大鼠肝蛋白水解酶在短间隔连续部分肝切除(SISPH)中的活性变化

以我们建立的四种短间隔连续部分肝切除模型 (shortintervalsuccessivepartialhepatectomy ,SISPH)为材料 ,分析了连续部分肝切除 (successivepartialhepatectomy ,SPH)次数和方式对大鼠肝蛋白水解酶活性的影响 ,发现依SPH的次数和方式不同 ,蛋白水解酶活性表现出诱导、增强和 /或减弱。     

短间隔连续部分肝切除(SISPH)对肝细胞核和核仁的影响

以建立的 4种短间隔连续部分肝切除模型 (shortintervalsuccessivepartialhepatectomy ,SISPH)为材料 ,分析了连续部分肝切除 (successivepartialhepatectomy ,SPH)次数和方式对大鼠肝细胞核和核仁的体积、数目影响 ,证实了肝细胞核和核仁的大小、数目变化与SISPH的次数和方式正相关。     

连续4次(每次间隔36h)部分肝切除对大鼠肝ACP、AKP、HSC70/HSP68和PCNA的影响

在分析了连续 3次 (每次间隔 4h)部分肝切除对肝细胞生化和增殖的影响后 ,本文又以连续 4次 (每次间隔 3 6h)部分肝切除 (shortintervalsuccessivepartialhepatectomy ,SISPH)大鼠为模型 ,分析了SISPH对肝脏酸性磷酸酶 (ACP)、碱性磷酸酶 (AKP)、构成性热休克蛋白 70 /诱导性热休克蛋白 68(HSC70 /HSP68)和增殖细胞核抗原 (PCNA)活性和含量的影响。结果表明 ,第 1次切除肝的左外叶后恢复 3 6h ,ACP和AKP活性及HSC70 /HSP68和PCNA表达量均增加 ;第 2、 3、 4次分别切除左中叶和中叶、右叶、尾状叶 (每次间隔 3 6h)后 ,AP活性和PCNA含量与AKP活性和HSC70 /HSP68含量呈负相关性 ;间隔 3 6h的连续部分肝切除延缓了细胞分化时间。根据上述实验中ACP和AKP在细胞内位置和活性变化推测 :AKP和ACP可能共同参与了细胞的增殖启动 ;PCNA和AKP可能参与了DNA合成和细胞增殖 ;ACP和HSC70 /HSP68可能在蛋白质转运、选择性降解和细胞结构、功能重建中起重要作用。     

短间隔连续部分肝切除(SISPH)中糖原、G-6-Pase和RNA变化分析

以 4种短间隔连续部分肝切除模型 (shortintervalsuccessivepartialhepatectomy ,SISPH)为材料 ,分析了连续部分肝切除 (succesivepartialhepatectomy ,SPH)次数和方式对肝糖原和RNA含量和分布及葡萄糖 6 磷酸酶 (G 6 Pase)活性和分布的影响 ,发现 :( 1)上述因素均可显著影响它们的活性或含量和分布 ;( 2 )肝糖原含量变化与G 6 Pase活性无显著相关性。     

短间隔连续部分肝切除(SISPH)中ADAMs基因表达差异分析

用ADAMs通用引物进行RT PCR ,以检测短间隔连续部分肝切除 ( 4 3 6 3 6 3 6SPH)中不同恢复时间ADAMs基因转录情况。结果表明 :( 1)ADAMs基因转录无个体和性别差异 ,也无肝再生恢复期依赖性 ;( 2 )PCR产物克隆、测序证实 ,肝脏中有MDC9同源序列存在 ;( 3 )用MDC9特异性引物PCR检测表明 ,MDC9在正常和不同恢复时期肝脏中均有一定水平转录 ,说明MDC9在肝脏正常生理活动和肝再生中起重要作用     

短间隔连续部分肝切除对大鼠生存和肝组织结构的影响

在部分肝切除（partial hepatectomy,PH）后的细胞激活（G0－G1）期（4h）、有丝分裂高峰期（36h）及以两者交叉方式进行连续部分肝切除（successive partial hepatectomy,SPH）,观察其对大鼠生存和肝组织结构的影响。结果表明,大鼠对短间隔（间隔4和／或36h）连续部分肝切除的耐受极限取决于各次切除的肝量和间隔时间两个因素;连续部分肝切除引起的肝组织结构紊乱程度与部分肝切除次数正相关;细胞核数、有丝分裂指数与短间隔连续部分肝切除次数和方式显现复杂的相关性。依SPH中大鼠成活率、肝组织结构变化、生理生化变化为依据,确立了4组（E、G、K和M组）适合研究肝再生分子机理的短间隔连续部分肝切除模型（short interval successive partial hepatectomy,SISPH）。     

