共查询到20条相似文献,搜索用时 125 毫秒
1.
蛋白组学研究中双向电泳(2-DE)后的SDS-PAGE凝胶染色存在灵敏度和质谱兼容性问题。线粒体中存在大量微量蛋白,对于这类亚细胞器蛋白质2-DE后的凝胶染色,这两种特性显得尤为重要。经典的硝酸银染色虽灵敏度高,但之后的质谱鉴定兼容性欠佳。因此,该研究通过优化硝酸银染色方法观察大鼠心肌线粒体蛋白质2-DE后的凝胶染色效果,挖取部分蛋白质斑点酶解后行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定,验证优化硝酸银染色与质谱鉴定的兼容性。结果表明,优化后的硝酸银染色方法灵敏度高,与MALDI-TOF-MS兼容性好,是一种线粒体蛋白质2-DE后染色的理想方法。 相似文献
2.
《基因组学与应用生物学》2017,(1)
开展蒙古沙冬青叶组织的蛋白质组学研究,需要建立和优化叶的蛋白质组双向电泳体系。本研究以蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)叶片为材料,比较了不同总蛋白提取方法(TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法)、不同染色方法(考马斯亮蓝染色和硝酸银染色)和不同蛋白质上样量对双向凝胶电泳蛋白质得率和等电聚焦效果的影响。结果显示,采用TCA-丙酮法提取蒙古沙冬青叶片总蛋白,蛋白质上样量500μg,以硝酸银染色SDS-PAGE胶,双向电泳的分辨率最高,图谱清晰。该方法的建立为开展蒙古沙冬青叶片蛋白质组定量和定性分析奠定了基础。 相似文献
3.
4.
对传统的糖蛋白染色方法(高碘酸-Schiff法)进行了改进。蛋白质的氧化采用高碘酸法,染色时采用硝酸银染色法。此方法灵敏度是高碘酸-Schiff法的100倍,而且比高碘酸-Schiff法节省16~18h。 相似文献
5.
植物染色体的银染技术、原理及应用 总被引:3,自引:0,他引:3
早在本世纪初,硝酸银(AgNO_3)溶液就已用作为动物神经细胞的染色剂。其后,又广泛地用于核仁的染色。但真正应用于染色体研究,则是始于1975年Howell等人的工作,他们以硝酸银和氢氧化铵的混合液(简称铵银)处理人的染色体制片,再用福 相似文献
6.
一种蛋白质等电聚焦银染色方法 总被引:1,自引:0,他引:1
等电聚焦是蛋白质分析的一种常用方法。在实际工作中,常因一些生物材料蛋白含量太低,常规的考马斯亮蓝染色不能显示区带,给研究工作带来困难。人们曾考虑聚焦后用超敏感的硝酸银染色法克服之,但因聚焦后凝胶上含有Ampholine而往往不能得到满意的结果。我们经过一段时间的摸索,染色获得成功。现简介如下。 一、固定与浸泡 相似文献
7.
8.
9.
10.
酿酒酵母FFC2146 胞内蛋白及胞外蛋白双向电泳条件优化及图谱建立 总被引:3,自引:1,他引:2
通过对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的培养基、培养条件及蛋白质提取方案的优化,建立了酿酒酵母胞外和胞内蛋白双向电泳图谱制作方法。在YNB培养基中培养20 h,经过离心取上清-超滤-冻干可得到酿酒酵母胞外蛋白质样品;用SDS缓冲液悬浮酵母细胞-煮沸-超声-增溶,得到了酿酒酵母胞内蛋白质样品。经过双向电泳分离、硝酸银染色和PDQuest图像分析可以检测到了200多种酿酒酵母胞外蛋白和500多种酿酒酵母胞内蛋白。 相似文献
11.
银浸染色是在采用特殊染色方法仍无法显示人体或动物实验中某些细微组织结构时常使用的组织化学染色技术 ,由于所用主要试剂硝酸银在化学结构式中没有发色基团和助色基因 ,不具备染料的最基本的化学性质 ,但银浸染色方法多 ,应用范围广 ,在对所要显示的组织成分时表现出明显的选择性和相对特异性。虽然各种银浸染色的原理是相同的 ,但各种银浸染色中硝酸银溶液的配制 ,银含量的多少 ,以及在染色时选择的温度、时间、显影剂等都有很大的差异 (附表 ) ,各种银浸染色方法的不同且操作繁琐 ,由于多种因素的影响 ,往往造成银浸染色质量不稳定 ,正… 相似文献
12.
