鸡胚脑细胞谷氨酸释放的模拟微重力效应

用回转器旋转鸡胚蛋研究对脑细胞的模拟微重力生物效应.采用连续荧光法测量孵化10 d（E10）和孵化13 d（E13）鸡胚的脑细胞谷氨酸的初始释放速率、在KCl去极化及单个电脉冲刺激后的释放速率和释放量以及谷氨酸的含量,并对旋转处理组和静止对照组进行了比较.结果如下：旋转组和对照组脑细胞的谷氨酸初始释放速率没有显著差异,E10鸡胚经24 h旋转后,在KCl刺激下脑细胞的谷氨酸释放速率和释放量皆高于对照组,经4 h旋转后谷氨酸含量显著增高（P＜0.01）;但旋转24 h的E13鸡胚上述指标皆无显著改变,表明微重力对鸡胚脑细胞神经递质释放的影响与胚龄有关.鸡胚脑细胞在电脉冲刺激下谷氨酸释放的动态过程表明：脉冲电场引起的谷氨酸释放与细胞内钙离子迅速增加有关.     

多氯联苯促进毛白杨不定根分化的效应

多氯联苯是一种典型的持久性有机污染物。研究表明多氯联苯具有毒物兴奋效应, 但其影响植物生长发育的机制尚不清楚。以毛白杨(Populous tomentosa)组培苗为材料, 探讨3 mg·L^-1 Aroclor1254对不定根分化、植物激素水平、与生长素相关的P009g125900、P006g142600和P002g222700基因表达、与细胞分裂素相关的P005g2489和P005g2376基因表达的影响。结果显示, Aroclor1254可促进毛白杨组培苗不定根分化, 缩短不定根初根时间与分化率达100%的时间, 提高不定根数目; 在不定根诱导期, 用Aroclor1254单独诱导, IAA/(ZR+dhZR)比值与阳性对照无显著差异, P006g142600、P002g222700、P009g125900、P005g2489和P005g2376基因表达变化趋势与IBA单独诱导下各基因表达变化趋势一致。为验证Aroclor1254是否具有生长素效应, 以玉米(Zea mays)和转生长素报告基因DR5::GUS的拟南芥(Arabidopsis thaliana)为材料, 观察Aroclor1254对胚芽鞘生长及DR5::GUS基因表达的影响。结果显示, 一定浓度的Aroclor1254对胚芽鞘的生长无显著影响, 但可诱导生长素报告基因表达。以上结果表明, 多氯联苯类化合物Aroclor1254虽不属于植物生长调节剂, 但具有毒物兴奋效应, 在一定浓度下具有类似生长素的生物学活性。     

鸡鸭异种间嵌合体的制备

本研究采集孵化14期鸡胚血液中的原始生殖细胞,在液氮中冷冻保存三个月后,解冻成活率达80％以上。以Ficoll密度梯度离心将其从血液中分离纯化,分离获得纯度为27.5%,平均每枚胚胎可获得近50个PGCs。将分离的PGCs 100-200个以微注射法转移至15期早期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌合体,孵出8（6♂,2♀）只雏鸭,总孵化率为7.3%（8／110）。以鸡W染色体特异性DNA探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测鸡PGCs。在被检测的21个鸭胚的性腺中,16个有不同程度的阳性信号,嵌合率达76.2%(16/21)。实验结果表明鸡原始生殖细胞能够迁移并定居到鸭胚性腺中,并有可能在鸭性腺中增殖分化成有功能的配子。     

维甲酸直接诱导鸡原始生殖细胞启动并完成减数分裂

维甲酸（RA）在胚胎期生殖细胞启动减数分裂过程中发挥重要的调控作用,但RA与性腺细胞的作用机制及其能否诱导生殖细胞完成整个减数分裂生成配子的问题尚不清楚.本文以鸡原始生殖细胞体外无饲养层培养体系为模型,避开性腺体细胞的影响,研究RA诱导PGC进入减数分裂的作用机理.研究发现,在无体细胞的情况下,RA显著上调鸡胚PGC中STRA8,SYCP3和DMC1的mRNA和蛋白表达水平,从而促进其进入减数分裂;同时,流式细胞分析和吉姆萨染色结果表明,RA能使鸡胚PGC经历各个减数分裂时期,最终生成36.5%～58.4%单倍体生殖细胞;此外,本实验还对雌性和雄性PGC对RA的应答能力进行了研究,发现两者对RA的敏感程度相似.综上所述,RA能直接诱导PGC启动并完成整个减数分裂过程,生成单倍体生殖细胞,无需体细胞或其他因子的介导.这为临床上治疗不孕不育及配子形成的机理研究提供了基础.     

