,同时还观察到三氯甲烷相被分     

昆虫拒食剂的生物测定方法

<正> 目前国内外比较广泛采用的测定昆虫拒食剂拒食活性的方法主要有圆叶片法及改进的圆叶片法、体重法、排泄物法及电讯号法,现分述如下。 一、圆叶片法及改进的圆叶片法 如果以食叶量较大的咀嚼式口器昆虫为试虫,则可采用圆叶片法测定拒食活性。将供试样品用丙酮定溶至预定浓度(如样品难溶于丙酮,则可先用少量其它溶剂如乙醇、二甲亚砜、乙醚等溶解,再以丙酮稀释至预定浓度)。将试虫喜食的叶     

用氯仿-甲醇抽提法测定鱼体脂肪含量的研究

脂肪含量的测定,是鱼类能量学及营养学的重要环节1。目前最常用的测定方法,是用氯仿一甲醇(2:1)混合液(下面简称C-M液)抽提1。这一方法的基本步骤见图1。不同研究者采用的具体步骤有所差异。如崔奕波1引用的方法系将样品用C-M液匀浆后直接离心,而Hopkins等2对样品不匀浆,仅用C-M液浸泡半小时后离心。这一方法最初是用于医学检验;在生态学研究中。常需要测定大量样品,故方法的简化尤为重要。本研究的目的是探讨不同抽提步骤对测定结果的影响,以期对原方法进行简化;同时将C-M抽提法与我国常用的索氏乙醚抽提法进行比较。       

脑啡肽的放射免疫测定

1975年发现亮氨酸脑啡肽(LEK)和甲硫氮酸脑啡肽(MEK)。其测定以放射免疫(RIA)最佳。作者提议并合成了多聚赖氨酸琥珀酰脑啡肽免疫原,EK 结合率81～90%,每2.3或3.2个赖氨酸残基连上一个EK。免疫3或6个月时获得抗EK 血清(ALS 或AMS),工作稀度可达1:5000,K_(eff)10~9升/克分子。试用改进的氯胺T 标记法及DEAE-Sephadex A-25柱层析制备高比放射性~(125)I-EK,免疫活性良好。双抗体法分离抗体结合的和游离的~(125)I-EK。竞争抑制曲线:灵敏度LEK～11微微克,MEK～130微微克;精密度1.8%及1.4%。β-内啡肽,八种肽类激素、吗啡、纳洛酮无明显干扰;交叉反应MEK 对ALS 为3.3%、LEK 对AMS 为<1%。脑组织用0.1N 盐酸抽提,中和后,直接作RIA。本方法已通过多种方法学考验。正常大鼠脑中EK 浓度以下丘脑为最高,尾核次之。本法是灵敏、可靠和特异的。     

脑啡肽的放射免疫测定

1975年发现亮氨酸脑啡肽(LEK)和甲硫氨酸脑啡肽(MEK)。其测定以放射免疫(RIA)最佳。作者提议并合成了多聚赖氨酸琥珀酰脑啡肽免疫原,EK结合率81～90%,每2.3或3.2个赖氨酸残基连上一个EK。免疫3或6个月时获得抗EK血清(ALS或AMS),工作稀度可达1:5000,K_(eff)10~9升/克分子。试用改进的氯胺T标记法及DEAE-Sephadex A-25柱层析制备高比放射性~(125)I-EK免疫活性良好。双抗体法分离抗体结合的和游离的~(125)I-EK。竞争抑制曲线:灵敏度LEK～11微微克,MEK～130微微克;精密度1.8%及1.4%。β-内啡肽,八种肽类激素、吗啡、纳洛酮无明显干扰;交叉反应MEK对ALS为3.3%、LEK对AMS为<1%。脑组织用0.0N盐酸抽提,中和后,直接作RIA。本方法已通过多种方法学考验。正常大鼠脑中EK浓度以下丘脑为最高,尾核次之。本法是灵敏、可靠和特异的。     

三硝基苯磺酸法测定聚乙二醇化重组人生长激素的平均修饰度

目的:建立测定三种不同结构聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)平均修饰度的三硝基苯磺酸法(TNBS)。方法:采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定PEG-rhGH的分子量,求得理论平均修饰度。既而通过正交试验、游离PEG干扰等方法学考察,建立TNBS法。结果:从质谱法可知PEG-rhGH的理论修饰度为10%,TNBS法测得三种PEG-rhGH的修饰度分别为为10%、12%及10%,与理论值相符。结论:TNBS操作简单,不需要专门的仪器,可作为测定PEG-rhGH平均修饰度的方法。     

3种不同油桐种仁蛋白质提取方法比较研究

一种有效的蛋白质提取方法是蛋白质双向电泳成功分离的关键。油桐种仁可以用来制取工业用桐油,但其中富含大量的能干扰蛋白质提取的物质,并能影响双向电泳图谱的分辨率。本文中对油桐种仁蛋白质采用丙酮提取（方法A）、苯酚抽提（方法B）以及丙酮—苯酚结合提取（方法C）,并通过蛋白质双向电泳技术对这3种方法的提取效果进行比较研究。结果显示：采用方法C所提取的蛋白质样品,其蛋白浓度高达到8.1 μg·μL^-1;并且该方法对油桐种仁中的高分子量、低分子量蛋白均有较强的提取能力;此外,其蛋白样品经过双向电泳所得到的蛋白质点和图谱分辨率也较其余两种方法好。     