麻醉对大鼠应激反应的影响

用40、42、44℃分别处理清醒状态和麻醉状态大鼠30min,于正常饲养条件下恢复24h后,检测其肝脏热休克蛋白70（HSP70）的表达差异及酸性和中性蛋白水解酶活性变化。结果表明,当热休克温度为40-44℃时,清醒状态大鼠肝脏的HSP70合成能力逐渐下降,而麻醉大鼠肝脏HSP70合成能力逐渐增加,在42℃热休克条件下,麻醉状态大鼠肝脏的酸性蛋白水解酶活性最强,在44℃热休克条件下,清醒状态大鼠肝脏的酸性蛋白水解酶活性最强,在40-44℃热休克条件下,麻醉状态和清醒状态大鼠肝脏的45kD中性蛋白水解酶活性与对照相似,但40kD的中性蛋白水解酶活性随热休克温度升高而降低,另外,40℃热休克诱导麻醉状态大鼠肝脏出现一个高活性的35kD中性蛋白水解酶,根据实验结果推测,麻醉状态大鼠肝脏的热耐受性大于清醒大鼠,大鼠的热休克反应受整体水平和细胞水平的双重调控,并涉及除HSP70合成以外的其他生化活动。     

大鲵（Andrias davidianus）4种生殖器官的蛋白水解酶种类和活性分析

用蛋白水解酶活性电泳方法（G-PAGE）分析了大鲵卵巢,输卵管,精巢,输精管的蛋白水解酶种类和活性,结果表明：1）精巢和输精管的蛋白水解酶种类（分子量）相似,活性有差异。主要的蛋白水解酶分子量为240,85,73,61,51,42,37和23kD;2）输精管的蛋白水解酶在碱性条件下活性最强,在中性条件下活性次之,在酸性条件下活性最弱。精巢的蛋白水解酶在中性和碱性条件下活性相似,在酸性条件下活性很弱,推测精巢蛋白水解酶活性的最适pH为中性,输精管蛋白水解酶活性的最适pH为碱性;3）卵巢和输卵管的蛋白水解酶种类（分子量）相似,主要的蛋白水解酶分子量为73、61、51和37kD,它们在酸性条件下活性最强,在中性条件下几乎无活性,推测它们活性的最适pH为酸性;4）与卵巢和输卵管相比,精巢和输精管的蛋白水解酶种类多,活性强,活性的最适pH高,推测这种差别可能有利于受精和发育中所需的蛋白水解酶快速灭活或活化。     

离子束介导玉米DNA影响水稻幼苗根系蛋白水解酶的表达

利用离子束介导法把玉米DNA导入水稻豫粳6号种子胚中,通过复性电泳技术,分析水稻幼苗根系中蛋白水解酶在pH4.5、pH7.0和pH8.5的表达情况.结果表明:(1)在不同pH条件下处理,各蛋白水解酶种类与活性存在差异,酸性、中性、碱性条件下,检到的蛋白水解酶酶带依次增多,酸性条件下酶活性较弱,中性和碱性条件下酶活性较强;(2)在3种pH条件下,离子束辐照处理均有部分蛋白水解酶带缺失,同时,在中性和碱性条件下检出50kD新酶带,说明离子束辐照可影响水稻蛋白水解酶表达;(3)离子束介导玉米DNA水稻幼苗根系中,pH4.5时无新蛋白水解酶酶带检出,pH7.0和pH8.5时均检到多条新酶带且活性较强.说明离子束介导玉米DNA引起水稻幼根蛋白水解酶表达发生变化.     