吗啡对鸡胚胎发育的影响

目的：研究吗啡对胎动、心率、孵化率、孵化时间、雏鸡体重等的影响。方法：以气室给药的方式给鸡胚注射吗啡,记录胎动、心率、孵化率、孵化时间、雏鸡体重。结果：吗啡可以缩短雏鸡的孵化时间,降低雏鸡的孵化率,并导致雏鸡出现运动障碍;20mg／kg吗啡剂量和12—16胚龄的给药时间,鸡胚孵化率最高,残疾率最低;吗啡导致胚胎心率加快,胎动减少（P〈0．05）。结论：吗啡对胚胎发育有损伤作用,损伤程度与吗啡剂量和给药时间有关。     

LHRH-A缓释剂对雌性赤点石斑鱼卵巢发育、性类固醇激素分泌及脑垂体GTH细胞超微结构的影响

取75尾网箱养殖的2～3龄雌性赤点石斑鱼,分为3组（高、低剂量组和对照组）,各25尾。高剂量组埋植促黄体生成索释放激素类似物（LHRH—A）缓释剂,剂量为300μg／kg体重,低剂量组为100μg／kg体重,对照组埋植不含LHRH—A的药丸。分别在实验开始和埋植药丸后0、10、20、30、40天抽血,用放射免疫测定血清类固醇激素（E2、T）;解剖鱼体测定相关指标,计算性腺成熟系数;取性腺和肝脏组织常规组织学切片并透射电镜观察。埋植后第10-30天,两种剂量处理组的排卵率均高于对照组,高剂量组显著高于低剂量组。在第10天性腺成熟系数高剂量组为1．055％,卵母细胞已有部分迅速发育到Ⅳ期末（核偏位）;低剂量组相对缓慢。第20天性腺成熟系数高剂量组达1．858％,低剂量组为0．987％;处理组卵母细胞基本发育成熟。埋植后第10天,两处理组血清E2和T水平显著升高;第20天显著下降;此后E2保持在较低的水平,T显著低于对照组水平。超微结构的观察证实脑垂体GTH细胞在LHRH—A缓释剂诱导性腺发育成熟和排卵过程中处于活跃的合成与分泌状态。LHRH—A缓释剂能有效诱导赤点石斑鱼卵巢发育成熟和排卵,而性类固醇激素（E2、T）只与卵黄生成有关,与排卵无关。     

虎纹蛙促性腺激素释放激素分泌调节的离体研究

利用离体静态孵育系统和放射免疫测定法,研究了性成熟的虎纹蛙雌蛙离体的视前－下丘脑－正中隆起（P－H－ME）片段促性腺激素释放激素（GnRH)的分泌调节。结果表明：γ－氨基丁酸（GABA）对成熟前期蛙离体P－H－ME片段的哺乳类GnRH（mGnRH)的释放有显著的刺激作用;随着GABA作用浓度的增加,刺激作用逐渐增强。100μmol/L的多巴胺（DA）及1μmol/L和10μmol/L的雌二醇(E2）则显著抑制鸡ⅡGnRH(cGnRH-Ⅱ)的释放。10μmol/L和100μmol/L的睾酮（T）以及10μmol/L的E2显著刺激冬眠期蛙P－H－ME片段mGnRH的释放。这些结果表明,GABA,DA及E2和T对虎蚊蛙GnRH的释放有直接的调节作用。     

外源促性腺激素处理后鸡产蛋及孵化研究

目的：探讨促卵泡素（FSH）对低产期肉用种母鸡在产蛋数量和孵化的影响,寻求较佳的用于提高低产期母鸡产蛋的激素剂量。方法：本试验采用同种激素不同剂量的处理方式,比较实验组和对照组产蛋量和孵化情况。结果：注射不同剂量的激素对鸡的产蛋有一定的影响,实验组一的平均产蛋数与对照组接近,其它四组均显著低于对照组（P〈0．05）,孵化率与健雏率与对照组无显著差异（P〉0．05）。结论：小荆量激素处理对鸡产蛋量没有太大的影响,但大剂量会引起鸡生殖系统萎缩,激素处理对受精卵孵化及雏鸡生长并无负面影响。     

鸡胚性腺内黄体生成素受体和类固醇激素合成酶基因的性别差异性表达(英文)