L-赖氨酸高产菌的选育及发酵培养基的优化

目的:获得L-赖氨酸高产菌及得到最优的发酵培养基.方法:以黄色短杆菌(Brebvibacterium flavum)XQ-8为出发菌株,经硫酸二乙酯(DES)、亚硝基胍(NTG)逐级诱变处理,在发酵培养基中添加乙酸和乙醇,在发酵过程中添加吐温-80和二甲基亚砜.结果:获得一株L-赖氨酸高产菌XQ-89(SGгVal-),摇瓶发酵72h赖氨酸产量达到77g/L,对乙酸、吐温-80和玉米浆三因素利用响应面分析法(Response Surface Methodology)对其添加量进行优化.当乙酸、吐温-80及玉米浆的添加量分别为0.32%、0.66%、1.5%时赖氨酸达到94g/L,比优化前提高22.1%.结论:筛选的(SGгVal-)标记是有利于L-赖氨酸的积累,添加乙酸和吐温-80对提高L-赖氨酸的产量是有效的.     

环境样品中锶-90的测定

本文叙述用二-(2-乙基己基)磷酸(HDEHP)萃取测定环境样品中锶-90的各种条件的研究,并在最佳条件下提出分析程序。锶-90的含量通过HNO_3-HDEHP-甲苯体系中溶剂萃取子体产物钇-90而获得。程序简便、快速而准确。~(85)Sr示踪的结果表明,锶回收对于生物样品是95%,对于沉降物～90%。程序在有天然放射性同位素和裂变产物存在下也是可用的。对于~(140)Ba-~(140)La,去锶、钡裂变产物,钍系的~(212)Pb-~(212)Bi,去污系数达到了10~4。样品分析的结果十分满意。显著性检验证明本方法的结果与发烟硝酸法的结果一致。本文还进一步讨论应用二-(2-乙基己基)磷酸和季胺N_(269)实现直接萃取~(90)Y而快速测定~(90)Sr的问题,提供的快速测定方法,分析生物样品时,能在二小时之内报告结果。     

环境样品中锶-90的测定

本文叙述用二-(2-乙基已基)磷酸(HDEHP)萃取测定环境样品中锶-90的各种条件的研究,并在最佳条件下提出分析程序。锶90的含量通过HNO_3 -HDEHP-甲苯体系中溶剂萃取子体产物钇-90而获得。程序简便、快速而准确。~(85)Sr示踪的结果表明,锶回收对于生物样品是95%,对于沉降物～90%。程序在有天然放射性同位素和裂变产物存在下也是可用的。对于~(140)Ba-~(140)La,去锶、钡裂变产物,钍系的~(212)Pb-~(212)Bi,去污系数达到了10~4。样品分析的结果十分满意。显著性检验证明本方法的结果与发烟硝酸法的结果一致。本文还进一步讨论应用二-(2-乙基己基)磷酸和季胺N_(266)实现直接萃取~(90)Y而快速测定~(90)Sr的问题,提供的快速测定方法,分析生物样品时,能在二小时之内报告结果。     

果蔬中有机氯农药残留的分析测定

目的:用高效气相色谱法对蔬菜和水果中的有机氯农药残留进行测定分析.方法:称取一定量的样品,采用丙酮和乙酸乙脂(4:1)提取,旋转蒸发仪上蒸发近干,石油醚和乙酸乙脂(4:1)洗脱过柱净化,再用旋转蒸发仪蒸发近干,5ml石油醚定容,在高效气相色谱仪上进行色谱分析.结果:样品采用匀浆提取法,测定选择BPX608石英毛细管柱,柱温225℃,样品的回收率在92%-105%之间.结论:该法具有简便、快捷、准确的特点,为进一步改进测定方法提供依据.     

用日立835-50型氨基酸自动分析仪测定赖氨酸、蛋氨酸的短程序

<正> 动物体所需的十种必需氨基酸中,赖氨酸和蛋氨酸是重要的限制性氨基酸。在配合饲料,谷物良种选育及蛋白质饲料的开发利用工作中,都将高赖氨酸或高蛋氨酸做为重要指标。日立835—50型氨基酸自动分析仪测定蛋白质水解液氨基酸成份的标准程序需要72分钟,这对大量只需测定赖氨酸和蛋氨酸或两者之一的样品很不经济,既费时间,也费试剂。     

双波长薄层扫描法测定不同来源枸杞子中甜菜碱的含量

通过对枸杞子样品提取、脱色时间等前处理条件的优化,建立不同来源枸杞子中甜菜碱含量测定的双波长薄层扫描法(TLCS法)。使用快速溶剂萃取仪(ASE 350)用80%甲醇提取出枸杞子中的甜菜碱,经活性炭脱色、雷氏盐沉淀、丙酮溶解沉淀,采用改进的薄层扫描法在检测波长为530 nm,参比波长为625 nm条件下对枸杞子中的甜菜碱进行含量测定。得到清晰的薄层色谱斑点,无干扰;甜菜碱点样量在3.84~38.40μg范围内线性关系良好,r=0.9995;平均加样回收率为98.30%,RSD=2.55%(n=9)。该方法简便、准确,重现性好,适用于测定枸杞子中甜菜碱的含量测定,可为枸杞的质量控制提供依据。     

质粒DNA的酚-氯仿一步抽提法

本文介绍了一种极快速提取质粒DNA的方法。该法是对Serghini等发表的方法的改进,全过程只需用酚-氯仿混合液抽提一次,用时少,操作简便,适用于大规模筛选重组克隆子,也可直接用作转化、酶切及DNA序列测定。