大鼠肝蛋白水解酶在短间隔连续部分肝切除(SISPH)中的活性变化

以我们建立的四种短间隔连续部分肝切除模型 (shortintervalsuccessivepartialhepatectomy ,SISPH)为材料 ,分析了连续部分肝切除 (successivepartialhepatectomy ,SPH)次数和方式对大鼠肝蛋白水解酶活性的影响 ,发现依SPH的次数和方式不同 ,蛋白水解酶活性表现出诱导、增强和 /或减弱。     

短间隔连续部分肝切除(SISPH)中糖原、G-6-Pase和RNA变化分析

以 4种短间隔连续部分肝切除模型 (shortintervalsuccessivepartialhepatectomy ,SISPH)为材料 ,分析了连续部分肝切除 (succesivepartialhepatectomy ,SPH)次数和方式对肝糖原和RNA含量和分布及葡萄糖 6 磷酸酶 (G 6 Pase)活性和分布的影响 ,发现 :( 1)上述因素均可显著影响它们的活性或含量和分布 ;( 2 )肝糖原含量变化与G 6 Pase活性无显著相关性。     

连续4次(每次间隔36h)部分肝切除对大鼠肝ACP、AKP、HSC70/HSP68和PCNA的影响

在分析了连续 3次 (每次间隔 4h)部分肝切除对肝细胞生化和增殖的影响后 ,本文又以连续 4次 (每次间隔 3 6h)部分肝切除 (shortintervalsuccessivepartialhepatectomy ,SISPH)大鼠为模型 ,分析了SISPH对肝脏酸性磷酸酶 (ACP)、碱性磷酸酶 (AKP)、构成性热休克蛋白 70 /诱导性热休克蛋白 68(HSC70 /HSP68)和增殖细胞核抗原 (PCNA)活性和含量的影响。结果表明 ,第 1次切除肝的左外叶后恢复 3 6h ,ACP和AKP活性及HSC70 /HSP68和PCNA表达量均增加 ;第 2、 3、 4次分别切除左中叶和中叶、右叶、尾状叶 (每次间隔 3 6h)后 ,AP活性和PCNA含量与AKP活性和HSC70 /HSP68含量呈负相关性 ;间隔 3 6h的连续部分肝切除延缓了细胞分化时间。根据上述实验中ACP和AKP在细胞内位置和活性变化推测 :AKP和ACP可能共同参与了细胞的增殖启动 ;PCNA和AKP可能参与了DNA合成和细胞增殖 ;ACP和HSC70 /HSP68可能在蛋白质转运、选择性降解和细胞结构、功能重建中起重要作用。     

短间隔连续部分肝切除(SISPH)对大鼠肝ACP、AKP、 HSC70/HSP68和PCNA的影响

本文以间隔时间(4h和36h)相互交叉的短间隔连续部分肝切除(36-4-4 SISPH和4-36-36-36SISPH)为模型,分析了ACP、AKP、HSC70/HSP68和PCNA的活性和含量变化.结果表明140 kD的ACP和AKP活性在两种模型中都随着肝切除次数的增加而增加,而160 kD的AKP和ACP则与此相反;PCNA在4-36-36-36 SISPH中比在36-4-4SISPH中表达更多,而HSC70/HSP68的表达则与此相反.可见,连续部分肝切除的次数和方式能影响ACP、AKP、HSC70/HSP70和PCNA的活性和含量,并讨论了其可能的机理和生理意义.     

短间隔连续部分肝切除对大鼠生存和肝组织结构的影响

在部分肝切除（partial hepatectomy,PH）后的细胞激活（G0－G1）期（4h）、有丝分裂高峰期（36h）及以两者交叉方式进行连续部分肝切除（successive partial hepatectomy,SPH）,观察其对大鼠生存和肝组织结构的影响。结果表明,大鼠对短间隔（间隔4和／或36h）连续部分肝切除的耐受极限取决于各次切除的肝量和间隔时间两个因素;连续部分肝切除引起的肝组织结构紊乱程度与部分肝切除次数正相关;细胞核数、有丝分裂指数与短间隔连续部分肝切除次数和方式显现复杂的相关性。依SPH中大鼠成活率、肝组织结构变化、生理生化变化为依据,确立了4组（E、G、K和M组）适合研究肝再生分子机理的短间隔连续部分肝切除模型（short interval successive partial hepatectomy,SISPH）。     