促性腺激素受体,包括黄体生成素受体（LHR）和卵泡刺激素受体,通过调节类固醇激素合成和细胞增殖从而对性腺的发育和功能起重要作用。虽然鸟类的性别由性染色体所决定;但性腺的发育要受到很多诸如类固醇激素这样因素的影响。既然雄性和雌性的性腺有不同的形态特征和功能,促性腺激素和类固醇激素对它们发育的调节作用可能是不同的。本实验的目的是研究鸡胆发育过程中性腺内LHRmRNA表达的变化及其与类固醇激素合成酶mRNA表达的相关性。在孵化的第10天至孵化后第14天之间取出鸡胚的性腺,然后用Northern杂交法检测LHR和P450c17及P450arommRNA的表达。结果显示：在孵化期间LHRmRNA有3．0和1．5kb两种转录产物,孵化后还出现7．0kb的转录物（Fig．1）。在孵化期间1．5kb转录物的含量高于3．0kb的转录物,而孵化之后则相反。卵巢内LHRmRNA（3．0kb）的水平从孵化的第12天开始升高,两天之后达一高峰,此后一直保持在较高水平。与此不同的是睾丸内LHRmRNA的表达量在孵化期间较低,孵化后立即升高（Fig．2）。P45c17mRNA的表达与LHRmRNA相似（Figs．3＆4）。P450arommRNA在卵巢内的表达量较高,孵化后其主带从2．0kb转变为4．0kb。睾丸内P450arommRNA的表达量极低（Figs．5＆6）。在相应的时期,左侧和右侧     

多氯联苯对成年公鸡生精功能和睾酮分泌的影响

目的：多氯联苯（PCB）与DDT结构类似,可作为内分泌干扰物（环境激素）使动物和人发生神经,内分泌和生殖功能紊乱,本试验研究PCB对公鸡生殖功能的影响。方法：对照组成年鸡口服花生油,实验组口服PCB（50mg/kg体重）,每周一次,连续六周,最后用多聚甲醛灌流,取出性腺并固定,组织块经石蜡切片和伊红－苏木精染色,并进行图象分析,结果：对照组与实验组分鸡和母鸡在体重,呼吸,心率,体温方面无显差异,红细胞和白细胞数目也无显变化。组织学切片观察发现;实验组公鸡睾丸曲细精管破损,管壁明显变薄,支持细胞数目减少,各级精母细胞及精子数目下降,间质在原有基础上变得散乱。定量结果表明,实验组与对照组公鸡相比,睾丸重量明显降低（P＜0．05）,并且曲细精管管壁厚度显下降（P＜0．01）。睾酮含量结果为,实验组公鸡睾酮水平显下降,与公鸡的结果不同,相同剂量的PCB处理后,母鸡所产蛋除蛋重下降外,其他品质包括蛋形指数,蛋壳强度,蛋白高度,蛋黄颜色和哈夫单位均无显变化,结论：PCB对成年鸡生殖功能的影响存在明显的性别差异,公鸡对PCB有较高的敏感性,可使生精功能损伤,睾酮分泌减少。     

鸡蛋开窗法导入供体胚盘细胞对家鸡胚胎发育的影响研究

通过4批孵化实验,研究鸡蛋开窗法注射供体胚盘细胞对受体鸡胚发育及孵化率的影响。GLM方差分析表明,开窗处理极显著降低整个孵化期（21d)的活胚比例（P＜0．01）,至21日龄出壳时,处理组的孵化率为.8%-6.0%。导入供体胚盘细胞对受体鸡胚的发育仅为阶段性影响,表现在显著性孵化第8日龄左右的活胚比例（P＜0.05)。而对后期发育的影响不显著（P＞0．05）。因经,鸡蛋开窗处理是降低受体胚胎成活率和孵化率的主要原因,如何降低开窗处理对受体胚胎的应激和不利影响则是今后研究的一个课题。     

放线菌素D和环己亚胺对伊贝母胚性愈伤组织中胚性细胞团和球形胚发生及大分

伊贝母（F,pallidiflora Schrenk)胚性愈伤组织接种于NAA1．0mg/L 6=BA2.0mg/L的MS培养基上,在培养10天前可产生大量单细胞到多细胞胚性细胞团,培养10至15天,逐渐形成大量球形胚,利用这样一个实验体系,在培养0,1,2,3和4天后加入放线菌素D（AMD,20ug/ml)和环己亚胺（CHM,20ug/ml),继续培养至第6天,分析大分子代谢动态和观察胚性细胞团的形成情况;培养6和10天后加入同样浓度的AMD和CHM,继续培养至第15天,分析大分子代谢动态及观察球形胚形成情况,结果表明：（1）培养0,1,2,3和4天加入AMD的分别抑制胚性细胞团的100％,63％和45％,加入CHM的抑制100％,85％和75％,培养6和10天后加入CHM抑制球形胚的100％和75％;（2）DNA,RNA和蛋白质在胚性细胞团和球形胚形成时出现两个峰值,其中RNA变化剧烈,最早出现峰值,AMD和CHM分别抑制RNA和蛋白质的合成;（3）过氧化物酶同工酶带对胚性细胞团和球形胚形成过程中顺序表达。AMD和CHM分别在转录和转泽水平上对其进行规律性抑制,根据以上结果,本文对伊贝母体细胞胚胎发生的机制进行了初步讨论。     

