吡格列酮诱导心肌细胞凋亡和抑制心肌细胞肥大的作用及其机制研究

摘要 目的：探讨吡格列酮诱导心肌细胞凋亡和抑制心肌细胞肥大的作用及其机制研究。方法：选取1-3日龄的健康新生SD大鼠,采用酶学分离心肌细胞并培养。将心肌细胞分为4组：对照组、吡格列酮10 μM组、吡格列酮20 μM组、阿帕替尼2 μM组。采用自动细胞计数器（BioRad）计数吡格列酮和阿帕替尼对心肌细胞增殖的影响,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,[3H]-亮氨酸掺入法评估心肌细胞的肥厚,用相差显微镜检测心肌细胞直径。蛋白免疫印迹试验检测VEGFR-2,磷酸化VEGFR-2,蛋白激酶B （Akt）,磷酸化人体抑癌基因（P53）,兔抗人单克隆抗体（Bax）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平。免疫组织化学检测心肌细胞VEGFR-2、Bcl-2及Bax阳性指数。结果：吡格列酮和阿帕替尼均能抑制心肌细胞活力,其中吡格列酮以剂量依赖的方式抑制心肌细胞活力,即吡格列酮剂量越大,其抑制心肌细胞活力越强。吡格列酮或阿帕替尼治疗后,心肌细胞凋亡率显著增加,表明两者均诱导心肌细胞凋亡。吡格列酮或阿帕替尼治疗后,血管紧张素II（Ang II）诱导的[3H]-亮氨酸掺入量显著减少,心肌细胞直径减小,表明两者均抑制心肌细胞肥大。吡格列酮显著提高了新生大鼠心肌细胞中Bax和磷酸化-P53的蛋白表达,降低了mTOR、Akt、VEGFR-2、Bcl-2和磷酸化-VEGFR-2蛋白表达。与对照组比较,吡格列酮和阿帕替尼治疗后,VEGFR-2阳性指数和Bcl-2阳性指数显著降低,Bax阳性指数显著升高（P＜0.05）。结论：吡格列酮通过调节VEGFR-2信号通路诱导心肌细胞凋亡,抑制心肌细胞肥大。     

维生素E对妊娠中期高糖环境大鼠皮下脂肪组织中asprosin的表达影响

摘要 目的：探讨维生素E对妊娠中期高糖环境大鼠皮下脂肪组织中asprosin的表达影响。方法：将妊娠中期高糖环境大鼠(n=21)随机平分为三组-模型组、吡格列酮与维生素E组。格列酮与维生素E组分别灌胃80 mg/kg的吡格列酮和5 mg/kg的维生素E,模型组灌胃等剂量的0.9 % NaCl,1次/d,检测皮下脂肪组织中asprosin表达情况。结果：吡格列酮组与维生素E组给药第3 d、第7 d的血糖、体重低于模型组(P<0.05),维生素E组低于吡格列酮组(P<0.05)。吡格列酮组与维生素E组给药第7 d的皮肤组织超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)含量高于模型组(P<0.05),丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量低于模型组(P<0.05),吡格列酮组与维生素E组对比差异也都有统计学意义(P<0.05)。吡格列酮组与维生素E组给药第7 d的皮肤组织asprosin蛋白相对表达水平低于模型组(P<0.05),维生素E组低于吡格列酮组(P<0.05)。结论：维生素E在妊娠中期高糖环境大鼠的应用能抑制皮下脂肪组织中asprosin的表达,提高SOD活性,降低MDA的表达,从而降低大鼠的体重与血糖水平。     

