产L-谷氨酸细菌As 1.542菌株的研究I．AS 1.542菌株的鉴定

从广州某酿酒广的土壤中分离出一株革兰氏阳性、无芽孢的产L一谷氨酸细菌。培养在普通肉汁琼脂平板上,菌落圆形、扁平、近草黄色、表面湿润、浑暗细粒状、无光泽、边缘半透明、钝齿状。生物素是必需生长因素。除由葡萄糖、果糖、甘露糖、麦芽糖、蔗糖、水杨苷、七叶灵及海藻糖产酸外,还能由糊精、肌醇及纤维二糖产酸,但均不产气。通气培养在含葡萄糖或醋酸和尿素或铵盐的适宜培养基中能积累大量L一谷氨酸。经鉴定认为是一个新种,定名为钝齿棒状杆菌AS 1.542(Corynebacterium crenatum n. sp. AS 1.542)。     

L-谷氨酸的综合利用 Ⅰ报:从 L-谷氨酸制取 L-谷氨酰胺

<正> 前言L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是自然界中存在的一种氨基酸,它已广泛用于生化和医药,对神经障碍及癫痫病人的脑机能有改善作用。特别对消化器官溃疡的治疗有卓越的效果。由于它的价格高,应用受到极大限制。其主要原因是不能采用一般制备酰胺的方法来制取。如以L-谷氨酸-r-甲酯为原料。直接在氨溶液中进行酰胺化时。产物     

利用大肠杆菌的L-谷氨酸脱羧酶测定醱酵液中的L-谷氨酸

研究谷氨酸醱酵生产味精,从选种到培养条件的研究过程中,谷氨酸测定的工作量很大,因此希望能够有准确而简便的测定方法。微生物中炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)等能够产生细胞外的D-谷氨酸多肽和D-谷氨酸聚合夹膜,因此选出的产生谷氨酸的菌种也有可能是产生D-谷氨酸的。这样就要求在进行谷氨酸定性、定量分析的同时还要测定旋光。可是在刚开始选种和条件培养的时候,谷氨酸的含量很低,要单独测定旋光,一方面大大增加了工作量,另一方面也受到产量低的限制。微     

L-谷氨酸氧化酶的研究进展

L-谷氨酸氧化酶（L-glutamate oxidase,GLOD）是一种以FAD为辅基的黄素蛋白酶类,可以专一性地氧化谷氨酸生成过氧化氢、氨和α-酮戊二酸,广泛应用于食品、医药、发酵等领域。从谷氨酸氧化酶的微生物来源、酶学性质、发酵条件、分离纯化及分析应用等方面进行阐述,并对其研究前景进行展望。     

环氧树脂固定化L-谷氨酸氧化酶

通过环氧树脂作为载体对经(NH4)2SO4盐析处理后的L-谷氨酸氧化酶(LGOX)进行固定化,优化固定化工艺条件,并利用固定化LGOX转化产α-酮戊二酸(α-KG)。结果表明:饱和度45%的(NH4)2SO4为最佳盐析浓度;当选用环氧树脂ES-105作为固定化载体、树脂加量为20 m L酶液(14 U/m L)加入3.5 g载体、固定化K3PO4缓冲液浓度为0.2 mol/L(p H 7.0)、固定化温度25℃、固定化时间24 h时,固定化LGOX酶活力最高,其酶活回收率为85.9%,比酶活55.7 U/g。利用该固定化酶转化L-谷氨酸产α-KG,当谷氨酸钠质量浓度为100 g/L,反应20 h,产物收率达98.2%。固定化酶重复使用14批次后,产物收率仍有90%以上;重复使用20批,收率有83.2%。因此,该固定化酶具有具良好的操作稳定性。     

L-谷氨酸补料分批发酵的研究

对谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriuin glutamicum)HCJ46产L-谷氨酸的补料分批发酵条件进行研究.结果表明:最适初糖质量浓度和最佳残糖维持质量浓度分别为100和(10～20)g/L;对发酵控温方式进行研究,确定了最佳温度控制策略为0～8h维持32℃,8～16h维持34℃、16～32h维持36℃,同时发现相对溶氧控制在30%左右时产酸最高.在以上的优化条件下,L-谷氨酸产量从72g/L提高到95g/L,提高了31.9%.     

L-赖氨酸·L-谷氨酸盐制备工艺的研究

本文研究了L -赖氨酸·L -谷氨酸盐制备过程中脱盐、复合、结晶等工艺对产品的收率和质量的影响。研究了工艺过程的控制方法 ,为此产品的工业化生产提供了重要的参数     

用谷氨酸发酵生产L-脯氨酸

日本协和发酵公司的中西等人用亚硝基胍诱发处理乙酰乙酸棒杆菌(Coryneb.acetoacidopnilum)ATCC13870,从变异株中选到脯氨酸(Pro)的高产菌TA-20。筛选培养基主要成分:2％谷氨酸(GA)(以其钠盐加入),葡萄糖     

