钙／钙调素依赖性蛋白激酶对17.7kD和6kD胰腺蛋白的磷酸化

本文报导了胰腺提取物中两种可被钙／钙调素依赖性蛋白激酶磷酸化的热稳定蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其表观分子量分别为１７．７ｋＤ和６ｋＤ。经钙／钙调素依赖性蛋白激酶磷酸化后,其最大磷酸参入最为８．８μｍｏｌ／ｇ蛋白。同时磷酸化作用导致１７．７ｋＤ蛋白在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中迁移率发生变化。本文还进一步分析了各种阳离子对磷酸化的影响,并对此两种蛋白可能的生理功能进行了初步探讨。     

大豆下胚轴可溶性蛋白中钙激活的蛋白激酶

大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍ ａｘ Ｌ．） 下胚轴可溶性蛋白提取液进行自磷酸化，以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析其标记产物时发现，当有较高浓度的Ｃａ２＋ 存在于反应液中时，有一条１８ ｋＤ蛋白带被高强度标记，同时也可观察到另一条标记强度不高的６７ ｋＤ蛋白带． 当反应时间延长到１５ 或３０ｍ ｉｎ 时，它们的标记强度都逐渐减弱，最终从放射自显影底片上消失；在反应液中加入钙螯合剂ＥＧＴＡ 时，则只有６７ ｋＤ 被高强度标记；在磷酸化反应过程中加入非标记ＡＴＰ，蛋白中的３２Ｐ逐渐被非标记磷取代，表明反应体系处于磷酸化－脱磷酸化的平衡过程中，并有结果显示这一过程是钙依赖性的． 组蛋白Ｈ１ 可以使反应进程加快，表明提取液中的蛋白激酶可以利用它作为底物． 综合结果表明，１８ ｋＤ和６７ ｋＤ蛋白可能是具有自磷酸化能力且对Ｃａ２＋ 敏感的蛋白激酶，它们对Ｃａ２＋ 的不同反应，使得钙信号的传递更具可控性     

大豆叶片质膜蛋白激酶的自身磷酸化反应

利用Ｆｅｒｒｅｌｌ和Ｍａｒｔｉｎ设计的测定印迹在ＰＶＤＦ膜上的蛋白激酶活性方法研究大豆叶片质膜蛋白激酶自身磷酸化反应活性,结果表明：与Ｍｇ－ＡＴＰ相比,Ｍｎ－ＡＴＰ是更有效的５７ｋＤ蛋白激酶自身磷酸化反应底物;钙离子可以促进该激酶的自身磷酸化反应活性,而且ＥＧＴＡ可以显著降低它在ＳＤＳ电泳中的迁移率,说明５７ｋＤ蛋白激酶为依赖于钙的蛋白激酶;     

甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物RNA3序列分析及编码25kD蛋白基因在大肠杆菌中的表达

以甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）内蒙分离物的总ＲＮＡ为模板,通过反转录－ＰＣＲ扩增获得ＢＮＹＶＶＲＮＡ３全长ｃＤＮＡ。将其克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）上,得到重组质粒ｐＧＢＹ５６。序列分析结果表明,内蒙分离物ＲＮＡ３基因组全长为１７７５ｎｔ,其中包含３个开放阅读框架,分别编码２５ｋＤ蛋白、４．６ｋＤ蛋白和一种由５９个氨基酸组成的Ｎ蛋白。与法国Ｆ２分离物、德国Ｇ１分离物和日本Ｓ分离物相比,其核苷酸序列的同源性分别为９６．４％、９６．８％和９７．３％。将２５ｋＤ蛋白编码基因克隆到ｐＪＷ２上,构建了该基因的原核表达载体。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析结果表明,２５ｋＤ蛋白基因在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中经温度（４２℃）诱导后,可特异地表达２５ｋＤ蛋白     

菠菜光系统Ⅱ天线组分CP29的分离及其性质

菠菜放氧的光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）核心复合物经０．８ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）洗涤后,用温和的非离子去垢剂ＤＭ和高浓度的ＬｉＣｌＯ４增溶,再经ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ－６５０Ｓ离子交换柱层析分离,可得到ＰＳⅡ天线组分中的叶绿素α／ｂ结合蛋白（ＣＰ２９）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条３０ｋＤ蛋白质带。根据Ａｒｎｏｎ法和Ｍａｒｋｗｅｌｌ法的结果表明,每个蛋白质分子结合有７～８个分子的叶绿素α和２～３     