离子交换层析初步分离大鼠肝蛋白水解酶、ADAMs、ACP、AKP和PCNA

用DEAE 离子交换层析法分离 2 /3肝切除 ( partialhepatectomy ,PH)后恢复 4、 3 6和 14 4h的大鼠再生肝及正常肝的蛋白水解酶、ADAMs、ACP、AKP和PCNA ;用SDS PAGE、Western blot、酶复性电泳等方法 ,分析了它们在不同洗脱段中的分布及活性变化 ,为分离与肝再生有关的蛋白 (酶 )提供了资料。     

热休克蛋白、蛋白水解酶和磷酸酶在大鼠肝再生中的含量和活性变化

本文以２／３肝切除（ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ,ＰＨ）大鼠为模型,探讨了ＰＨ后酸性和碱性磷酸酶（ａｃｉｄ ａｎｄ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ,ＡＣＰ和ＡＫＰ）,构成性热休克蛋白７０／诱导性热休克蛋白６８（ＨＳＣ７／ＨＳＰ６８）,酸性和中性蛋白水解酶在肝再生期间（０－１４４ｈ）的动态变化。结果显示,在肝切除后的肝再生期间;（１）ＡＣＰ和ＡＫＰ均出现两个活性高峰（４和４８ｈ     

五种黄精属植物的蛋白水解酶谱研究

用蛋白水解酶复性电泳方法 (G- PAGE)分析了 5种黄精属植物根状茎和叶的蛋白水解酶的种类和活性。结果表明 :(1)它们的根状茎均含有 85k D和 55k D的蛋白水解酶 ;叶均含有 82 k D的蛋白水解酶 ;(2 )根状茎和叶的蛋白水解酶种类和活性有很大差异 ,叶的蛋白水解酶活性为根状茎的 10倍 ,它们的活性均受 p H影响 ,其最适 p H为 7;(3)每种植物都含有自己特有蛋白水解酶 ;(4 )蛋白水解酶在植物鉴定中有参考价值     

猕猴神经系统器官蛋白水解酶种类和性质研究

实验以太行山猕猴为材料，用活性电脉（Ｇ－ＰＡＧＥ）方法分析研究了神经系统中蛋白水解酶的种类、活性及ｐＨ依赖性，结果表明：（１）神经系统各部分均具有３１、３０、２９ｋｕ三种酸性蛋白水解酶；（２）９４ｋｕ的中性蛋不解酶普遍存在于神经系统各器官中；（３）在中性和碱性条件下，坐骨神经中蛋白水解酶活性较强，其余部分生微弱。     

固氮鱼腥藻的蛋白水解酶及其部分性质的研究

应用溶菌酶处理,超声破碎细胞,通过差异离心和解离剂处理,将细胞的不同部分分开。以水解α-酪蛋白反应检测蛋白水解酶活性,结果表明,在细胞的可溶部分、内细胞质膜、外膜及胞浆周围区均存在蛋白水解酶活性。异形胞可溶部分的蛋白酶活比营养细胞可溶的蛋白酶活高4—5倍。在固氮条件下,营养细胞可溶性蛋白酶反应最适温度为50—55℃,65℃时,酶活迅速下降。有Ca^2 5mmol／l时,蛋白酶在60℃稳定,无Ca^2 存在下,酶液在60℃预处理10分钟,酶活性丧失80％以上。酶反应的最适pH为8—10。而且氮饥饿之后,培养基的pH值对细胞蛋白酶活水平有明显影响,氮饥饿24小时内,蛋白酶活迅速增加,但在碱性条件下,酶活水平比在中性条件下要高得多。邻菲哕啉对蛋白酶活性有严重的抑制,EDTA仅有轻微抑制,而PMSF对细胞蛋白酶活的抑制作用,与细胞氮饥饿时间有关。     

大鼠再生肝中hsbp1、hsf1、hsf2、shp70表达水平改变的分析

在克隆了大鼠热休克因子结合蛋白1基因（hsbp1）全长cDNA基础上,进一步分析它在肝再生中作用。用SD纯系大鼠为材料。按Higgens等方法建立大鼠部分肝切除（PH）模型;用原位杂交等方法分析凤6pJ在肝再生中表达变化;用基因表达谱芯片分析凤如1、hsf1、如,2和hsp70在肝再生中表达变化。原位杂交和基因表达谱芯片分析表明。PH后6h和66-144h,hsbp1表达发生了有意义上调;8-16h,nsf1表达发生了有意义上调;2-16h,hsf2表达发生了有意义上调;0．5—24h,hsp70表达发生了有意义上调。假手术（只打开腹腔和翻动肝叶。但不进行部分肝切除）后0．5-2h,hsbp1表达发生了有意义下调;8—16h,hsf1表达发生了有意义上调;0—144h,hsf2未发生有意义表达变化;0．5—30h,hsp70表达发生了有意义上调。根据实验结果推测,PH后hsbp1表达上调可增加细胞内HSBP1量。促进生长、发育、分化相关基因表达和再生肝的组织结构功能重建;（假）手术后hsbp1表达下调可减少细胞内HSBP1量,有利于HSF1上调hsp70表达,提高机体和肝脏抗损伤能力。     

