CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究

研究了ＣＤ３ε和ＰＭＡ对细胞凋亡基因ｆａｓ的转录调控作用．根据已知的人ｆａｓ基因５＇上游序列设计引物,用ＰＣＲ法从人胸腺细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ｆａｓ５＇上游长为４４６ｂｐ的启动子片段．将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体ｐＸＰ２中．经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒ＤＮＡ的结构和序列正确．用此质粒（ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ）瞬时转染人ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞,分析报告基因的表达水平．结果表明ｆａｓ基因上游－５０６到－６０的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的１．５倍．抗ＣＤ３ε抗体和ＰＭＡ处理均可增强ｆａｓ启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ转染细胞的１．７倍和３．３倍,但二者没有协同作用．ＰＫＣ的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ＰＴＫ的抑制剂ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ可抑制ＰＭＡ诱导的ｆａｓ基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用ＰＭＡ处理的水平．但ＰＴＫ的另一种抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可与ＰＭＡ发挥协同作用,上调ｆａｓ基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到５倍．这些结果为阐明ＣＤ３ε及ＰＭＡ介导Ｔ淋巴细胞激活和凋亡的分子机制     

蛋白激酶C对鼻咽癌细胞P21~(ras)表达的影响

使用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂与抗Ｐ２１Ｈ－ｒａｓ单抗,通过免疫细胞化学,双参数流式细胞仪等方法,探讨鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ中ＰＫＣ与Ｈ－ｒａｓ表达的关系。结果：１）Ｐ２１ｒａｓ蛋白在ＣＮＥ－２Ｚ细胞主要在胞膜（２７％）与胞浆（９３．７％）表达。作用于ＰＫＣ调节区的抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）与作用于催化区的ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）在明显抑制细胞生长的浓度使Ｐ２１ｒａｓ表达程度均减弱,胞膜阳性率明显降低,分别为５．６％与１．６％。２）蛋白质－ＤＮＡ双参数流式细胞法测定发现在Ｇ１期细胞群Ｒａｓ蛋白表达差异较大,提示Ｒａｓ蛋白主要在Ｇ１期合成逐渐增多;经ＰＫＣ抑制剂ＳＳ与ＳＴ处理后,Ｇ１期细胞表达的差异减小,说明ＰＫＣ抑制剂抑制了Ｇ１期Ｒａｓ蛋白合成。本研究结果提示：ＰＫＣ对Ｒａｓ蛋白向发挥作用的部位胞膜的转移具有一定的调控作用。Ｒａｓ蛋白的表达可能与ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｇ１／Ｓ期的过渡有关。     

蛋白激酶和D—鞘氨醇对人肝癌细胞磷脂酶D活力的调节

为了研究蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和酪氨酸激酶（ＴＰＫ）对７７２１人肝癌细胞中磷脂酰胆碱（ＰＣ０专一性磷脂酶Ｄ（ＰＬＤ）的调节,测定了各种ＰＫＣ和ＴＰＫ抑制剂和ＰＫＣ抗体对该细胞中ＰＬＤ活力的影响。结果发现：４种ＰＫＣ抑制剂Ｃｈｅｌｅｒｙｔｈｒｉｎｅ,Ｈ－７,ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ和星形孢菌素（Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）,以及２种ＴＰＫ抑制剂Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ４６和木质异黄酮（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）ｆ     

蛋白激酶C对N－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ的调节

人肝癌细胞株７７２１细胞的Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ（ＧｎＴⅢ）活性受Ｓｅｒ／Ｔｈｒ蛋白激酶的两种抑制剂ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ和三氟吡嗪（ＴＦＰ）．蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的两种特异性抑制剂Ｄ－鞘氨醇和ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ的抑制。用ＰＭＡ处理细胞舌,ＧｎＴⅢ活力随膜性ＰＫＣ（ｍ－ＰＫＣ）活力而平行变化,但与胞液ＰＫＣ活力的变化无关。Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ、Ｄ－鞘氨醇和ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ还能够阻断ＰＭＡ对ＧｎＴⅢ的激活。Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ、ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ对ｍ－ＰＫＣ和ＧｎＴⅢ的抑制作用基本上与它们的应用浓度成正比关系。当人及大鼠肾脏的粗ＧｎＴ制剂分别用碱性磷酸酶切除磷酸基后,ＧＤＴⅢ的活力明显下降。这些结果表明ｍ－ＰＫＣ可能通过蛋白质的Ｓｅｒ／Ｔｈｒ残基上磷酸化和去磷酸化作用直接或间接地调节ＧｎＴⅢ。     