兔阑尾中一种新的21kD的钙结合蛋白的纯化与鉴定

纯化与鉴定了Ｂ淋巴细胞中一种新的分子量为２１ｋＤ的钙结合蛋白（ＣａＢＰ２１）。兔阑尾淋巴细胞匀浆经热变性,Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ与ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析,自每１ｋｇ细胞沉积物中获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的ＣａＢＰ２１５．３ｍｇ。ＨＣｌ水解后的酸性氨基酸（Ａｓｐ＋Ｇｌｕ）含量为２６％。如同大多数钙结合蛋白一样,Ｎ末端封闭阻止其进行Ｅｄｍａｎ降解。ＣａＢＰ２１中疏水性氨基酸（计Ｇｌｙ,不计Ｔｒｐ）约占４６％,碱性氨基酸１０％,酸性氨基酸与极性氨基酸约４４％。ＣａＢＰ２１有较高的Ｓｅｒ、Ｔｙｒ含量。肽谱分析等确证ＣａＢＰ２１为２个相同或相似亚基二聚体。以ＡｒｓｅｎａｚｏⅢ作Ｃａ２＋结合分析表明每分子ＣａＢＰ２１可结合４分子Ｃａ２＋,对Ｃａ２＋的结合常数约为１０－５ｍｏｌ／Ｌ。各种性质表明ＣａＢＰ２１是一种不同于其他已知钙结合蛋白的新钙结合蛋白。     

精-甘-天冬-丝氨酸四肽对二磷酸腺苷诱导大鼠血小板活化的信号转导的影响

本工作在二磷酸腺苷（ＡＤＰ）活化的大鼠血小板上,观察精－甘－天冬－丝上肽（ＲＧＤＳ肽）对血小板聚集、蛋白磷酸化、蛋白激酶Ｃ和丝裂素活化蛋白激酶活性的影响。结果发现,５０μｍｏｌ／ＬＡＤＰ引起血小板聚集时,蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ０及丝裂经蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性增加,并引起９５和６６ｋＤ蛋白磷酸化。应用５０,１００和２００μｍｏｌ／ＬＲＧＤＳ肽与基共同孵育,呈浓度依赖地抑制ＡＤＰ引起的血小板聚集和对ＰＫ     

光系统Ⅱ核心天线CP43的纯化及性质

菠菜放氧的ＰＳＩＩ核心复合物经０．８ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）洗涤后,用温和的非离子去垢剂ＤＭ和高浓度的ＬｉＣｌＯ４增溶,再经ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ－６５０Ｓ离子交换柱层析分离,可得到ＰＳＩＩ核心天线４３ｋＤ叶绿素ａ结合蛋白（ＣＰ４３）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条４３ｋＤ蛋白质带。根据Ａｒｎｏｎ法和Ｍａｒｋｅｗｌｌ法的结果表明,每个蛋白质分子结合２０～２１个分子的叶绿素ａ。室温条     

癫痫大鼠与正常大鼠脑中钙调神经磷酸酶及其底物的研究

报道了听源性癫痫大鼠发作后其脑内钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ,ＣａＮ）及其底物蛋白磷酸化水平的改变,以ＰＮＰＰ为底物测ＣａＮ的活力,用间接ＥＬＩＳＡ测ＣａＮ的含量,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和２－Ｄ－ＰＡＧＥ并放射自显影的方法研究脑内蛋白质磷酸化水平,发现与正常大鼠相比,听源性癫痫大鼠发作后,脑内ＣａＮ的含量并没有改变,但比活力下降,其底物的磷酸化状态也有改变,其中一个３０ｋＤ蛋白磷酸化程度明显降     

白芷细胞外21kD钙调素结合蛋白的生理功能初探

利用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００及ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析法,从白芷悬浮培养细胞的胞外盐提液中纯化了２１ｋＤ钙调素结合蛋白（２１ｋＤ ＣａＭＢＰ）,测其等电点的ｐＨ为８．９,紫外薄层扫描显示其纯度达９４％以上,以此蛋白为抗原,用免疫小鼠得水法制备了特异性抗体。由纯化的２１ｋＤ ＣａＭＢＰ及其特异性抗体研究其对白芷悬浮培养细胞增殖的影响,结果表明：加入外源纯化的２１ｋＤ ＣａＭＢＰ抑制细胞增殖,     