大鼠肝生长发育过程中蛋白水解酶和ADAMs的变化

用SDS-PAGE、SDS-G-PAGE、Western等方法研究了大鼠肝从胚胎到成体生长发育过程中酸性,中性和碱性蛋白水解酶和ADAMs变化。结果表明：30和32kD酸性蛋白水解酶在开始吃奶和出生后第五周各出现一个活性高峰;75/80kD酸性蛋白水解酶仅在出生后第三周有活性,71和75kD的中性蛋白酶在出生后第三周活性最强：15kD碱性蛋白水解酶在开始吃奶时有活性,75kD的ADAMs在出生前至出生后第20天和出生后第四周到成体的含量呈两次正态分布;40kD的ADAM主要在胚胎肝和吃奶时检测到,但30kDADAMs主要出现在吃饲料以后各个时期,50/47、73和140kDMDC15变化和75kD的ADAM相似,30kD的MDC15仅出现在出生后15-35天的肝脏内,58kD的MDC15主要在出生后7-45天之间,实验表明,营养来源和方式能有效影响肝脏的生理生化过程,揭示营养,肝功能,生长发育的密切关系。     

大鼠再生肝抗CCl4损伤与其线粒体呼吸活性变化的关系

本工作观察了肝部分切除(68%)后96h 大鼠再生肝的抗 CCl_4损伤作用,并用氧电极法测定了再生肝线粒体的呼吸活性。结果如下: (1)CCl_4(50%,10ml/kg)引起的动物死亡率,肝切除组大鼠较假手术组明显降低;(2)CCl_4(50%,5 ml/kg)损伤后,肝切除组大鼠血清胆红素、血清谷丙转氨酶(sGPT)均明显低于假手术组,组织学检查损伤程度也明显减轻;(3)无论是否伴有 CCI_1损伤,肝切除组大鼠肝线粒体的呼吸活性均强于假手术组,且肝线粒体呼吸活性的变化与血清胆红素、sGPT 及肝组织损伤程度的改善是一致的。上述结果提示:再生肝线粒体呼吸活性增高,同时不易受 CCl_4损伤,可能在再生肝抗 CCl_4损伤机制中起一定作用。     

外源精胺、亚精胺作用下离体小麦叶片-老化过程中蛋白水解酶活性和内源精胺、亚精胺含量的变化(简报)1

外源精胺、亚精胺明显抑制离体小麦叶片老化过程中蛋白水解酶活性上升;小麦叶片老化期间内源精胺、亚精胺含量逐渐下降,与蛋白水解酶活性升高对应。     

皮肤癣菌体外蛋白水解酶活性测定

目的观察皮肤癣菌的体外蛋白水解酶活性;比较分离自不同感染部位的红色毛癣菌的体外蛋白水解酶活性。方法实验菌株包括来自不同感染部位的红色毛癣菌22株、须癣毛癣菌3株、犬小孢子菌5株,进行体外培养,并利用9-羟基乙酚噻唑标识的酪蛋白和酶标仪检测真菌细胞外蛋白水解酶的活性。结果须癣毛癣菌的体外蛋白水解酶活性高于红色毛癣菌和犬小孢子菌（P〈0.05）,而红色毛癣菌和犬小孢子菌之间无差异（P〉0.05）。红色毛癣菌的细胞外蛋白水解酶活性在分离自浅部感染部位的菌株之间无差异（P〉0.05）,但高于引起毛癣菌肉芽肿的菌株（P〈0.05）。结论不同的皮肤癣菌体外蛋白水解酶活性可能不同;分离自不同感染部位的同一菌种的体外蛋白水解酶活性也有可能不同。     

外源精胺、亚精胺作用下离体小麦叶片老化过程中蛋白水解酶活性和内源精胺、亚精胺含量的变化(简报)

外源精胺、亚精胺明显抑制离体小麦叶片老化过程中蛋白水解酶活性上升 ;小麦叶片老化期间内源精胺、亚精胺含量逐渐下降 ,与蛋白水解酶活性升高对应