镉对金银花的毒物刺激效应

采用水培方法,研究不同浓度镉(Cd)(0、0.5、2.5、5、10和25 mg· L-1)胁迫下金银花的生长特征,分析低浓度Cd对金银花产生的毒物刺激效应.结果表明:低浓度Cd处理(≤5mg·L-1)对金银花最大根长、植株干质量以及叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量均产生显著刺激效应,分别比对照增加13.6％、11.7％、14.0％、10.8％和54.5％;低浓度Cd(≤5mg·L-1)对叶片含水量表现出一定程度的促进作用,但影响不显著;当Cd浓度≥10mg·L-1,对金银花的生长表现出显著的抑制作用.当Cd浓度为25 mg·L-1时,金银花地上部Cd含量达到622.93 mg· kg-1,表明金银花对Cd具有较强的超富集能力.Cd对金银花产生毒物刺激效应的剂量范围为0.5 ～5 mg·L-1.     

金银花花形基因的发掘及生物信息学分析

金银花作为我国重要的中药材,具有消炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、防癌等多种功效。随着金银花市场供需矛盾日益加剧,通过分子标记辅助选择育种方法来培育高产优质品种势在必行。通过NCBI的Blast工具扫描金银花蛋白组数据发掘花形候选基因,并执行候选基因的亲缘关系分析、结构域分析、表达模式分析、理化性质分析、蛋白质结构预测等一系列生物信息学分析。依据拟南芥调控花形的ABE类基因,通过NCBI-Blast工具扫描金银花氨基酸序列,筛选出包含MADS结构域的8个调控花形的金银花候选基因。经LjaFGD表达模式分析发现,金银花的花中GWHGAAZE016592和GWHGAAZE014905表达量显著高于其他部位,可能正向调控金银花花形。GWHGAAZE014905是一个包含MADS结构域的调控花器官发育的B类基因;GWHGAAZE016592是AP3同源基因。生物信息学分析发现,GWHGAAZE016592和GWHGAAZE014905均是稳定的亲水蛋白,属于非分泌蛋白,包括Motif1、Motif3、Motif4、Motif2、Motif6和Motif5,蛋白质三级结构模板为6byy.2.A和4ox0.2.C。GWHGAAZE014905被定位到细胞核上,而GWHGAAZE016592被定位到叶绿体上,且包含1个位于151~173 bp的跨膜螺旋区域,属于膜蛋白。研究结果为分子标记辅助选择方式培育道地高产优质金银花品种提供了基因资源和分子标记。     

不同干燥技术对金银花药用品质的影响

采用真空干燥、冷冻干燥、微波干燥、蒸后烘干、烘干和晒干等6种干燥技术对大白期金银花花蕾外观性状及内在品质的影响进行分析研究.结果表明:(1)微波干燥、蒸后烘干和冷冻干燥所获得的金银花外观品质好;(2)从水溶出物量和醇溶出物量上看,微波干燥、蒸后烘干和晒干技术所获得的溶出物量高;用比色法和HPLC法检测显示,蒸后烘干样品中有效成分———绿原酸、总黄酮含量最高,其次是微波干燥法,而烘干样品中含量最低;(3)不同干燥技术对金银花中营养成分———游离氨基酸和可溶性糖含量的影响以及对药用有效成分的影响不同,因此金银花作为药材使用时应选择蒸后烘干技术进行初加工;(4)晒干、冷冻干燥和微波干燥3种干燥方法对金银花挥发油主要组分种类没有产生影响,但相对质量分数仍有明显差异,只有晒干的金银花挥发油中检测出了9,19-环化-羊毛甾烯醇,而微波干燥的样品中维生素E含量最高,挥发油中γ-5-谷甾烯-3-醇、5,2-豆甾二烯-3-醇、菜籽甾醇相对含量较其它方法明显高出很多.因此,蒸后烘干和微波干燥技术可作为规模化干燥加工金银花的最佳方法.     

10种植物乙醇提取物对金银花蚜虫的生物活性研究

采用微量滴定法测定了10种植物乙醇提取物对金银花蚜虫的生物活性.结果表明,10种植物乙醇提取物对金银花蚜虫均有一定的驱避活性和毒杀作用.在10 mg/mL的浓度下,臭椿、曼陀罗和桂花的提取物对金银花蚜虫的驱避作用较强,其在12 h的驱避率分别为78.74％、77.54％、75.11％;夏枯草提取物的驱避效果最弱,12 h的驱避率为58.53％.随着处理时间的延长,各植物提取物的驱避效果均呈下降趋势;印楝提取物的毒杀活性最强,72 h后的校正死亡率达68.30％;曼陀罗和苦瓜的作用次之,72 h后的校正死亡率分别为66.41％和63.70％;夏枯草提取物的作用最低,72 h后的校正死亡率仅为26.47％.进一步的毒力分析表明,印楝提取物对金银花蚜虫的毒力较强,24h的Lc.值为11.0836 mg,/mL.     