芪药消渴胶囊联合吡格列酮对2型糖尿病患者糖脂代谢和肝肾功能的影响

摘要 目的：探讨芪药消渴胶囊联合吡格列酮对2型糖尿病（T2DM）患者糖脂代谢和肝肾功能的影响。方法：选取2017年1月~2019年12月期间我院收治的98例T2DM患者,随机分为对照组49例（吡格列酮治疗）和联合组49例（芪药消渴胶囊联合吡格列酮治疗）,两组均治疗8周,对比两组患者疗效、糖脂代谢指标[甘油三酯（TG）、空腹血糖（FPG）、总胆固醇（TC）、糖化血红蛋白（HbA1c）、高密度脂蛋白（HDL-C）、餐后2 h血糖（2hPG）、低密度脂蛋白（LDL-C）]和肝肾功能指标[谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶(ALT)、尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）]及不良反应。结果：对照组、联合组治疗8周后的临床总有效率分别为81.63%（40/49）、95.92%（47/49）,联合组的总有效率高于对照组（P<0.05）。两组治疗后血清AST、ALT与治疗前比较差异均无统计学意义（P>0.05）,两组治疗后HDL-C 较治疗前升高,且联合组高于对照组（P<0.05）,FPG、2hPG、HbA1c及血清BUN、Scr、TC、TG、LDL-C均较治疗前下降,且联合组低于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率相比无差异（P>0.05）。结论：芪药消渴胶囊联合吡格列酮治疗T2DM患者疗效显著,可有效纠正患者脂代谢紊乱,控制血糖,改善肾功能,对人体肝功能损害轻,安全性较好。     

从干预SIRT1表达探究急性应激影响糖尿病小鼠葡萄糖代谢和脂肪代谢的机制

摘要 目的：从干预组蛋白去乙酰化酶（Sirtuin1, SIRT1）表达探究急性应激影响糖尿病小鼠葡萄糖代谢和脂肪代谢的机制。方法：以30只C57BL/6小鼠为研究对象,通过高脂饮食和链脲佐菌素腹腔注射诱导的T2DM 模型小鼠,然后随机分为对照组（正常小鼠+柠檬酸盐缓冲液灌胃）、糖尿病组（糖尿病小鼠+柠檬酸盐缓冲液注射）和SIRT1干预组（糖尿病小鼠+SRT1720的载体缓冲液灌胃）。通过血糖仪和胰岛素ELISA试剂盒分别检测小鼠空腹血糖、胰岛素水平。使用血液化学自动分析仪检测小鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白（LDL）-胆固醇和高密度脂蛋白（HDL）-胆固醇水平。收集小鼠白色脂肪组织冲洗并称重比较。通过RT-PCR分析脂肪生成转录因子PPARγ和SREBP-1c、脂肪酸合成因子Fas和Ap2、脂肪酸分解因子Hsl的mRNA表达。通过蛋白印迹分析AMPK-SIRT1-PGC-1通路蛋白的表达。结果：糖尿病组较对照组空腹血糖、胰岛素水平升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组空腹血糖、胰岛素水平降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组血清甘油三酯、总胆固醇、HDL-胆固醇和LDL-胆固醇升高（P<0.05）。糖尿病组较对照组附睾、腹膜后、肠系膜和腹股沟脂肪的重量升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组的白色脂肪重量降低（P<0.05）。SIRT1干预组较糖尿病组降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组的血糖水平在30、60和120分钟时升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组各时间点血糖水平降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组PPARγ、SREBP-1c、Fas、Ap2的mRNA表达升高（P<0.05）,HslmRNA降低（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病PPARγ、SREBP-1c、Fas、Ap2的mRNA表达升高,HslmRNA降低（P<0.05）。糖尿病组较对照磷酸化AMPK、SIRT1和PGC-1的表达降低（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组磷酸化AMPK、SIRT1和PGC-1的表达升高（P<0.05）。结论：调控SIRT1高表达可激活糖尿病小鼠AMPK/PGC-1α 信号通路,同时促进脂肪分解和抑制脂肪合成而表现出抗肥胖作用。     