鸡X期胚盘细胞体外培养

为证实经遗传修饰的鸡X期胚盘细胞具有参与受体胚胎发育和形成嵌合体的能力,本研究将由鸡X期胚盘制成的细胞悬液与经脂质体包埋的抗鸡传染性支气管炎病毒基因重组质粒PGS1共孵育后,直接显微注入同期受体胚盘（140枚）;或对转染后供体细胞进行G418抗性筛选性后显微注入同期受体鸡胚盘（140枚）;或将供体细胞体外培养48h,再与脂质体-P^GSI复合物共孵育后显微注入同期受体鸡胚盘（190枚）,制备转基因嵌合体鸡,并应用PCR和RAPD方法,对鸡胚和雏鸡不同组织或血液中的DNA进行检测。结果表明：直接注射组孵化率（5.7%)显著（P＜0.01)高于G418筛选处理组（1.4%)和培养48h处理组（2.1%);G418筛选处理组不同胚龄鸡胚组织、器官中外源DNA的PCR检测阳性率均高于其它二个组。实验结果证明,体外培养48h并经遗传修饰的胚盘细胞仍然具有形成嵌合体的能力,利用早期胚盘细胞途径制备转基因鸡是可行的。     

外源促性腺激素处理后鸡产蛋及孵化研究

目的:探讨促卵泡素(FSH)对低产期肉用种母鸡在产蛋数量和孵化的影响,寻求较佳的用于提高低产期母鸡产蛋的激素剂量。方法:本试验采用同种激素不同剂量的处理方式,比较实验组和对照组产蛋量和孵化情况。结果:注射不同剂量的激素对鸡的产蛋有一定的影响,实验组一的平均产蛋数与对照组接近,其它四组均显著低于对照组(P<0.05),孵化率与健雏率与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:小剂量激素处理对鸡产蛋量没有太大的影响,但大剂量会引起鸡生殖系统萎缩,激素处理对受精卵孵化及雏鸡生长并无负面影响。     

慢病毒载体导入种蛋内鸡胚技术研究

种蛋内鸡胚含有潜在的胚胎干细胞(BCs)或原生殖细胞(PGCs),是目前主要的转基因鸡研究方法。采用绿色荧光蛋白(GFP)基因的pLenti6/v5-DEST-GFP慢病毒表达载体,白来航鸡与伊萨鸡种蛋,结合种蛋赤道面开窗专利技术,对含这两种细胞胚的转基因技术进行了比较研究:转染白来航鸡囊胚,孵化13天时,GFP基因的PCR检出率为64.7%,孵化率极低;转染孵化72h伊萨鸡胚血液循环中PGCs,实验蛋孵化率为35.0%,在出壳后死亡的3只小鸡肝脏中,GFP基因的PCR检出率为100%,存活的4只鸡中有3只在12月龄的血液样品中,经PCR扩增出了GFP基因;转染孵化72～79h白来航鸡胚PGCs,7批次实验的平均孵化率为21.1%,能在赤道面窗口注射胚的种蛋比率,以73～77h胚龄的最高,为75.0%～92.9%,注射病毒组出壳雏鸡血液DNA中,GFP基因PCR检出率为44.4%。两种方法比较,PGCs方法在实验蛋孵化率、胚定位在赤道面窗口率等方面有较强优势。因此为种蛋内胚细胞的转基因鸡技术研究提供了系统、可操作性强的方法。     

在鸡胚绒毛尿囊膜上评价血管生成技术的应用与优化

目的：用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）评价血管生成并进行优化,为抗血管生成药物筛选提供良好的体内实验模型。方法：对CAM技术的各个环节,包括合适日龄胚蛋选择、蛋壳开窗及暴露CAM的方法、载体选择、结果分析等进行了实验对比。结果：采取气室开窗,以甲基纤维素为药物载体,促进血管生成的药物在孵化11d以后、抑制血管生成的药物在孵化7～9d给药,鸡胚存活率为85.8%,生长状况良好,被检测药物有明显的抑制或促进血管生成的效应。结论：通过优化建立了操作简便、鸡胚存活率高的在CAM上评价血管生成的技术;应用CAM技术评价了若干影响血管生成的因子。     