短间隔连续部分肝切除与细胞增殖相关的TNF－α、c－myc、p53、p21、PCNA、Bcl－2、TGF－β的变化分析

为了阐明短间隔连续部分肝切除模型（SISPH）（0-4-40-76-112h)中各时段与细胞增殖的关系。本文利用Western blot技术,分别检测短间隔连续部分肝切除模型（0-4-40-76-112h)中各时段TNF-α,c-myc,p53,p21,PCNA,Bcl-2,TGF-β在体外的表达情况。结果显示：SISPH4h时,TNF-α和c-myc表达量最高,p53和PCNA表达量无明显变化;SISPH40h和76h时,p53和PCNA的表达量达到峰值,Bcl-2上调表达;SISPH112h,p53,PCNA,TGF-β表达量较对照高,Bcl-2表达较低,因此,SISPH4h时细胞由G0期进入G1期;SISPH40h和76h时细胞分裂旺盛;SISPH112h时,细胞仍然增殖,但不及40和76h旺盛,细胞凋亡增高,可能与肝组织结构重建和功能调整有关。     

影响SPH大鼠肝蛋白水解酶活性因素分析

用蛋白水解酶复性电泳技术分析了 4 3 6 3 6连续部分肝切除 ( 4 3 6 3 6successivepartialhepatectomy ,4 3 6 3 6SPH)中影响大鼠肝中性蛋白水解酶活性的因素。发现连续部分肝切除 (successivepartialhepatectomy ,SPH)的时间、SPH中营养条件、取材时间、制样条件和样品的后处理均可对大鼠中性蛋白水解酶活性产生不同程度的影响。     

皮质酮对大鼠再生肝细胞转录活性的影响

以AgNOR颗粒数为指标，研究大鼠部分肝切除后，皮质酮对余留肝细胞转录活性的影响。结果显示：部分肝切除后0～24h，各组肝细胞内(假手术、去肾上腺、去肾上腺 皮质酮)AgNOR颗粒数均下降；部分肝切除后36h，假手术鼠的AgNOR数目最多，到48h时已基本恢复到肝切除前水平；在部分肝切除后24～48h，去肾上腺鼠的AgNOR颗粒数持续升高；给去肾上腺鼠再注射剂量分别为10、20、40mg／kg体重的皮质酮，发现在36h和48h时，皮质酮剂量越高，AgNOR颗粒数日越少，且下降幅度越大。部分肝切除前12h给大鼠注射糖皮质激素受体颉颃剂——RU486(10mg／kg体重)，结果与去肾上腺鼠相似。以上结果表明：皮质酮对部分肝切除后肝细胞的转录活性具有明显的抑制作用，而且是通过受体起作用，该作用表现在部分肝切除24h之后。     

大规模鉴定大鼠 0, 4, 36, 72, 96 h 短间隔连续部分肝切除中再生肝差异表达的基因

用抑制性消减杂交方法(SSH)构建了短间隔连续部分肝切除(SISPH)再生肝的消减cDNA文库, 从中筛选出了551个与肝再生相关的基因, 把这些基因制成cDNA 微阵列(cDNA芯片), 分析它们在0 h正常肝及 4, 36, 72, 96 h再生肝中的动态变化发现, 185个基因至少在肝再生的一个时间点表达变化达2倍以上; 185个基因中的86个属未报道的基因, 99个为已报道的基因, 但在此之前尚不知道它们与肝再生有关; 185个基因中的103个在肝再生中表现上调表达, 82个表现下调表达. 用GeneMath软件和GeneSpring方法对这些基因在肝再生中的表达轮廓进行聚类分析表明, 基因的表达模式可分为8组, 即早期诱导、中期诱导、晚期诱导、持续诱导、早期抑制、中期抑制、晚期抑制和持续抑制. 与一次性部分肝切除(PH)相比, 41个基因在SISPH中特异性表达, 其他基因在两个模型中的表达趋势相同, 但在各时间点的表达丰度有差异. 综合分析可见, 抑制性消减杂交技术与基因芯片技术相结合是研究再生肝差异表达基因的有效方法; 肝再生中上调表达的基因多于下调表达的基因; 早期诱导的基因多于晚期诱导的基因; 诱导表达幅度大的基因少于诱导表达幅度小的基因.     