13.
DNA银染的清除与重染 总被引:3,自引:0,他引:3
聚丙烯酰胺凝胶电泳因其操作简便 ,分辨率高 ,重复性好等优点在生物大分子的分离 ,提取和鉴定等方面得到广泛的应用 ,它已经成为开展分子生物学研究必不可少的技术方法 .显示聚丙烯酰胺凝胶电泳中核酸的方法主要有溴化乙锭 (EB)染色和硝酸银染色 .硝酸银染色因其灵敏度高 ,无致癌毒性 ,同时也消除了观测时紫外线对眼睛的伤害 ,因此而被更多的研究人员所采用 . 许多因素可以影响染色显像的成败与优劣 ,如胶的厚度 ,试剂的浓度 ,冲洗次数和反应温度 ,特别是终止时间的掌握等 .染色背景过深和显像不理想是几乎所有研究人员都曾有过的经历 … 相似文献
14.
银染色方法及其在细胞遗传学中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
硝酸银染色在细胞化学中的应用已有很久的历史,但用以研究染色体却是近几年的事。Goodpasture等应用称为Ag-AS的银染色技术,使9种哺乳动物的核仁组织者(NOR)特异性染为黑色。这种银染色阳性的NOR称为 相似文献
15.
《生物技术通讯》2016,(1)
目的:构建转录辅助因子LBH(limb-bud and heart)过表达的人间充质干细胞(MSC)株,研究Lbh基因对人MSC功能的调控。方法:通过分子克隆的方法构建人Lbh基因的慢病毒表达质粒p CDHP-Lbh,经限制性内切酶酶切和核酸测序鉴定,利用293T细胞包装表达Lbh基因的慢病毒及对照;将包装的病毒感染人MSC,利用表达载体携带的GFP报告基因,采用流式细胞术分选GFP阳性目的细胞;通过油红O染色鉴定阳性细胞的成脂分化能力,通过茜素红和硝酸银染色鉴定阳性细胞的成骨分化能力。结果:双酶切和测序结果表明正确克隆了人Lbh基因的全长CDS序列,定量PCR和Western印迹结果表明构建的p CDHP-Lbh重组质粒能够表达Lbh基因;流式分选获得LBH稳定表达的人MSC细胞株,该细胞株经成骨和成脂诱导分化培养后,油红O染色、茜素红染色和硝酸银染色结果均呈阳性。结论:构建了人Lbh基因的慢病毒表达质粒p CDHP-Lbh,并获得稳定表达Lbh基因的人MSC细胞株,该细胞株保留了向脂肪细胞和成骨细胞定向分化的能力。本研究为进一步探讨Lbh基因对人MSC功能的调控提供了重要的实验基础。 相似文献
16.
褐家鼠精母细胞中联会复合体的研究I.表面铺展联合复合体的PTA染色 总被引:10,自引:3,他引:7
本文应用PTA染色技术研究了褐家鼠精母细胞联会复合体,发现一些PTA或硝酸银对染色质负染而对SC正染的图象,即染色质被漂白。在这铺展的图象中进一步证明,SC是同源染色体配对形成的一种结构。 相似文献
17.
18.
枸杞花药蛋白质组双向电泳体系的建立及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
采用改良TCA丙酮沉淀结合Tris-HCl法提取枸杞花药蛋白质,对蛋白质裂解液成分、IPG胶条的pH范围、上样量及染色方法进行了探索.结果表明:(1)采用17 cm胶条、400 μg的上样量、含有2 mol/L硫脲的裂解液,硝酸银染色,可得到重复性好、质量高的枸杞花药蛋白2-DE图谱,枸杞花药蛋白主要集中在pH 4~7范围.(2)采用该体系分析了‘宁杞1号’和‘宁杞5号’四分体时期花药蛋白,并利用PDQuest 8.0软件在pH 4~7的2DE图谱上检测到500多个蛋白点,其中差异表达量大于2倍的蛋白有25个. 相似文献
19.
20.