金银花配方颗粒、标准汤剂含量测定及指纹图谱研究

本文主要为金银花配方颗粒的质量评价提供依据,并建立金银花配方颗粒、标准汤剂含量测定及HPLC指纹图谱的研究方法。主要采用HPLC法测定金银花饮片、标准汤剂、配方颗粒绿原酸、木犀草苷含量,建立三者指纹图谱共有模式。结果显示金银花饮片、标准汤剂、配方颗粒中绿原酸、木犀草苷含量差异较大;分别建立金银花饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱;金银花配方颗粒HPLC指纹图谱中的12个共有峰均可在标准汤剂中追踪到,有11个可以在饮片中得到追踪,并指认出绿原酸、芦丁、木犀草苷3种成分。表明所建立的定性、定量分析方法简便,准确度高,专属性强,对金银花配方颗粒的鉴定及质量控制具有指导意义和参考价值。     

1株曲霉属真菌(Aspergillus sp.)固体发酵对金银花及叶的活性成分影响

木犀草苷具有很高的应用价值。为了提高金银花中木犀草苷的含量,利用从野生冬虫夏草周围环境中分离的1株曲霉属真菌GL625对金银花进行固体发酵,并分析测定金银花中主要活性成分木犀草苷等的变化。以大米-金银花、大米-金银花叶为底物进行固体发酵15 d后,将发酵产物用95%乙醇超声辅助提取。采用高效液相色谱(HPLC)分析金银花发酵前后指纹图谱差异性与活性成分的含量变化,通过双层平板打孔法比较金银花发酵前后95%乙醇提取物的抑菌活性差异。结果表明,金银花固体发酵后绿原酸和芦丁分别降低了20.14、1.73 mg/g,而木犀草苷发酵后增加了4.76 mg/g;物质a、b的含量也显著上升,在HPLC图中Rt=17.5 min后吸收峰明显丰富;金银花叶在发酵后绿原酸、芦丁同样分别降低了11.74、0.99 mg/g,而木犀草苷增加了5.07 mg/g;并且金银花发酵产物的95%乙醇提取物抑菌活性明显强于未发酵以及对照组。结果说明,GL625是一株能转化金银花提高木犀草苷的曲霉属真菌,且物质a、b含量的显著上升增强了抑菌活性。     

镉胁迫对金银花生理生态特征的影响

采用水培试验方法,研究了不同浓度镉(Cd)(0、5、10、25和50 mg·L^-1) 胁迫条件下藤本植物金银花的生长和生理特性.结果表明: 与对照相比,Cd胁迫对金银花的生长未造成明显影响,在5～50 mg·L^-1 Cd处理下,其生物量无明显差异(P>0.05),在低浓度Cd(5 mg·L^-1)处理下生物量有所增加,叶、根生物量和总生物量分别增加了2.88%、2.33%和1.25%,说明金银花对Cd具有较强的抗性.在低浓度Cd胁迫下,植物各器官的含水量和可溶性蛋白含量均有所降低,而根系和叶片的丙二醛含量分别增加51.90%和23.07%,叶绿素和类胡萝卜素含量则增加15.87%和24.89%,超氧化物歧化酶活性也显著增强.随着Cd浓度的增高,金银花体内的叶绿素和类胡萝卜素含量,以及超氧化物歧化酶活性均有所降低.     

气相色谱法测定金银花中有机氯杀虫剂残留量

山东平邑和河南封丘是中国金银花(Lonicera japonica Thunb.)的道地产区,也是主要产区,生产的金银花不但供给中国内地市场的需要,而且出口到海外.有机氯杀虫剂残留量是中药材出口检测的重要指标之一,有机氯杀虫剂在中国虽然已经禁用,但由于其高度的稳定性,即使在种植期间不使用该种农药,也可能由于土地中尚有残留而造成对药材的污染[1].金银花属于多年生植物,因此有必要对其药材中的有机氯杀虫剂残留量进行检测.     