蛋白激酶C对CNE-2Z细胞p53基因表达的影响

用抗人ｐ５３蛋白单抗,进行免疫细胞化学染色,研究了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞ｐ５３基因表达的影响。结果发现：对照组Ｐ５３蛋白阳性细胞百分比为６７．６９±２．９７。ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）终浓度分别为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０－５ｍｏｌ／Ｌ诱导细胞２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３０．４４±４．２５和２９．１９±２．３９,较对照组均明显降低,Ｐ＜０．０１。用终浓度为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＴＰＡ和终浓度为４ｕｇ／ｍｌ的ＯＡＧ分别作用２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３３．７５±４．３４和６８．１８±４．４２,前者较对照组明显降低,Ｐ＜０．０１,后者变化不明显。阳性细胞中对照组和ＯＡＧ组以胞核和胞浆均着色为主,而ＳＳ、ＳＴ和ＴＰＡ组以胞核着色为主。以上结果表明：突变型ｐ５３基因在ＣＮＥ－２Ｚ细胞中有较高表达;通过抑制细胞ＰＫＣ活性和耗竭ＰＫＣ含量后,均可降低ｐ５３基因的表达;ＰＫＣ激活剂ＯＡＧ对该细胞ｐ５３基因的表达无明显影响。     

低氧大鼠肺动脉内皮细胞VEGF变化与PKC活性关系的探讨

目的：探讨低氧培养大鼠肺动脉血管内皮细胞ＶＥＧＦ的表达变化与ＰＫＣ活性的关系。方法：培养大鼠肺动脉血管内皮细胞,观察低氧（１％Ｏ２）培养不同时间大鼠肺动脉血管内皮细胞浆、膜ＰＫＣ活性和培养液中ＶＥＧＦ水平变化;加入ＰＫＣ抑制剂（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）后,测定低氧、常氧培养不同时间二者的变化。结果：低氧时膜ＰＫＣ活性和培养液中ＶＥＧＦ水平明显升高（Ｐ＜０．０１）。而加入ＰＫＣ抑制剂后,常氧和低     

蛋白激酶C对胰岛素样生长因子—1促糖代谢作用的影响

为了研究蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ１）促糖代谢过程中所起的作用,分别检测ＰＣＫ激动剂佛波醇酯（ＰＭＡ）和抑制剂星形孢菌素（Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）对ＩＧＦ１降糖作用的影响。结果表明ＰＭＡ和星形孢菌素分别能抑和增强ＩＧＦ１的降糖作用,建立了高表达ＰＫＣα的ＨｅｐＧ２细胞株,ＩＧＦ１对此细胞株的降糖作用与对照相比大大增强,ＰＭＡ和星形孢菌素分别可大大抑制和增强ＩＧＦ１对ＰＣ     

丝裂素活化蛋白激酶参与内皮素刺激的兔主动脉平滑肌细胞增生

内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ,ＥＴ）是已知的体内活性最强的缩血管物质,其缩血管作用由Ｇ蛋白偶联受体所介导。但ＥＴ强大的促血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生效应的机理尚未完全阐明。本研究选用培养的兔胸主动脉ＶＳＭＣ,探讨丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）在ＥＴ促细胞增生中的作用。结果表明：ＥＴ－１呈时间和浓度依赖性地促进细胞摄取￣３Ｈ－ＴｄＲ和激活ＭＡＰＫ,此作用可被蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ,ＰＫＣ）抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）,Ｈ－７和ＥＴ＿Ａ受体拮抗剂ＢＱ１２３所抑制,但不被酪氨酸激酶抑制剂ＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ（Ｈｅｒｂ）所抑制,用ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ（Ｐｈｏｒｂｏｌｍｙｒｉｓｔａｔｅａｃｅｔａｔｅ）预处理ＶＳＭＣ,使其ＰＫＣ活性下调,可显著减弱ＥＴ－１对ＭＡＰＫ的激活能力。本结果提示：（１）ＭＡＰＫ参与ＥＴ－１所致的ＶＳＭＣ增生;（２）ＥＴ－１促细胞增生与激活ＭＡＰＫ的作用是由ＥＴ＿Ａ受体和ＰＫＣ介导的。     