对比增强高分辨率MRI评价大脑中动脉斑块的时程变化与脑脊液炎性因子水平的相关性

摘要 目的：探究对比增强高分辨率MRI评价大脑中动脉斑块的时程变化与脑脊液炎性因子水平的相关性。方法：采用高脂饮食联合两次球囊内皮剥脱术,在45只新西兰白兔的主动脉中诱导动脉粥样硬化斑块。27只兔子继续相同的饮食,而18只兔子除了饮食外还接受了吡格列酮（10 mg/kg口服）。36只动物接受了¹⁸F-FDG-PET/CT,45只动物在基线、治疗开始后1个月和3个月接受了 DCE-MRI。同时,监测脑脊液代谢参数。成像完成后进行主动脉组织学分析和相关性分析。结果：¹⁸F-FDG-PET/CT检测到对照组平均标准化摄取值（SUV）升高（P<0.05）,而治疗组SUV值稳定。DCE-MRI 检测到吡格列酮组的曲线下面积（AUC）降低（P<0.05）。与对照组相比,治疗组的脑脊液IL-6和TNF-α含量、载脂蛋白B密度以及氧化磷脂密度均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）,而平滑肌肌动蛋白密度差异无统计学意义（P＞0.05）。检测到SUV和IL-6以及AUC和TNF-α之间存在强正相关（分别为 r²=0.86,P<0.05和 r²=0.66,P=0.004）。结论：18F-FDG-PET/CT和DCE-MRI无创地证明了吡格列酮对粥样斑块的抗炎作用,并可分析大脑中动脉斑块的时程变化与脑脊液炎性因子水平的相关性,两种成像方式均可监测动脉粥样硬化的炎症变化,具有较高应用价值。     

超声重复辐照孕鼠对子代海马NMDA神经损伤的影响

摘要 目的：探讨超声重复辐照孕鼠对子代海马N-甲基-D天冬氨酸(N-methyl-D aspartic acid,NMDA)神经损伤的影响。方法：孕12~14 d昆明种小鼠27只随机平分为三组-对照组、短时间辐照组、长时间辐照组。用超声探头在各组孕鼠进行辐照0 min、10 min与20 min,让母鼠自然分娩哺育幼仔,将各组仔鼠随机挑选12只,检测仔鼠海马组织NMDA表达与神经损伤情况。结果：辐照过程中无孕鼠死亡,短时间辐照组、长时间辐照组仔鼠第30 d与60 d的总路程、中央路程、中央时间都少于对照组(P<0.05),长时间辐照组低于短时间辐照组(P<0.05)。短时间辐照组、长时间辐照组仔鼠第60 d的神经元细胞凋亡指数、海马组织乙酰胆碱酯酶含量都高于对照组(P<0.05),NMDA蛋白相对表达水平低于对照组(P<0.05),长时间辐照组与短时间辐照组对比差异也都有统计学意义(P<0.05)。结论：超声重复辐照孕鼠能抑制仔鼠海马组织NMDA蛋白表达,促进神经元细胞凋亡与提高乙酰胆碱酯酶含量,从而降低仔鼠的自主记忆活动能力。     