红苋P104种子谷蛋白的电泳分析

通过单向不平变性聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和双向电泳（ＩＥＦ×ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析了红苋Ｒ１０４种子谷蛋白的亚基组成,亚其分子量和等电点分布。谷蛋白的双向电泳图谱可分辨出１００多个亚基成分,其主要亚基为：５４ｋＤ（ｐＩ７．１５）;３３ｋＤ（ｐＩ５．８２）;３１ｋＤ（ｐＩ６．９２;ｐＩ６．７０;ｐＩ６．６５）;２２ｋＤ（ｐＩ８．３４）;２     

系统感染TMV的番茄叶胞外β-1,3-葡聚糖酶

系统感染ＴＭＶ （ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）叶胞外蛋白提取液经冰冻干燥浓缩、－ ２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５凝胶层析纯化,获得ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明,它包含分子量为３６ ｋＤ 和２７ ｋＤ的两个同工酶．以昆布多糖为底物,酶的最适ｐＨ 在４．８—５．２之间,在ｐＨ ４—８稳定;酶的最适温度在３０—４０℃之间,在４０℃保温１ｈ 后酶活性不变;Ｋｍ 值为９．２ ｍ ｇ／ｍ Ｌ．在系统感染ＴＭＶ 的番茄叶胞外蛋白提取液中,有分子量为２２ ｋＤ、２７ ｋＤ和３６ ｋＤ的３个β－１,３－葡聚糖酶同工酶     

植物28kD蛋白的纯化及部分性质研究

经丙酮粉、硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析等方法,首次从玉米花粉细胞质粗提物中纯化了一种具有ＡＴＰａｓｅ活性的可溶性蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量为２８ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点为８．３。免疫印迹鉴定结果表明该酶蛋白与抗牛脑动蛋白或动力蛋白的抗体无免疫交叉反应。最大紫外吸收波长为２７８ｎｍ,并作了ＣＤ谱分析。底物特异性研究表明：ＡＴＰａｓｅ水解活性最高。药理学研究表明：该酶蛋白可被矾酸钠强烈抑制,但对ＮＥＭ基本不敏感,氟化钠可使酶活力丧失５０％左右,寡霉素、硝酸钾及乌本苷对酶活力没有抑制作用．     

人胎肺细胞的条件化培养液中两种类型纤溶酶原活化物的分离

用正常人胎肺细胞体外培养,从其培养液中分离纤溶酶原活化物（ＰＡ）,通过ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０层析,硫酸铵沉淀和Ｆｉｂｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ,Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤等步骤,从１０．５ｌ条件培养液中分离纯化得到两种类型的纤溶酶原活化物,ｔ－ＰＡ９０μｇ,ｕ－ＰＡ８００μｇ．在还原条件下ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均显示单带,分子量ｔ－ＰＡ为７２ｋＤ,ｕ－ＰＡ为５４ｋＤ,纤溶比活分别为１５６０００ＩＵ／ｍｇ蛋白和１０６０００ＩＵ／ｍｇ蛋白．     

脑缺血及复灌中胞浆50kD蛋白反磷酸化变化

目的和方法：采用蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎（ＢＣＡＯ） 前脑缺血／复灌模型,通过放射性自显影,观察脑缺血及复灌时胞浆５０ ｋＤ等蛋白在有Ｃａ２ ＋／ＣａＭ 及无Ｃａ２ ＋／ＣａＭ 两种反应条件下反磷酸化（ｂａｃｋｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ） 水平的变化。结果：缺血后,总蛋白激酶介导的５０ ｋＤ蛋白反磷酸化水平逐渐下降,其中,Ｃａ２＋／ＣａＭ 依赖性蛋白激酶介导的５０ ｋＤ蛋白反磷酸化水平逐渐下降,而Ｃａ２＋／ＣａＭ 非依赖性蛋白激酶介导的５０ ｋＤ 蛋白反磷酸化水平逐渐上升;复灌后,上述变化均逐渐有所恢复。结论：脑缺血时,５０ ｋＤ 蛋白在体磷酸化水平逐渐增强,蛋白激酶活性由Ｃａ２ ＋／ＣａＭ 依赖性向Ｃａ２ ＋／ＣａＭ 非依赖性转化,复灌后上述变化均有所恢复     