内皮素-1对培养新生大鼠心肌细胞原癌基因c-fos表达的诱导

本实验用无血清的培养新生大鼠心肌细胞,探讨内皮素１（ＥＴ１）对原癌基因ｃｆｏｓ表达的作用。结果显示：ＥＴ１可显著诱导ｃｆｏｓ的表达,其表达的高峰在３０ｍｉｎ,２ｈ恢复到正常水平,并呈剂量依赖性反应和被ＥＴＡ的特异性受体拮抗剂ＢＱ１２３所阻断;蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）激动剂ＰＭＡ可诱导ｃｆｏｓ表达,而ＰＫＣ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ则可阻断ＥＴ１诱导的ｃｆｏｓ表达;钙通道阻断剂硝苯吡啶预处理心肌细胞对ＥＴ１诱导的心肌细胞的ｃｆｏｓ表达无明显的作用。这些结果提示,ＥＴ１诱导ｃｆｏｓ表达是通过ＥＴＡ受体介导的,ＰＫＣ在此过程中起重要作用。     

牙鲆甲状腺激素受体TRαA介导甲状腺激素调控的靶基因鉴定

为了鉴定牙鲆甲状腺激素受体TRs介导甲状腺激素调控的靶基因, 研究采用RT-PCR克隆了TRαA基因的CDS区, 并构建了p3×Flag-TRαA重组真核表达载体;该重组质粒转染HEK293T细胞后, RT-PCR、实时定量PCR与Western blot检测均表明牙鲆TRαA在哺乳动物蛋白表达系统中成功转录并翻译;且重组质粒转染的细胞裂解液通过G1亲和层析柱纯化、过滤除菌可得到纯的融合蛋白3×Flag-TRαA, 然后双荧光素酶报告实验通过在HEK293T细胞中共转染p3×Flag-TRαA和含候选靶启动子的报告基因表达载体pGL3-Pro-atoh8-1517/1333/708, 表明TRαA受体结合在atoh8基因启动子区–1497— –688特异的2个TRE识别序列来调控该基因的转录, 即atoh8是TRαA介导甲状腺激素直接调控的靶基因。研究为深入探究甲状腺激素受体TRαA介导甲状腺激素调控的信号通路提供了基础依据。     

人β球蛋白基因5‘旁侧远端新沉墨子区的功能和鉴定

为探讨β珠蛋白基因５‘旁侧远端及／或δ－β基因间序列调控中所起的作用本文重组含不同长度５’旁侧远端上序列的β基因逆病毒载体并转染Ｈｅｌａ细胞,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ凶迹杂交和ＲＴ－ｃｐＣＲ竞争性定量检测β基因在Ｈｅｌａ细胞中的稳定表达水平,发现在β基因上游约１．８ｋｂ处存在一强默子活性区;进而通过竞争性凝胶阻滞分析主要定位于一长为３１０ｂｐ的ＤＮＡ片段中,从中发现众多调控相关序列;用荧光素酶报告基因瞬     

含VEGF启动子的报告基因的构建及雌激素受体对其活性的影响

目的：构建含血管内皮生长因子（VEGF）基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素受体作用下的转录活性。方法：以乳腺癌细胞系MCF-7基因组为模板,扩增VEGF启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的报告基因载体转染293T细胞,检测重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果：酶切鉴定和DNA序列分析表明构建了正确的pGL3-basic—VEGF报告基因载体;转录活性实验表明构建的报告基因载体具有启动子活性,雌激素受体α（ERα）能以剂量依赖的方式升高VEGF启动子调控下的报告基因的转录。结论：克隆了VEGF启动子,为ERα共调节子的功能研究奠定了基础。     

视黄酸刺激RARE调控荧光素酶报告基因表达系统的构建与应用

类维生素A,通过视黄酸(retinoic acid,RA)代谢旺盛组织的靶基因调控,与生物节律通路相互作用,在代谢性疾病发展过程中发挥着重要作用。在293T及小鼠肝原代细胞中,构建视黄酸反应元件(RARE)调控的荧光素酶报告基因表达系统,为研究类维生素A与节律和代谢研究中靶基因上游调控信号分子提供可能。用定点突变PCR方法在p GL3-Basic载体中插入RARE片段,检测报告基因表达及RARE对视黄酸响应的半数有效浓度(EC50),初步筛选可能调控RARE的靶基因,通过酶切连接将荧光素酶报告基因Luciferase和启动子RARE片段构入穿梭载体p Shuttle,转入感受态细胞BJ518获得重组腺病毒载体Ad-BasicRARE-Luc,转染MGH细胞并进行扩增,在小鼠肝原代细胞检测腺病毒活性。结果显示,构建的RARE调控的荧光素酶报告基因表达载体在293T细胞可被RA刺激,RARβ促进RA刺激RARE表达,而CRY1抑制RARE-Luc对RA的响应,并成功构建了在小鼠肝原代细胞响应RA刺激的Adeasy-Basic-RARE-Luc腺病毒载体。     