达格列净通过增强营养剥夺信号促进糖尿病肾病大鼠足细胞自噬的研究

摘要 目的：探究达格列净是否通过增强营养剥夺信号促进糖尿病大鼠肾脏足细胞自噬,延缓糖尿病肾病进展。方法：采用高脂饮食和低剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导糖尿病模型。将成模大鼠随机分为糖尿病组（n=6）,达格列净组（n=7）,另设正常对照组（n=7）。达格列净组和糖尿病组分别给予达格列净和生理盐水灌胃4周。灌胃结束后收集大鼠24 h尿液以及血液、肾脏。记录体重、肾重、肾周脂肪重并测定空腹血糖、空腹血清胰岛素、血肌酐、尿素氮、甘油三酯以及尿白蛋白、尿总蛋白、尿白蛋白/肌酐比值;ELISA法检测血清酮体水平;HE染色、PAS染色以及电镜观察肾脏组织病理学改变;免疫组化和免疫荧光检测各组自噬相关蛋白7（ATG7）和足细胞标记蛋白NPHS1的表达情况; Western blot检测各组肾皮质中ATG7、沉默信息调节因子同源蛋白1（SIRT1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活物-1α（PGC-1α）、成纤维细胞生长因子21（FGF21）、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（PEPCK）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）的蛋白水平。结果：与糖尿病组相比,达格列净组空腹血糖、24 h尿白蛋白、24 h尿总蛋白、尿白蛋白/肌酐比值降低,肾重/体重比、肾周脂肪重/体重比减小（P<0.05）;HE和PAS染色和电镜观察到糖尿病组较达格列净组肾小球基底膜增厚,足细胞足突增宽、融合（P<0.05）;达格列净组甘油三酯、空腹血清胰岛素以及胰岛素抵抗指数低于糖尿病组,血清酮体高于糖尿病组（P<0.05）;电镜下观察到达格列净组足细胞内自噬溶酶体数密度高于糖尿病组（P<0.05）;免疫组化和免疫荧光显示达格列净组足细胞NPHS1和ATG7的表达高于糖尿病组（P<0.05）; Western blot显示达格列净组肾皮质ATG7、SIRT1/PGC-1α/FGF21信号通路以及PEPCK、PPARα的表达较糖尿病组明显升高（P<0.05）。结论：达格列净增强营养剥夺信号的同时,观察到糖尿病大鼠肾脏足细胞自噬增强,这种自噬的增强可能是通过营养剥夺信号诱导的,其中的机制可能与达格列净上调SIRT1/PGC-1α /FGF21信号通路有关。     

吡格列酮二甲双胍联合运动康复对超重或肥胖2型糖尿病患者糖脂代谢和胰岛功能的影响

摘要 目的：探讨吡格列酮二甲双胍联合运动康复对超重或肥胖2型糖尿病患者糖脂代谢和胰岛功能的影响。方法：选取经一般生活方式干预血糖控制不佳的超重或肥胖2型糖尿病患者85例,按照干预方式分为药物组（40例）和联合组（45例）,两组均给予糖尿病教育和饮食指导,药物组给予吡格列酮二甲双胍片口服,联合组在药物组基础上给予运动康复,分别于干预前及干预3个月后,计算体质量指数（BMI）,测定空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hPG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和β细胞功能指数（HOMA-β）。结果：两组患者干预3个月后的FPG、2hPG、HBA1c、FINS、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、FFA均较干预前下降,HOMA-β、HDL-C较干预前升高（P＜0.05）,联合组干预3个月后的BMI较干预前下降（P＜0.05）。干预3个月后,联合组的BMI、2hPG、HBA1c、FINS、HOMA-IR、TC、LDL-C、TG、FFA均低于药物组（P＜0.05）。结论：吡格列酮二甲双胍联合运动康复可改善超重或肥胖2型糖尿病患者的糖脂代谢紊乱,并具有额外的减重获益,且能够改善患者的胰岛功能。     

血清Ferritin、Cat S、MCP-1与妊娠期糖尿病患者胰岛素抵抗的关系及妊娠结局的影响因素分析

摘要 目的：探讨血清铁蛋白（Ferritin）、组织蛋白酶S（Cat S）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）与妊娠期糖尿病（GDM）患者胰岛素抵抗的关系,并分析影响GDM患者妊娠结局的影响因素。方法：选取2019年4月～2021年12月期间来石家庄市妇幼保健院产检并诊断为GDM的产妇154例纳为GDM组,另取同期来石家庄市妇幼保健院产检的健康产妇100例作为对照组。检测对比两组的血清Ferritin、Cat S、MCP-1水平以及稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,血清Cat S、Ferritin、MCP-1与HOMA-IR的相关性以Pearson相关系数进行分析。GDM组患者根据妊娠结局分为正常妊娠结局组和不良妊娠结局组,妊娠结局的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果：GDM组血清Ferritin、Cat S、MCP-1水平及HOMA-IR均高于对照组（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示,GDM患者的血清Cat S、Ferritin、MCP-1水平与HOMA-IR均呈正相关（P<0.05）。154例GDM患者中,有58例出现不良妊娠结局,占比37.66%。单因素分析结果显示,GDM患者的妊娠结局与糖尿病家族史、GDM确诊时孕周、年龄、口服葡萄糖耐量试验（OGTT）结果、孕前体质量指数（BMI）、血清Ferritin、Cat S、MCP-1水平以及HOMA-IR有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：年龄≥35岁、孕前BMI≥24 kg/m²、OGTT结果＞2项异常、血清Ferritin、Cat S、MCP-1水平偏高是GDM患者妊娠结局不良的危险因素（P<0.05）。结论：GDM患者的血清Ferritin、Cat S、MCP-1水平异常升高,且与胰岛素抵抗有关。GDM患者的妊娠结局受到血清Ferritin、Cat S、MCP-1水平、年龄、孕前BMI、OGTT结果等因素影响。     