核仁小分子RNA

核仁小分子ＲＮＡ屈良鹄（中山大学生命科学学院生物工程研究中心广州５１０２７５）关键词核仁小分子ＲＮＡ（ｓｏｎＲＮＡ）;内含子（ｎｉｔｒｏｎ）;基因（ｇｅｎｅ）;核糖体（ｒｉｂｏｓｏｍｅ）真核生物（ｅｕｋａｒｙｏｔｅ）在真核生物细胞中,除了人们所熟悉的ｒＲＮＡ,ｍＲＮＡ和ｔＲＮＡ之外,还存在着许多小分子ＲＮＡ［１,２］,如核小分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）,核仁小分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮ）以及细胞过程中的调控活动,具有十分重要的生物学意义[3,4].     

短间隔连续部分肝切除(SISPH)中ADAMs基因表达差异分析

用ADAMs通用引物进行RT PCR ,以检测短间隔连续部分肝切除 ( 4 3 6 3 6 3 6SPH)中不同恢复时间ADAMs基因转录情况。结果表明 :( 1)ADAMs基因转录无个体和性别差异 ,也无肝再生恢复期依赖性 ;( 2 )PCR产物克隆、测序证实 ,肝脏中有MDC9同源序列存在 ;( 3 )用MDC9特异性引物PCR检测表明 ,MDC9在正常和不同恢复时期肝脏中均有一定水平转录 ,说明MDC9在肝脏正常生理活动和肝再生中起重要作用     

不同生殖期鳜肝脏超微结构变化的观察

应用透射电镜对生殖季节与非生殖季节鳜肝脏超微结构的变化进行了观察。鳜肝细胞含有单个卵圆形的核,核仁清楚;细胞质内含有粗面内质网、线粒体、糖原颗粒和脂滴等细胞器和内含物。胆小管由相邻的数个肝细胞质膜凹陷围成,而肝血窦则由内皮细胞的胞质构成。还发现了贮脂细胞、枯否氏细胞和成纤维细胞。胆小管腔和窦周隙内浸润许多由肝细胞发出的微绒毛结构。鳜肝细胞的超微结构在产卵前后呈现明显变化：产卵前的肝细胞内富含线粒体、糖原颗粒和脂滴,粗面内质网发达;而产卵后的肝细胞内核仁发生迁移,部分细胞核囊泡化,糖原颗粒和脂滴排空,少数肝细胞具双核结构。非生殖期多数肝细胞核含有双核仁结构,胞质内溶酶体数量增多。     

星星草受精作用及其胚与胚乳早期发育的观察

利用常规石蜡切片法对星星草[Puccinellia tenuiflora(Griseb．)Scribn．et Merr．]受精过程及胚与胚乳的早期发育进行了观察,主要结论如下：(1)开花后2h,花粉管破坏1个助细胞,释放2个精子,精子呈逗点状。(2)开花后2～3h,2个精子分别移向卵细胞与极核。(3)开花后3～5h,精核分别贴附于卵细胞与极核的核膜上。(4)开花后5～10h,精核与卵核融合,雄性核仁出现,合子形成。(5)开花后5～6h,精核与极核融合,并出现雄性核仁,形成初生胚乳核,精核与极核的融合比与卵核融合要快。(6)开花后20h左右,合子分裂。(7)开花后8h,初生胚乳核。     

高三尖杉酯碱对核仁的作用和心肌毒性的电子显微镜研究

高三尖杉酯碱(高杉)为治疗白血病有效药物。在超显微结构的研究中发现它除了产生一般性的细胞损伤外,还能选择性地对核仁产生刺激作用,见到核仁增大及增多。我们应用电子显微镜对肝细胞作定量观察,测定单位核体积所含核仁体积(Nu/N)的结果显示:用高杉1.5毫克/公斤腹腔注射20小时后,Nu/N显著增大,几乎为对照组肝细胞核仁的三倍,具体数值分别为0.14±0.02和0.05±0.01,统计学测验相差非常显著。同时实验组核仁数目也较对照肝细胞增加一倍左右,后者平均每核含有1.76个核仁,前者则为3.08,差别也显著。由于核仁是rRNA前体的合成部位,当核糖体蛋白质合成受抑制时,往往会经反馈作用引起核仁代偿性增大。因此,结合高三尖杉酯碱生化作用的研究,认为它可能是因为抑制了核糖体的蛋白质合成起始部位,从而导致核仁刺激作用。同时还定量分析了高三尖杉酯碱对核被表面积和厚度的影响,未见显著作用。在临床及动物实验中可见到,用高三尖杉酯碱治疗会发生心率不齐或心电图异常等变化。我们研究了它对小鼠心肌亚显微结构的变化,发现在注射1.5毫克/公斤后20小时小鼠心肌原纤维溶解,核质疏松、线粒体肿胀和肌浆网扩张等现象,如剂量增至3毫克/公斤时,Z带密度下降,局部断裂甚至消失,线粒体嵴也有些损伤。同时用另一对心脏有影响的抗癌药柔红霉素作比较,在等毒性剂量下(2.5与5毫克/公斤)所起的影响比高三尖杉酯碱严重得多。在高剂量组(5毫克/公斤)可产生空斑、肌纤维严重稀疏、线粒体破碎,Z带损伤,肌细胞广泛空泡化现象,毛细血管或细胞间质中出现纤维样物质等。这些变化可以说明临床和实验治疗所观察到的心肌毒性表现。     

