重组可溶性TRAIL的表达与生物学活性

研究重组可溶性TRAIL的抗肿瘤生物学活性。采用基因分子生物学方法构建重组可溶性TRAIL的表达载体,建立大肠杆菌表达菌株,采用柱层析等方法获得纯化的重组可溶性TRAIL;采用流式细胞术、细胞活性测定法和体内药效学实验分析重组可溶性TRAIL杀伤肿瘤细胞的生物学活性。结果表明重组可溶性TRAIL在体外可诱导人白血病细胞和肝癌细胞凋亡,凋亡率达50%以上。中枢神经系统的肿瘤细胞对重组可溶性TRAIL不敏感。重组可溶性TRAIL在体内能显著抑制人非小细胞肺癌细胞在小鼠体内生长,抑制率达70%以上。结论为研究制备的重组可溶性TRAIL能在体内外杀死多种肿瘤细胞,具有显著的临床应用前景。     

CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究

研究了ＣＤ３ε和ＰＭＡ对细胞凋亡基因ｆａｓ的转录调控作用．根据已知的人ｆａｓ基因５＇上游序列设计引物,用ＰＣＲ法从人胸腺细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ｆａｓ５＇上游长为４４６ｂｐ的启动子片段．将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体ｐＸＰ２中．经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒ＤＮＡ的结构和序列正确．用此质粒（ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ）瞬时转染人ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞,分析报告基因的表达水平．结果表明ｆａｓ基因上游－５０６到－６０的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的１．５倍．抗ＣＤ３ε抗体和ＰＭＡ处理均可增强ｆａｓ启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ转染细胞的１．７倍和３．３倍,但二者没有协同作用．ＰＫＣ的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ＰＴＫ的抑制剂ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ可抑制ＰＭＡ诱导的ｆａｓ基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用ＰＭＡ处理的水平．但ＰＴＫ的另一种抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可与ＰＭＡ发挥协同作用,上调ｆａｓ基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到５倍．这些结果为阐明ＣＤ３ε及ＰＭＡ介导Ｔ淋巴细胞激活和凋亡的分子机制     

磷酸钙柱层析在分离动物组织核糖核酸中的应用及其对核糖核酸稳定性的研究

(1)本实验探索了磷酸钙柱层析在分离动物组织RNA提取液的洗脱条件。(2)磷酸钙柱层析应用于大鼠肝RNA总溶液的分离获得重复性较好的柱层析图谱。(3)对大鼠肝磷酸钙柱层析各峰的RNA性质进行初步分析,但对B峰的性质还不了解。(4)磷酸钙柱层析本身似对RNA分子的降解无甚影响。(5)比较了正常肝、再生肝及3′-甲基奶油黄诱发肝癌RNA的磷酸钙柱层析图谱。(6)观察了大鼠腎、胰、脑等组织RNA的磷酸钙柱层析图谱,与肝脏者有明显的差别。(7)观察了感染脑心肌炎病毒小鼠脑RNA的柱层析图谱,并试验了所洗脱的RNA的部分的致病活性。     

胸腺素在治疗原发性免疫缺陷病和恶性肿瘤中的应用

胸腺素是从小牛胸腺提取出来的一组多肽(至少12个),其分子量范围为1,200～14,000,此外,还含有少量的单核苷酸、寡核苷酸,醣和脂肪。经初步临床试验,胸腺素治疗原发性免疫缺损病有显著的效果,减少病人的感染情况,增加血中的T细胞数目和淋巴细胞功能以及对回忆试验抗原的迟缓超敏反应。在恶性肿瘤病人中,胸腺素使血中T细胞百分率显著增高。应用胸腺素在动物中和临床上所进行的研究表明自家免疫病可能是胸腺素分泌不足的结果。本文通过所报导的实验结果企图阐明胸腺素在治疗免疫缺损症的功效的前景。     

小牛胸腺素F_5提取方法和体外活性测定方法的改进

胸腺素F_5的分离提纯方法,Goldstein等人已有报道,我们对以上方法进行改进和简化,并建立了应用人脐带血淋巴细胞作体外生物测定胸腺素活性的玫瑰花结方法。用此改进的方法制备的胸腺素F_5的生物化学和免疫化学的研究,以后将详细报道。     

猪淋巴细胞表面E受体再生表达的免疫电镜观察

本文用酶标免疫电镜技术对猪外周淋巴细胞E受体在细胞表面的分布以及在细胞内合成代谢的状况进行了研究。实验结果表明:E受体在淋巴细胞表面呈点状均匀分布。胰蛋白酶处理使细胞表面E受体消失,经培养后可逐渐自发重建;正常情况下静止的淋巴细胞内E受体的合成水平很低;小牛胸腺肽制剂处理可以促进E受体在细胞质内的合成,加速其表达过程;更生霉素及嘌呤霉素等RNA合成抑制剂可抑制E受体的再生;以ConA活化的猪淋巴细胞内可见E受体活跃的合成;E受体合成部位是在粗面内质网上及散在的核蛋白体上。     

人淋巴细胞CD2基因5’侧翼序列的克隆和鉴定

本文报告以ＣＤ２ｃＤＮＡ５’端的片段作探针,从人Ｔ淋巴细胞基因组文库筛选阳性重组克隆,经限制性内切酶降解和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明其中一个阳性克隆的插入片段中含ＣＤ２基因５’侧翼顺序。经插入片段的亚克隆、限制性内切酶图谱及ＤＮＡ序列分析,鉴定出一含转录起始点及其上游序列的４．０ｋｂ片段。将此片段中含转录起始点和两个ＤＮ（ａｓｅ）Ⅰ高敏感位点的２．５ｋｂ片段定向克隆到以虫萤光素酶为报告基因的表达载体ｐＭＧ３中,并用限制性内切酶对此２．５ｋｂ片段作不同程度缺失,构成一系列突变子。这些重组的表达质粒转染人ＪｕｒｋａｔＴ细胞后,以瞬时表达实验分析各突变子驱动虫萤光素酶基因的表达,结果发现在ＣＤ２基因５’上游具有很弱的启动子活性,初步测定该启动子位于－１．２ｋｂ～－９８ｂｐ域。ＣＤ２基因具有弱启动子、强增强子的特点与Ｔ细胞表面其它抗原分子基因是相似的。     

小牛胸腺素F_5提取方法和体外活性测定方法的改进

胸腺素F_5的分离提纯方法,Goldstein等人已有报道,我们对以上方法进行改进和简化,并建立了应用人脐带血淋巴细胞作体外生物测定胸腺素活性的玫瑰花结方法。用此改进的方法制备的胸腺素F_5的生物化学和免疫化学的研究,以后将详细报道。     

小牛胸腺素F_5提取和活性测定方法的改进及其性质的研究

前言胸腺对机体免疫特别是细胞免疫的演化、成熟和功能调节作用的研究是当代免疫学的一个重大进展。1972年 Goldstein.等从小牛胸腺中成功地提纯了具有生物活性的多肽,命名为胸腺素(Thymosin)。胸腺素 F_5(Thym-osin Fraction 5即第五步提取得到的半纯品,以下简称 F_5),在先天性无胸腺鼠,去除胸腺成熟鼠,有严重自家免疫反应的 NZB小鼠,带瘤小鼠,以及由酪蛋白诱发的淀粉样变性症的小鼠中,具有诱导 T 细胞分