产生L-谷氨酸的棒状杆菌新种

从北京某食品厂的淀粉废浆水中分离出一株革兰氏染色阳性、无芽孢的产L-谷氨酸细菌。生物素是必需生长因素,硫胺素或某些氨基酸有促进生长的作用,能耐较高浓度的尿素,除由葡萄糖、果糖、甘露糖、麦芽糖、蔗糖及商藻糖产酸外,还能由肌醇、糊精及木糖产酸,但均不产气。通气培养在含葡萄糖和尿素或铵盐的适宜培养基中,能积累大量L一谷氨酸,经鉴定认为是一新种,定名为北京棒状杆菌A S 1.299(Corynebacterium pekinensen. Sp. A S 1.299)。     

耐温性L-谷氨酸发酵菌种的选育

应用基因组改组技术提高,L-谷氨酸生产菌在高温发酵条件下的谷氨酸产量。以天津短杆菌T6—13变异株SW07-1为原始亲株,分别经紫外线（UV）-硫酸二乙酯（DES）和X射线诱变,获得5株耐温性能略有提高的突变菌株。经2轮基因组改组,获得耐高温（能在44℃生长）的L-谷氨酸菌株F2-50。F2—50在38℃下,摇瓶发酵40h,发酵液中L-谷氨酸浓度比原始出发菌株提高了近41％,在41℃高温下,摇瓶发酵40h,L-谷氨酸浓度比原始出发菌株提高了近2倍。     

理性代谢工程改造促进谷氨酸棒杆菌高效合成L-谷氨酸

L-谷氨酸是世界上第一大宗氨基酸产品,广泛应用于食品医药及化工等行业。以谷氨酸高产菌谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum) G01为出发菌株,首先通过敲除主要副产物丙氨酸合成相关基因-丙氨酸氨基转移酶编码基因(alaT),降低了发酵副产物丙氨酸含量。其次,α-酮戊二酸节点碳流量对谷氨酸合成起重要作用,因此,采用核糖体结合位点(ribosome-binding site,RBS)序列优化降低了α-酮戊二酸脱氢酶的活性,强化了谷氨酸合成代谢流。同时通过筛选不同来源的谷氨酸脱氢酶,加强了α-酮戊二酸内源转化为谷氨酸的能力。接着,对谷氨酸转运蛋白进行理性设计,提高了谷氨酸的外排能力。最后,对基于以上策略构建的整合菌株进行了5 L发酵罐发酵优化,通过梯度升温结合分批补料策略,谷氨酸产量为(136.33±4.68) g/L,较原始菌的产量(96.53±2.32) g/L提高了41.2%;糖酸转化率为55.8%,较原始菌的44.2%提高了11.6%;且降低了副产物丙氨酸的含量。以上策略一定程度上提高了谷氨酸的产量与糖酸转化率,可为谷氨酸生产菌株的代谢改造提供参考。     

甘蔗废糖蜜发酵L-谷氨酸的试验

细菌发酵法制造L-谷氨酸,在我国至今还是利用淀粉质等粮食原料,每生产一吨谷氨酸约需4—5吨的淀粉质原料。因此我国每年用于味精工业的用粮需消耗几十万吨。 我厂为贯彻执行毛主席关于“备战、备荒、为人民”的伟大战略方针,节约工业用粮,支援祖国社会主义建     

L-谷氨酸温度敏感突变株的选育

采用黄色短杆菌TJ1为出发菌株,根据代谢控制发酵原理,利用紫外线、硫酸二乙酯进行诱变,定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度敏感突变株TMGO106。然后,以温度敏感突变株TMGO106和产酸率高（10.5%以上）的天津短杆菌TG961为新株,通过原生质体融合技术,成功地选育出了产酸率高的融合子CN1021（13．6g/dl,糖酸转化率达60％）,在6m^3发酵罐上中试其L－谷氨酸产量达14．6％,糖酸转化率达62．8％,并且该菌株系温度敏感型菌株,可用于谷氨酸强度发酵。     

亚硝酸诱变导致枯草杆菌中L-丙氨酸脱氢酶对L-谷氨酸脱氢酶的转换 Ⅱ.L-谷氨酸脱氢酶阳性变种中L-丙氨酸脱氢酶的诱导形成

枯草杆菌B.subtilis IRC-3-N-1,GDH~+变种在营养培养基上生长时能产生ADH。这样合成的ADH是誘导性貭的。誘导物除了酶的底物,L-丙氨酸外,尚有DL-天門冬氨酸,DL-苏氨酸,D-丙氨酸与丙酮酸。将酶进行純化时,GDH与誘导性的ADH始終同时存在于每一步驟中,而且两者的比例不变。誘导性的ADH与野生型细菌的本貭性ADH在电泳移动率上沒有区別。由于ADH誘导形成时,并末观察到变种細胞內GDH的相应減少,同时抑制了ADH的誘导合成,并不引起GDH水平的变化,因之由后者直接轉变成前者的可能性并不存在。所有GDH~+变种,包括自亚硝酸誘发突变或自发突变来源的,都能誘导生成ADH。从以上这些試驗結果,以及以前关于ADH与GDH免疫学試驗的結果,作者們认为枯草杆菌中,由亚硝酸誘发突变而引起ADH轉換成GDH的原因是由于与ADH合成有关的調节基因发生突变的結果。     