高三尖杉酯碱对核仁的作用和心肌毒性的电子显微镜研究

高三尖杉酯碱(高杉)为治疗白血病有效药物。在超显微结构的研究中发现它除了产生一般性的细胞损伤外,还能选择性地对核仁产生刺激作用,见到核仁增大及增多。我们应用电子显微镜对肝细胞作定量观察,测定单位核体积所含核仁体积(Nu/N)的结果显示:用高杉1.5毫克/公斤腹腔注射20小时后,Nu/N 显著增大,几乎为对照组肝细胞核仁的三倍,具体数值分别为0.14±0.02和0.06±0.01,统计学测验相差非常显著。同时实验组核仁数目也较对照肝细胞增加一倍左右,后者平均每核含有1.76个核仁,前者则为3.08,差别也显著。由于核仁是rRNA 前体的合成部位,当核糖体蛋白质合成受抑制时,往往会经反馈作用引起核仁代偿性增大。因此,结合高三尖杉酯碱生化作用的研究,认为它可能是因为抑制了核糖体的蛋白质合成起始部位,从而导致核仁刺激作用。同时还定量分析了高三尖杉酯碱对核被表面积和厚度的影响,未见显著作用。在临床及动物实验中可见到,用高三尖杉酯碱治疗会发生心率不齐或心电图异常等变化。我们研究了它对小鼠心肌亚显微结构的变化,发现在注射1.5毫克/公斤后20小时小鼠心肌原纤维溶解,核质疏松、线粒体肿胀和肌浆网扩张等现象,如剂量增至3毫克/公斤时,Z 带密度下降,局部断裂甚至消失,线粒体嵴也有些损伤。同时用另一对心脏有影响的抗癌药柔红霉素作比较,在等毒性剂量下(2.5与5毫克/公斤)所起的影响比高三尖杉酯碱严重得多。在高剂量组(5毫克/公斤)可产生空斑、肌纤维严重稀疏、线粒体破碎,Z 带损伤,肌细胞广泛空泡化现象,毛细血管或细胞间质中出现纤维样物质等。这些变化可以说明临床和实验治疗所观察到的心肌毒性表现。     

哺乳类动物脑垂体前叶细胞核仁外移及其进入血窦中的观察

(1)用35只不同年龄的家兔(自15天胚胎到2年余)和8个不同年龄的人(自出生到8岁)的脑垂体为材料,用石蜡切片法切成4微米厚的连续切片,用五种不同的染色法(包括富尔根氏染色法和甲绿和派啷咛方法),观察脑垂体前叶中实质细胞核仁外移的现象。 (2)9只不同年龄的家兔的脑垂体前叶,用铁苏木精明矾和玛罗里复染在切片上计数了其中实质细胞的数目和有核仁移出的细胞数目,发现有核仁移出的细胞的数目平均占细胞总数的21.8%。 (3)凡有核仁外移的细胞,绝大部分为嫌色细胞,而在嗜色细胞中,尤其是在嗜酸性的细胞中极少见到这种现象,因此核仁外移和细胞的种类之间存在着一定的关系。 (4)一部分外移的核仁能穿过脑垂体前叶的血窦而进入血流中。在小的血窦中通常仅可见一个核仁,但在大的血窦中,尤其是在边缘的海绵窦中往往有成群的核仁。这种进入血窦中的核仁可能与脑垂体前叶的分泌活动有关。     