亲和层析纯化HepG_2细胞分泌的PAI－1

本文报道用抗ＰＡＩ－１单克隆抗体（ＭｃＡｂ）亲和层析建立了纯化ＰＡＩ－１的简便方法。经免疫亲和层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００凝胶过滤,从ＨｅｐＧ２细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的ＰＡＩ－１,回收率为８４％,ＰＡＩ－１比活性６．１×１０４ＩＵ／ｍｇ。糖基化ＰＡＩ－１分子量为５０ｋＤ,比活性５．８×１０４ＩＵ／ｍｇ。非糖基化ＰＡＩ－１分子量４３ｋＤ,占总ＰＡＩ－１３０％,仍具有ＰＡＩ－１活性。用ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析进一步纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯的糖基化ＰＡＩ－１。     

日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达

研究了外源基因日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）在卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ,ＢＣＧ）、耻垢分枝杆菌（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）和大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达．运用重组ＤＮＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等分子生物学技术,以表达Ｓｊ２６ＧＳＴ的Ｅ．ｃｏｌｉｐＧＥＸ衍生质粒为模板,经ＰＣＲ得到编码Ｓｊ２６ＧＳＴ的全长ｃＤＮＡ片段．将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）７０的启动子下游,再将ＨＳＰ７０启动子和Ｓｊ２６ＧＳＴ基因一起亚克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中,得到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达质粒ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６．ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６电转化入ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓｍｃ２１５５中表达Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原,所表达的天然重组Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）为可溶性蛋白,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带．其表达量分别占ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ菌体总蛋白的１５％和１０％．可见,Ｓｊ２６ＧＳＴ基因能在ＢＣＧ中高效表达．     

优质蛋白玉米胚乳贮存蛋白积累的电泳分析

玉米胚乳的２２ ｋＤ和２０ ｋＤ醇溶蛋白在授粉后１５ 天开始积累,编码２２ ｋＤ 和２０ ｋＤ醇溶蛋白的结构基因在胚乳发育过程中同时表达。优质蛋白玉米和ｏ２ 玉米的胚乳中,２２ ｋＤ和２０ ｋＤ醇溶蛋白的合成受到抑制,即ｏ２ 基因对２２ ｋＤ和２０ ｋＤ醇溶蛋白的合成有负的调节作用。Ｍｏ１７／ｏ２ 和Ｍｏ１７ 胚乳醇溶蛋白的双向电泳结果表明,Ｍｏ１７／ｏ２ 的２７ ｋＤ、２２ ｋＤ、２０ ＫＤ和１５ ｋＤ醇溶蛋白的合成均受到强烈的抑制。遗系０４１／ｏ２ 和遗系０４０／ｏ２ 胚乳醇溶蛋白的双向电泳结果表明,二者只在高分子量的蛋白质斑点区域有一些细微的差别。可溶性蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,Ｍｏ１７／ｏ２ 胚乳的可溶性蛋白比其同型系Ｍｏ１７ 少３８．７ ｋＤ 和２６．７ ｋＤ两条谱带,多２７．２ ｋＤ和２６．１ ｋＤ两条谱带。二者出现的可溶性蛋白的差异是ｏ２ 基因调控的结果。遗系０４１／ｏ２ 胚乳的可溶性蛋白比其同型系０４０／ｏ２ 多１８．６ ｋＤ和１７．６ ｋＤ两条谱带,少４０．２ ｋＤ 一条谱带,这与ｏ２ 基因修饰因子的作用密切关联     

盐生杜氏藻生油—3—磷酸脱氢酶的分离化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,Ｂｈｕｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化直二氏藻甘油三磷酸（Ｇ－３－Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）得到比活为１２．６ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４－２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶     

菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质

利用硫酸铵分级沉淀,Ｓｅｐｈｅｄｅｘ Ｇ－５０凝胶柱层析,ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｑ和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了ＥＰＳＰ合成酶。该酶被纯化２９６１．６倍,比活性达到６２１９．４ｎｍｏｌｍｇ＾－１蛋白ｍｉｎ＾－１。该酶分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为５１ｋＤ,等电点为ｐＨ５．７,酶促反应最适ｐＨ７．５,最适温度４５℃。６．２μｍｏｌ／Ｌ的除草剂草甘膦能抑制ＥＰＳＰ合成酶活性的５０％。