高效能的促黄体素释放激素类似物对金鱼促性腺激素分泌的作用

金鱼对LRH-A反应有明显的季节性变化,在早春(2月)生殖季节开始前诱导的血清GtH含量最高;在生殖季节过后(5—6月)GtH的释放反应减弱,而在夏季(8月)性腺处于退化状况时,反应很弱或者没有反应。LRH-A注射剂量的高低对血清GtH含量增高的影响并不都很明显,但高剂量(1.0微克/克体重)能诱导较高的血清GtH含量并能维持24小时。经过多次注射高剂量以后,脑垂体GtH含量下降。温度、注射剂量、注射间隔时间都和诱导的血清GtH含量有密切关系。连续9—10天每日注射LRH-A,能刺激性腺退化的金鱼恢复性腺发育,但对性腺已开始发育的金鱼,却抑制或减慢其性腺进一步发育。       

不同胚龄北京鸭视网膜节细胞层细胞大小、数量及密度

采用视网膜铺片Nissl染色法和Scion Image图像分析法,研究北京鸭胚胎期11（E11）、14、117、20、23和26日龄视网膜节细胞层（Ganglion cell layer,GCL）细胞大小、数量及密度分布变化。结果表明：E11-E14,GCL细胞小,均呈圆形,E17开始出现大细胞;E11至E26视网膜中央区（CA）细胞大小增长1．97倍,而颞侧周边区（TP）增长3．1倍,相邻胚龄间细胞大小差异显著。GCL细胞总数在E17达到最大值2．03&#215;10^6个,随后细胞数量显著下降。视网膜中央-周边密度梯度在E11出现。CA细胞密度在E17达到最大值2．54&#215;10^4个/mm^2,随后密度下降;周边区细胞密度随胚龄增长而持续下降,且TP细胞密度下降最显著。结果提示,北京鸭胚胎发育过程中,GCL细胞大小、数量及密度均发生显著变化,而E17是其中的一个重要转折点[动物学报54（6）：1082—1088,2008]。     

鸡胚原始生殖细胞的分离和鸡鸭嵌和体的制备

探索了鸡胚12～17期血液中的原始生殖细胞(PGCs)迁移数量变化规律,将其在液氮中冷冻保存.并以Ficoll密度梯度离心、MiniMACS磁气分离、滤膜三种方法对PGCs进行分离,结果发现12～17期血液中均有PGCs存在,13期达到高峰约47.1±10.5个/μl,在血液中比例为0.0126%.冷冻保存3个月后解冻成活率达80%以上.三种分离方法所得的分离效果分别为95.7%、39.2%、63.0%,纯度为27.5%、8.4%、3.1%.将分离的原始生殖细胞以微注射法转移至14～15期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌和体,获得8只雏鸭(8/110).以鸡W染色体探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测到鸡原始生殖细胞,嵌和率达84.2%(16/19).表明鸡原始生殖细胞能够迁移定居到鸭胚性腺中,并有可能增殖分化成有功能的配子.     

不同剂量阿霉素致大鼠局灶节段硬化肾病模型的建立比较

目的探讨不同剂量阿霉素对大鼠局灶节段硬化肾病模型的影响。方法左侧肾切除加尾静脉注射不同剂量阿霉素致大鼠肾脏局灶节段性硬化,观察不同剂量阿霉素对模型大鼠成活率、24 h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮、肾脏病理的影响。结果不同阿霉素注射剂量组大鼠4周、8周成活率随着注射剂量的升高呈逐渐下降趋势,且4周、8周时阿霉素注射剂量4.5～6 mg/kg组模型大鼠成活率均低于50%;8周时成活率与注射剂量呈高度显著性负相关（r=0.9045,P〈0.01）。各阿霉素注射剂量组于1周出现尿蛋白明显升高（P〈0.01）、2周出现血清肌酐明显升高（P〈0.01）、4周出现血清尿素氮明显升高（P〈0.01）,并均呈进行性增高,2周时除3 mg/kg组外,其余各组血清尿素氮较正常组高（P〈0.01,P〈0.05）;8周时各注射剂量组大鼠24 h尿蛋白定量、血清肌酐、血清尿素氮与阿霉素注射剂量呈高度显著性正相关（r=0.942 9,P〈0.01;r=0.938 4,P〈0.01;r=0.956 8,P〈0.01）。各组大鼠肾脏病理均提示肾小球出现局灶节段硬化表现,且硬化程度随注射剂量的增加而呈加重趋势。结论阿霉素尾静脉注射剂量3 mg/kg模型组大鼠死亡率低,同时大鼠肾脏病理又能表现出符合人类肾小球局灶节段硬化的改变,是较为理想的造模剂量。