妊娠期母体甲状腺功能减退对胎鼠骨骼肌胰岛素抵抗和线粒体功能的影响

摘要 目的：研究妊娠期母体甲状腺功能减退对胎鼠骨骼肌胰岛素抵抗和线粒体功能的影响。方法：构建妊娠期母体甲状腺功能减退小鼠模型,制备胎鼠骨骼肌线粒体,同时选取健康正常胎鼠做本次实验的对照组。采用酶联免疫吸附法和放射免疫分析法测定两组小鼠甲状腺功能;通过全自动生化分析仪检测两组胎鼠胰岛素抵抗结果;利用Clark氧电极测定密闭反应体系评价两组胎鼠线粒体功能结果,并分析母体甲状腺功能减退与胎鼠骨骼肌胰岛素抵抗和线粒体功能的相关性。结果：两组小鼠甲状腺功能结果、两组胎鼠骨骼肌胰岛素抵抗和线粒体结果对比分析之间均有显著差异（P<0.05）。甲减组小鼠血清中促甲状腺激素（Thyroid Stimulating Hormone,TSH）、丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）均较对照组低,胎鼠的空腹血糖（fasting blood-glucose,FBG）、动态3（state3,ST3）、动态4（state4,ST4）呼吸速率和呼吸控制比（respiratory control,RCR）也均较对照组低;而甲减组小鼠游离甲状腺素（free thyroxine,FT4）却较对照组高,胎鼠的胰岛素（insulin,INS）和胰岛素抵抗结果（homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR）也较对照组高（P<0.05）。且母体甲状腺功能减退指标中FT4和RCR、ALT和FBG以及RCR之间有负相关关系,母体甲状腺功能减退的其他指标则与胎鼠骨骼肌胰岛素抵抗和线粒体功能的其他相关指标之间呈正相关关系（P<0.05）。结论：妊娠期母体甲状腺功能减退会降低胎鼠骨骼肌胰岛素抵抗和线粒体功能,影响胎鼠的正常发育。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Determination of stoichiometry of radioiodination of proteins

A sensitive method for the detection of small quantities of hydrophobic antioxidant free radical scavengers such as butylatedhydroxytoluene (BHT) and butylatedhydroxyanisole (BHA) in aqueous samples is described. The procedure involves extraction of the hydrophobic free radical scavenger into an organic solvent phase, followed by the subsequent reaction of an aliquot of this extract with the stable cation radical tris(p-bromophenyl)amminium hexachloroantimonate (TBACA). In experiments with BHT and BHA, the loss of TBACA absorbance at 730 nm was found to be linearly proportional to the amount of antioxidant added, with quantities of BHT as small as 200 pmol being easily detectable. In aqueous suspensions of dimyristoylphosphatidylcholine vesicles, assays of the aqueous BHT concentration showed that BHT partitioned strongly into the membrane phase, achieving very high BHT/phospholipid ratios. For a given concentration of BHT, partitioning into the membrane phase was greater in large, multilamellar liposomes than in either small, single-walled vesicles or in purified rat brain synaptic vesicle membranes. Direct assay of BHT and BHA in phospholipid membranes, however, was complicated by a nonspecific interaction between TBACA and the phospholipid.