毛喉萜抑制人胃癌细胞BGC－823增殖与ras基因表达相关性研究

毛喉萜（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）对人胄癌细胞ＢＧＣ－８２３增殖有明显抑制作用,具药物剂量和作用时间之依赖性。剂量为２×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ之毛喉萜使胃癌细胞在软琼脂中形成集落的能力显著降低;癌基因ｃ－Ｈａ－ｒａｓ之表达明显被抑制,细胞核中与ｒａｓ基因上游调控区２．５ｋｂ片段结合的三种蛋白结合能力下降。联系到以同样浓度药物处理胃癌细胞７２ｈ,细胞质、膜与细胞核中蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性均下降的现象,可能ＰＫＣ活性下降与Ｈａ－ｒａｓ基因上游片段２．５ｋｂ结合蛋白之结合能力下降存在相关性,ＰＫＣ可能通过影响ＤＮＡ结合蛋白的磷酸化作用,导致了Ｈａ－ｒａｓ基因表达之被阻抑。而ｒａｓ基因表达下降可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖的一个重要分子事件。     

iNOS在不同种属血管细胞中诱导表达差异的比较研究

为了探讨不同种属血管细胞中ｉＮＯＳ基因诱导表达的差异及其分子机制,采用Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ印迹、电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）和细胞转染实验对ｉＮＯＳ基因在人、牛、大鼠血管内皮细胞（ＥＣ）和兔、大鼠平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）中的诱导表达和转录调控机制进行了研究．结果显示,ＩＬ－１β可诱导人、大鼠的ＥＣ和大鼠的ＶＳＭＣ表达ｉＮＯＳ,但对兔ＶＳＭＣ和牛ＥＣ无诱导作用．在ＩＬ－１β＋ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ作用下,人和大鼠血管细胞ｉＮＯＳ的表达活性显著高于牛和兔,同一种属动物的ＶＳＭＣ比ＥＣ更易被诱导活化．用含有大鼠ｉＮＯＳ基因上游－１０３７～－４３８片段的报告基因转染这些细胞,经细胞因子和ＬＰＳ处理后,被转染细胞的ＣＡＴ活性变化与细胞的ｉＮＯＳ表达活性相一致．上述结果表明,ｉＮＯＳ表达调节具有种属特异性和细胞特异性．ＥＭＳＡ证实在不同种属的ＥＣ和ＶＳＭＣ中,与ｉＮＯＳ基因表达调控区（－１０３７～－７８７）相互作用的蛋白因子是不均一的．提示不同种属血管细胞内特异转录因子的种类及浓度不同和（或）反式因子与顺式元件相互作用的方式不同可能是这种差异的分子基础．     

Purα蛋白质不同结构域对APP基因表达的调控作用

该研究将构建的含淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)基因启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒与Purα全长基因或含不同结构域的Purα缺失突变体共转染到U87MG细胞中,进行萤火虫荧光素酶活性测定,以确定Purα对APP基因表达的调控作用。同时,将Purα全长基因及含有不同结构域的Purα缺失突变体的真核表达载体分别转染至U87MG细胞,使目的蛋白过表达,通过实时定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)研究Purα不同的结构域对APP基因在转录、翻译水平的调控作用。结果显示,Purα全长蛋白及其不同结构域对APP基因表达均有不同程度的抑制作用,但至少保持N-端或C-端的结构域可能是维持Purα蛋白功能的必要条件。     

