~(60)Coγ-线对人血淋巴细胞DNA和RNA合成能力的影响

T例人血在体外接受~(60)Coγ-_线照射后进行培养,用~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)和~(14)C-尿嘧啶核苷(~(14)C-UR)作掺入实验,以反映DNA和RNA的合成能力。应用滤膜法收获细胞,液体闪烁计数器测定双标记样品,发现γ-线对DNA和RNA合成的影响有一定规律,即随照射剂量的增加,~3H和~(14)C掺入的放射性呈指数下降。经统计处理分别得到照射剂量和~3H-TdR、~(14)C-UR掺入的放射性计数的对数值两变量间的直线迥归方程。10拉德的照射导致~3H—TdR和~(14)C-UR掺入的放射性计数显著性减少,RNA比DNA合成受抑更明显。     

猪肝刺激物质pHSS对离体肝细胞DNA合成的影响

应用[~3H]TdR掺入离体培养大鼠肝细胞DNA的方法,测定由本室提取的pHSS的生物活性。结果表明,pHSS可显著促进原代培养大鼠肝细胞的DNA合成,其促进率约为对照组的10倍左右。培养液中血清浓度对pHSS的生物活性表达有显著影响,不同浓度血清可以使pHSS表现出不同的量效关系,这些结果在Buffello大鼠肝细胞系的实验中得到进一步证实。在低剂量pHSS的刺激下,不同年龄大鼠肝细胞的[~3H]TdR掺入率无显著差异。但高剂量时,pHSS对幼鼠作用不明显。     

PHA刺激对淋巴细胞修复DNA损伤的影响

本文报道PHA刺激对淋巴细胞DNA修复的影响的实验结果。以254nm波长的UV照射细胞(30J/m~2)引起DNA损伤,以[~3H]-TdR掺入实验测定非程序DNA合成,用超微量法测定细胞的NAD~+含量,并以[~(35)S]-蛋氨酸掺入,聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影术测定蛋白质生物合成,其结果如下: (1)在被PHA转化的淋巴细胞内非程序DNA合成,随PHA刺激的时间加长而增高;PHA处理淋巴细胞42小时,合成的速率约增加4倍;(2)在转化的淋巴细胞内,非程序DNA合成及程序DNA合成都被N-乙基马来酰亚胺(一种DNA聚合酶α的抑制剂)抑制,表明在DNA修复过程中DNA聚合酶α可代替DNA聚合酶β发挥作用; (3)UV照射后,被PHA刺激的淋巴细胞内NAD~+含量大约减少43.2％,而对照淋巴细胞内NAD~+的含量只减少25％,似乎说明PHA刺激能促进淋巴细胞内的P-ADP-核糖化作用;(4)在受PHA刺激72小时的淋巴细胞内有多种蛋白质合成,这些细胞在UV照射后以含10μg/ml嘌呤霉素的培养基培养,则非程序DNA合成被明显抑制(P<0.01),这提示DNA修复是一需要蛋白质合成的过程。此外,在受UV照射后10-45小时的淋巴细胞内,诱导产生一种分子量大约34000道尔顿的蛋白质。 上述结果表明,当PHA使淋巴细胞从静止状态转化为增殖状态时,有多种酶被诱导。由于这些酶,如DNA聚合酶α及P-ADP-核糖聚合     

心室成纤维细胞条件培养液促进成纤维细胞胶原合成和增殖

采用心室成纤维细胞条件培养液培养心室成纤维细胞,通过测定[^3H]－脯氨酸（[^3H]－proline）的掺入率来了解心室成纤维细胞总胶原合成速率,通过测定[^3H]－胸腺嘧啶核苷（[^3H]－TdR）的掺入率以及c-fos基因的表达丰度来了解心室成纤维细胞的增殖速率。结果显示：心室成纤维细胞条件培养液（FCGM）能增加细胞自身的[^3H]－proline的掺入率和[^3H]－TdR的掺入率,并具有剂量依赖性;FCGM也能促进细胞自身c-fos基因的表达,刺激后1h达高峰。ETA受体拮抗剂BQ123能部分阻断FCGM增加成纤维细胞胶原合成的增殖作用,而AT1受体拮抗剂CV11974和α肾上腺素受体拮抗剂regitin无此效果。结果提示：心室成纤维细胞具有自分泌功能,能分泌内皮素等生物活性物质,促进成纤维细胞胶原的合成和增殖。     

小麦花药培养中小孢子DNA合成的放射自显影研究

用放射自显影术研究小麦花药培养中小孢子的雄核发育,发现培养24小时后3H－胸腺嘧啶核苷掺入单核晚期小孢子,2．5天后营养细胞核中有3H－胸腺嘧啶核苷掺入,由A和B途径形成多细胞花粉的过程中,超始几次孢子体分裂,细胞的DNA合成是同步进行的。在多细胞花粉形成时逐渐变为不同步,生殖核的DNA合成不活跃,偶而能被标记上,个别合成DNA的生殖细胞形成类胚柄结构,当培养基中蔗糖浓度低（3％）时,培养早期小孢子内核的DNA合成正常进行,3H－胸腺嘧啶核苷比高糖浓度（9％）更易惨入小孢子,但经1－2次分裂后,核不再分裂,细胞壁不形成,所以3％的糖浓度中,多细胞花粉不能形成,主要不是DNA不能复制,而是细胞分裂和细胞壁的形成受阻所致。     