金银花尺蠖一新种(鳞翅目:尺蛾科)

金银花Lonicera japonica Thunb.是药用植物,在山东、浙江等省种植很广,经济价值     

基于焦磷酸测序分析技术的金银花掺伪鉴别方法研究

金银花是大宗药材,市场掺伪时有发生,但目前的检测方法不能满足快速准确的检测需求,因此亟需建立快精准的检测方法。为了确立高精准度和大通量的金银花掺伪鉴别检测方法,结合SNP标记及焦磷酸测序分型分析技术,对金银花及其常见伪品差异性SNP位点进行PCR扩增及焦磷酸测序分析。结果发现,运用焦磷酸测序技术对金银花和山银花的差异性SNP位点进行定量分析,能够对金银花真伪及掺伪量进行鉴定。该方法兼有PCR技术的灵敏性和焦磷酸测序技术的准确性,具有重复性好、自动化程度较高、易操作的特点,能在3小时之内完成金银花成分掺伪量的检测工作,并得出量化结果。     

赤芍和白芍新鲜花瓣正己烷提取成分GC-MS分析

目的:赤芍和白芍新鲜花瓣正己烷提取成分比较分析。方法:正己烷浸出法提取新鲜花瓣挥发性物质,GC-MS分析、鉴定其化学成分。结果:从赤芍新鲜花瓣挥发性物质中鉴定出33种化学成分;白芍新鲜花瓣挥发性物质中鉴定出35种化学成分。二者中的主要成分为棕榈酸,二十三烷,二十五烷,二十七烷,二十九烷等。赤芍花瓣含有更多小分子芳香类成分,如苯乙醇、法尼醇类等;白芍缺少这些成分,其芳香类成分有β-沉香醇、反式-橙花椒醇等。结论:赤芍(野生芍药)与白芍(栽培芍药)花瓣芳香气成分有差异。     

不同品种药用菊花中游离糖类及游离氨基酸含量的HPLC分析

为比较不同品种菊花的品质特征,本文采用HPLC法测定其游离糖类及游离氨基酸的含量.结果表明,不同品种菊花中游离糖类主要成分是果糖和葡萄糖,蔗糖和麦芽糖未检出,总游离糖类含量约为9.07～18.76g/1O0g,其中黄山贡菊中含量最高,为18.76g/100g,黄菊中最低,为9.07g/100g;其总游离氨基酸含量约为0.563～2.806g/100g,七月菊中含量最高,为2.806g/100g,杭白菊中最低,为0.563g/100g.     

HPLC法测定葛花中鸢尾苷的含量

目的：测定8个产地葛花中鸢尾苷的含量,建立葛花中鸢尾苷含量测定的HPLC方法。方法：采用GRACEC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为0.8mL/min,紫外检测波长为265nm;柱温为室温。结果：鸢尾苷的峰面积（Y）与浓度（X）在11.8～236.4μg/mL范围内具有良好线性关系,Y=34920X-1156.5,r=0.9995（n=7）;平均加样回收率为103.66%,RSD〈2%（n=9）;测得8批不同产地的葛花药材中鸢尾苷含量在37.00～113.1mg/g。结论：建立了高效液相色谱法测定葛花中鸢尾苷含量的方法,该法准确、可靠,可用于葛花中主要成分鸢尾苷的含量测定;不同产地葛花中均检测到鸢尾苷,但其含量有一定区别。     

Toxicity of daphnane-type diterpenoids from Genkwa Flos and their pharmacokinetic profile in rat

Daphnane-type diterpenoids (DDs) are the main types of plant diterpene orthoesters known and have remarkable biological activities. However, the in vivo toxicity and pharmacokinetic profile of DDs remains unkonwn. The aim of this study was to investigate the toxicity and pharmacokinetic profile of DDs from Genkwa Flos (Thymelaeaceae). The toxicity of diterpenoids was evaluated after oral administration of total diterpenoids extract from Genkwa Flos to rats, and the blood concentration of diterpenoids was analyzed by ultra performance liquid chromatography tandem triple-quadrupole mass spectrometry (UPLC–TQ-MS). The diterpenoids were confirmed to be the toxic components of Genkwa Flos. The pharmacokinetic profile of these diterpenoids was quite different due to their different structures. Although the contents of yuanhuafine and yuanhuapine were low in the extract, the blood concentrations were extremely high. In contrary, the contents of genkwanine F and Wikstroemia factor M₁ in the extract were much higher, but they could not be detected in the blood. This result implied that yuanhuafine and yuanhuapine but not genkwanine F and Wikstroemia factor M₁ were the potentail toxic components of Genkwa Flos in vivo. This paper shows for the first time the toxicity of diterpenoids from Genkwa Flos was correlated with their blood concentration and when DDs were used for medicinal purposes, their contents in herb as well as their blood concentrations should be considered.     