牛肝L-谷氨酸脱氢酶在压力下的解离

运用荧光光谱方法研究了牛肝Ｌ－谷氨酸脱氢酶（ＧＤＨ）在压力下的解离。研究表明,在２ｋｂａｒ时ＧＤＨ由六聚体解离成亚基,标准解离体积变化为－２９３ｍｌ／ｍｏｌ,解离自由能为４８ｋｃａｌ／ｍｏｌ（１０℃）。ＧＤＨ在压力下的解离还显示出异常的浓度依赖性,表明在天然寡聚蛋白的布居中存在着自由能不同的单体聚合。不同温度下的ＧＤＨ解离研究结果表明,由亚基－六聚体的聚合是一熵增驱动过程。ｂｉｓ－ＡＮＳ存在时观察到的现象,暗示谷氨酸脱氢酶的亚基解离过程中发生了构象漂移（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｄｒｉｆｔ）。此外还研究了底物结合对解离的影响     

L-谷氨酸生产关键技术创新与产业化应用

L-谷氨酸是目前产量最大的氨基酸品种,也是我国生产规模最大的生物发酵产品。随着合成生物技术以及新型生产装备和技术的发展,国内L-谷氨酸菌种和生产技术近年来取得了明显的提升。本文从L-谷氨酸产业的现状分析和关键技术创新需求的角度出发,概述了L-谷氨酸菌种和生产技术的研究进展,介绍了近年来L-谷氨酸生产关键技术的创新开发和产业应用的进展。     

温度敏感型突变细菌生产L-谷氨酸

新发明的一种好气性培养用的培养基,除去富含生物素而外,还含有油酸一类的高度不饱和脂肪酸。在这样的培养基上发酵培养谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutanicum和乳酸发酵短杆菌(Brevibacterium lactofermentum)温     

酶法转化L-谷氨酸生产a-酮戊二酸

利用L-谷氨酸氧化酶(LGOX),对酶法转化L-谷氨酸生产α-酮戊二酸(α-KG)的工艺条件进行了研究。首先对野生菌链霉菌Streptomyces sp.FMME066进行亚硝基胍诱变,获得一株遗传性状稳定的突变株Streptomyces sp.FMME067;突变株在最优培养基(g/L):果糖10,蛋白胨7.5,KH2PO4 1,CaCl2 0.05条件下,LGOX酶活为0.14 U/mL。LGOX的生化特征为最适pH 8.5、温度35℃,Mn2+是激活剂。对LGOX转化L-谷氨酸生产α-KG的条件进行优化,在最优条件下转化24 h,α-KG产量为38.1 g/L,转化率为81.4%。研究结果为开发LGOX酶法转化生产α-KG的工业化奠定了坚实的基础。     

TCA循环关键节点对L-谷氨酸合成的影响

谷氨酸是一种重要的氨基酸,其衍生出来的高值化产品具有广泛的应用,市场需求量巨大。文中通过对出发菌株谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum E01和谷氨酸高产菌C. glutamicum G01进行转录组测序与重测序分析,挑选中心代谢途径中转录水平和基因水平上存在差异的基因进行研究,以挖掘出对谷氨酸合成影响较大的基因进一步提高谷氨酸的产量。草酰乙酸节点和α-酮戊二酸节点在谷氨酸合成中扮演着重要角色,探索研究了草酰乙酸节点和α-酮戊二酸节点对谷氨酸生产的扰动影响。综合以上实验结果构建的整合菌株,5 L发酵罐发酵过程中其菌体生长速率较原始菌略有降低,但48h的谷氨酸产量高达(136.09±5.53)g/L,较原始菌的(93.53±4.52)g/L提高了45.5%;糖酸转化率提高至58.9%,较原始菌的45.2%提高了13.7%。可见,上述实验策略的应用在一定程度上提高了谷氨酸产量和糖酸转化率,为谷氨酸棒杆菌的代谢工程改造提供了理论基础。     

酶法转化L-谷氨酸生产α-酮戊二酸

利用L-谷氨酸氧化酶(LGOX),对酶法转化L-谷氨酸生产α-酮戊二酸(α-KG)的工艺条件进行了研究。首先对野生菌链霉菌Streptomyces sp.FMME066进行亚硝基胍诱变,获得一株遗传性状稳定的突变株Streptomyces sp.FMME067;突变株在最优培养基(g/L):果糖10,蛋白胨7.5,KH2PO4 1,CaCl2 0.05条件下,LGOX酶活为0.14 U/mL。LGOX的生化特征为最适pH 8.5、温度35℃,Mn2+是激活剂。对LGOX转化L-谷氨酸生产α-KG的条件进行优化,在最优条件下转化24 h,α-KG产量为38.1 g/L,转化率为81.4%。研究结果为开发LGOX酶法转化生产α-KG的工业化奠定了坚实的基础。