蛋白激酶C和Na~＋－H~＋交换在ANGⅡ诱发心肌细胞肥大反应中的作用

血管紧张素（ＡＮＧ）Ⅱ在１０－１０－１０－６ｍｏｌ／Ｌ范围内剂量依赖性促进无血清培养新生大鼠心肌细胞蛋白质合成速率。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（Ｓｔａｕ２ｎｍｏｌ／Ｌ）对心肌细胞基础状态３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入无明显影响，但Ｓｔａｕ预处理３０ｍｉｎ，则可有效阻断ＡＮＧⅡ（１μｍｏｌ／Ｌ）对细胞蛋白质合成的刺激作用；单纯应用ＰＫＣ激活剂ＰＭＡ（１μｍｏｌ／Ｌ）可使心肌细胞蛋白质合成速率增加，与对照组相比，ＰＭＡ组３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量增加了４１．０４％。细胞Ｎａ＋－Ｈ＋交换抑制剂Ａｍｉｌｏｒｉｄｅ预处理也能阻断ＡＮＧⅡ刺激３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入细胞蛋白质的作用。以上结果提示ＰＫＣ和Ｎａ＋－Ｈ＋交换的激活，可能是ＡＮＧⅡ诱发的心肌细胞肥大反应的重要胞内信息转导机制。本工作还观察到，阻断细胞Ｎａ＋－Ｈ＋交换后并不影响由ＰＫＣ激活导致的蛋白质合成增加，提示可能存在着ＰＫＣ和Ｎａ＋－Ｈ＋交换彼此相对独立地调节心肌细胞生长的途径。     

β-萘黄酮能抑制荧光素酶活性

目的：研究β-萘黄酮对荧光索酶活性的影响。方法：利用人GCLC基因调控序列驱动的GCLC．PGL3．enhancer-Luciferase报道载体（PL45）转染人肺腺癌细胞A549,人肝癌细胞HepG2,人子宫颈癌细胞HeLa,人乳腺癌细胞MCF-7,人肝癌细胞Bel-7402,人支气管上皮细胞16HBE,β-萘黄酮刺激后,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对GCLC基因表达的影响。westerblot检测β-NF刺激16HBE细胞后GCLC蛋白水平的变化。β-萘黄酮刺激转染了表达Luciferase的真核表达载体pRC／CMV2．1uc＋的A549和HepG2细胞后,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对Luciferase基因表达的影响。PIA5转染A549和HepG2细胞,裂解细胞后用p-NF刺激,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对Luciferase基因的影响。结果：在各种细胞中,转染PL45报道载体后,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（p〈0．01）。westerblot结果显示β-NF处理组GCLC蛋白的表达较DMsO对照蛆明显升高。在A549和HepG2细胞中,转染pRC／CMV2．1uc＋载体后,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（P〈0．01）。PIA5转染A549和HepG2细胞,裂解细胞后用β-NF刺激,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（P〈0．01）。结论：β-萘黄酮直接抑制了荧光素酶的活性     

MCF细胞中人干细胞因子基因新调控元件的鉴定

人干细胞因子（ｈｕｍａｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ,ｈＳＣＦ）是一个多功能细胞生长因子,调节某些哺乳动物干细胞如原始胚细胞的增殖、分化和移居。为研究ｈＳＣＦ基因的转录调控机理,对ｈＳＣＦ基因５’旁侧序列不同长度片段进行亚克隆,构建系列重组ｐＧＬ２荧光素酶报告基因载体,转染人乳腺癌细胞株ＭＣＦ并检测ｌｕｃ基因一过性表达活性。然后应用电泳迁移率变动分析技术,鉴定活性片段与ＭＣＦ细胞核抽提蛋白质     

细胞松驰素B促微丝解聚对DNA合成的作用

利用微丝（ｍｉｃｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ,ＭＦ）解聚药物细胞松驰素Ｂ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ,ＣＢ）处理Ｇ_０期小鼠Ｃ_３Ｈ_（１０）Ｔ_（１／２）成纤维细胞,对Ｇ_０至Ｓ期ＤＮＡ合成,胸腺嘧啶核苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性、ＴＫ基因表达、钙调素（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察,Ｇ_０期细胞经３ｍｇ／ＬＣＢ处理２ｈ,促ＭＦ解聚增强了血清对Ｓ期细胞ＴＫ活性、ＴＫ基因表达和ＤＮＡ合成的刺激作用,并促进细胞提前进入Ｓ期．血清刺激Ｇ_０期细胞进入晚Ｇ_１期和Ｓ期时,ＣａＭ水平明显升高,而ＣＢ预处理则使ＣａＭ含量进一步增加,特别是ＣＢ处理促使Ｓ期ＣａＭ增加向核内转移．ＣＢ处理明显增强血清对ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达的刺激作用,而ＰＫＣ抑制剂Ｈ_７则抑制ＣＢ处理对这些基因转录的刺激作用,说明ＣＢ使Ｇ_０期细胞ＭＦ解聚刺激ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的转录活性与ＰＫＣ的作用有关．结果表明Ｇ_０至Ｓ期早期ＭＦ的重组可促进细胞进入Ｓ期,增强ＤＮＡ合成．