肝细胞生长因子的生物学功能与应用

肝细胞生长因子 (ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＨＧＦ)又称扩散因子 (Ｓｃａｔｔｅｒｆａｃａｔｏｒ,ＳＦ) ,最初是从血浆和血小板中纯化获得并认为是一种刺激肝细胞生长增生的有丝分裂原 ,对肝切除或化学损伤后的肝再生起重要作用[1] 。 1984年 ,Ｎａｋａｍｕｒａ等从部分肝切除的大鼠血清中分离到一种能刺激原代培养的肝细胞生长和合成的肝源性因子 ,并首次将它命名为肝细胞生长因子[2 ] 。自从ＨＧＦ的发现至今 ,国内外对其作了许多研究 ,对它的来源、结构、功能乃至基因序列都已有了较为全面、透彻的了解。目前已知Ｈ…     

一例硬皮病人自发抗核仁抗体的免疫荧光及其与银染的比较研究

从硬皮病人血清中筛选出一例含有自发抗核仁抗体的血清,利用这个血清对核仁抗原的性质及其在细胞中随分裂周期不同产生的分布变化做了初步研究,并把结果与核仁嗜银蛋白做了比较。间接免疫荧光染色及细胞化学分析表明,这种核仁抗原的性质是蛋白质,其分布与嗜银蛋白相似,在间期,抗原呈颗粒状簇集在核仁中,而在分裂中期,抗原颗粒与染色体NORs部位接合,但有证据指出,这种抗原蛋白与核仁嗜银蛋白有所不同,同时还发现,经长时间秋水仙素处理诱导产生微核化的多核细胞中尽管微核的数目远多于细胞中NORs的数目,免疫荧光染色和银染都显示出每个微核中类核仁小体的存在。这说明(1)类核仁小体也是由核仁物质构成;(2)某些类核仁小体的产生可能与NORs无关。对这个现象的意义进行了讨论。     

湛江隐藻(Cryptomonas zhanjiangis Hu et Li)核形体的细胞化学研究

隐藻类的核形体,是存在于其质体周腔内的一个特殊细胞器。除DNA和RNA外,核形体是否含有碱性蛋白,有无核仁或核仁结构成份,以及其功能如何,国内外迄今未见报道。我们用4-6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)荧光染色法、Uranyl acetate-EDTA-Lead染色法、碳酸氨银染色法(AS)和特异性显示核仁纤维区酸性蛋白的Ag-NOR银染法,分别在光镜和电镜下对湛江隐藻(Cryptomonas zhanjianagis Hu et Li)进行了核形体细胞化学的研究。除证实核形体中DNA、RNA和极少量碱性蛋白存在外,还首次证实了核形体中类似于核仁纤维区的酸性蛋白的存在。我们认为,隐藻的核形体,作为一个恒定的细胞结构和退化的细胞核残迹,在漫长的演化过程中可能较多地保留了核仁部分而较少地保留了其核质部分。其功能可能与隐藻色素复合体中某些蛋白质的合成有关。     

玉米rRNA基因的组织和表达模式

玉米(Zea mays)只有1对45S rDNA位点并在分裂期染色体形成次缢痕, 是研究植物细胞rRNA基因组织和表达模式的简单模型。采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)、CPD(PI与DAPI组合)染色和银染技术, 分析了玉米根尖分生细胞rRNA基因的组织和表达模式。45S rDNA探针在所有间期细胞核中显示2种杂交信号: 荧光强烈地位于核仁周边的纽, 而相对较弱地分布于核仁内的点。在部分细胞中可观察到点与纽相连或从纽发出; 点的数目越多, 纽变得越小; 点的数目多少与细胞的活性呈正相关。研究结果表明, 纽代表了处于凝缩状态的非活性的rDNA染色质, 纽解凝缩形成的点是rRNA基因活跃转录的细胞学表现; 不同阶段间期核的点的数目变化反映了被活化的rRNA基因数目不同。间期和前期细胞的CPD染色和相继的银染结果显示, 大部分rDNA染色质没有参与核仁的形成。rDNA FISH显示, 同一间期细胞的2个同源rDNA位点的表达水平存在差异, 同源染色体次缢痕的长度差异以及Ag-NOR和银染核仁的异态性进一步证实了这种差异的存在。FISH结果显示, 早中期细胞的rDNA染色质相对解凝缩, 银染在所有早中期细胞和部分中期细胞显示了明显的核仁, 表明玉米的rRNA基因在有丝分裂早中期有较活跃的转录, 其转录在晚中期才停止。