不同产地丁香挥发性成分分析

采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术对产自国内外4个地区的丁香(Eugenia caryophyllata Thunb.)挥发性成分进行了检测,并以峰面积归一化法计算了各组分的相对含量。结果显示,从4个产地13批次丁香中共鉴定出挥发性成分72种(匹配度均高于75),其中,主要成分含量排名前两位的均为丁香酚、(-)-α-芹子烯,排名第三位的挥发性成分分别为:顺式-α-没药烯(马达加斯加塔马塔夫,平均为3.75%)、罗勒烯(中国广东,平均为4.21%)、亚麻三烯(中国广西,平均为3.74%)、丁香烯(印度尼西亚爪哇岛,平均为3.60%)。表明同一产地的丁香挥发性成分具有一定的相似性,不同产地丁香挥发性成分也有一定的差异,这对丁香产地的鉴别具有重要意义。主成分分析和聚类分析的结果既可以将4个产地的丁香很好地区分开来,又能反映出它们之间的亲缘关系。本研究采用HS-SPME-GC-MS方法检测不同产地丁香挥发性成分并结合主成分分析(PCA)及聚类分析法,能有效区分4个产地的丁香,该方法可作为丁香产地的鉴别方法,也为进一步比较不同产地丁香挥发性成分的差异及质量控制提供了新思路。     

中药金银花药用成分的提取及抑菌实验的研究

为了研究金银花中抗菌消炎成分总黄酮、绿原酸的提取方法及其抑菌效果,本实验中用金银花的提取物对11种菌种进行筛选,并对其中有抑制作用的菌种进行了最小抑菌浓度的实验。结果表明金银花的提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较强的抑制作用,对金黄色葡萄球菌的MIC为6．25mg／ml,对大肠杆菌的MIC为12．5mg／ml。     

HPLC测定葛花中6″-O-木糖鸢尾苷的含量

本文建立了葛花中6″-O-木糖鸢尾苷含量测定的HPLC方法。采用GRACE C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,紫外检测波长为265 nm,柱温为室温。6″-O-木糖鸢尾苷的峰面积(Y)与浓度(X)在10.33～185.99μg/mL范围内线性关系良好,Y=30731X–216635,r=0.9992(n=7);平均回收率为100.2%,RSD<2%(n=9);测得8批葛花药材中6″-O-木糖鸢尾苷含量为11.08～48.23 mg/g。方法学验证结果表明该法准确、可靠,可用于葛花中主要成分6″-O-木糖鸢尾苷的含量测定。     

两种忍冬属植物叶表皮扫描电镜观察及其生态适应性的研究

利用扫描电镜观察2种忍冬属植物的叶表皮形态特征,观察指标包括气孔器、表皮毛、表皮细胞等。扫描电镜观察结果表明:气孔仅分布在下表皮,气孔器散生并为无规则型;下表皮密被表皮毛(包括腺状毛和非腺毛);上表皮细胞的垂周壁呈沟槽状下陷;同时在下表皮还分布有瘤状的草酸钙簇晶。为进一步研究这2种忍冬属植物叶的形态解剖特征,通过光学显微镜观察发现,叶均为异面叶,栅栏组织发达,细胞长柱形;海绵组织细胞类圆形,排列紧密;叶脉机械组织发达。以上这些构造特征,都有利于减少植物体水分的散失,以适应我国西南岩溶区干旱环境特征。通过进一步分析电镜观察结果,发现在忍冬叶的上表皮中脉处有呈线状分布的腺状表皮毛,而华南忍冬叶的上表皮则无表皮毛分布,这一微形态特征可以作为二者种间特异性差别,从而为二者的合理区分提供一定的依据。     

Fingerprint analysis of Flos Carthami by capillary electrophoresis

Capillary electrophoresis (CE) was employed in fingerprint analysis of Flos Carthami. A standardized procedure was used to develop the CE fingerprint. An electrophoretic profile of genuine Flos Carthami from Fengqiu, He'nan, China, was first established as the characteristic fingerprint. This profile was then used to identify and assess the consistency of the herb. A study with a limited number of samples from nine sources showed a fair consistency in their CE fingerprints with that of the genuine sample. Flos Carthami was well distinguished from Stigma Croci, a possible substitute in traditional Chinese medicine, and Flos Hemerocallis, a commercial adulterant, by comparing the fingerprints of each herb.