小麦花药培养中小孢子DNA合成的放射自显影研究

用放射自显影术研究小麦花药培养中小孢子的雄核发育,发现培养24小时后3H－胸腺嘧啶核苷掺入单核晚期小孢子,2．5天后营养细胞核中有3H－胸腺嘧啶核苷掺入,由A和B途径形成多细胞花粉的过程中,超始几次孢子体分裂,细胞的DNA合成是同步进行的。在多细胞花粉形成时逐渐变为不同步,生殖核的DNA合成不活跃,偶而能被标记上,个别合成DNA的生殖细胞形成类胚柄结构,当培养基中蔗糖浓度低（3％）时,培养早期小孢子内核的DNA合成正常进行,3H－胸腺嘧啶核苷比高糖浓度（9％）更易惨入小孢子,但经1－2次分裂后,核不再分裂,细胞壁不形成,所以3％的糖浓度中,多细胞花粉不能形成,主要不是DNA不能复制,而是细胞分裂和细胞壁的形成受阻所致。     

钙调素拮抗剂小柏胺衍生物对成纤维细胞增殖和功能的影响

为了研究钙调素拮抗剂EBB对成纤维细胞增殖和功能的影响,我们观察了经EBB作用后成纤维细胞的生长曲线、~3H-TdR掺入、钙调素水平的变化以及细胞增殖周期中DNA的改变和~3H-脯氨酸掺入。结果表明EBB直接抑制细胞增殖,使钙调素水平下降,DNA合成受阻,并使细胞停滞于生长周期中的G_0+G_1期。另外,胶原合成也受到阻抑。     

二咖啡酰奎宁酸对成纤维细胞增殖与功能的影响

探讨二咖啡酰奎宁酸（IBE5）对成纤维细胞活力,增殖及功能的影响。研究IBE5抗肝纤维化的机制,实验采用体外培养的NIH／3T3细胞作为成纤维细胞的替代模型,常规培养,质量深度为250,125,62.5,31.25,15.6,7.8mg/L的IBE5加入细胞中培养24h;[^3H]-TdR掺入法测定细胞增殖率;[^3H]-Pro掺入法测定细胞活力;[^3H]-Pro掺入,胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,结果显示以上6个浓度的IBE5对细胞均无毒性,各组均可显著抑制细胞增殖,促进细胞活力,明显抑制胶原和透明质酸的合成,以250mg/L为最佳浓度,IBE5能显著抑制3T3细胞增殖,胶原和透明质酸合成并对细胞活力有促进作用,IBE5在 外具有显著的抗肝纤维化作用,对于防治肝纤维化可能有一定的临床意义和应用前景。     

大白菜花药培养中花粉早期DNA的合成

应用显微放射自显影技术,在大白菜(Brassica pekinensis Rupr.)花药离体培养初期观察了~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入花粉核及其DNA复制类型。花粉去分化进入第一次孢子体分裂主要发生在DNA合成的单核和非均等分裂的营养核的花粉粒中。 实验证明花粉的DNA合成在低温预处理过程中已经开始,离体花药培养后,大大促进花粉DNA的合成。花粉单核在培养后24小时~3H-TdR掺入达到高峰,花粉有丝分裂产生两个均等子核的最大数量是在培养后48小时。 讨论了花药体细胞组织——绒毡层和药内壁对花粉核DNA合成的影响。     

抗-20诱导的三眠家蚕后丝腺RNA聚合酶和RNA的合成

蚕在4龄期开始的48小时连续取食抗-20,4眠家蚕被诱导成3眠蚕并吐丝结茧。根据对α-鹅膏蕈碱的敏感性,放线菌素D的抑制作用,DNA需要以及[~3H]-UMP掺入酸不可溶物,测定了蚕后丝腺的RNA聚合酶Ⅰ和Ⅱ活力。观察到随着抗-20处理后天数的增加,RNA聚合酶在热变性小牛胸腺DNA和内源DNA上转录活性迅速升高,并伴随着RNA合成的迅速增加;而对照组蚕的酶活力和RNA含量仍保持在相当稳定的低水平。     

植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究——Ⅷ.C_4植物PEP羧化酶的光诱导形成

连续照光可使玉米和高粱黄化叶切片PEP羧化酶活性提高,同时[~3H]一亮氨酸掺入蛋白质和叶绿素的含量也增加。 应用蛋白质合成抑制剂放线菌酮、放线菌素D和光合作用抑制剂DCMU所得资料表明光刺激黄化叶片PEP羧化酶活性的提高与光合电子传递无关而与叶片蛋白质的合成有关。放线菌酮和放线菌素D强烈抑制酶的活性,同时也抑制放射性标记化合物掺入转绿叶切片中。放射性同位素标记试验表明[~3H]一亮氨酸大量掺入转绿玉米叶切片的PEP羧化酶蛋白中。 应用PEP羧化酶抗血清进行双向免疫扩散和兔疫吸附测定得到的结果亦表明玉米、高粱等C_4植物绿色叶片的PEP羧化酶的形成受光的诱导。     

~(60)Coγ-线对DNA、RNA、蛋白质合成代谢的效应

人血在体外受~(60)co γ-线照射后,用~3H-TdR、~(14)C-UR、~(14)C-缬氨酸和~3H-亮氨酸作掺入实验,分别反映DNA、RNA和蛋白质的合成能力。结果说明γ线对三种大分子合成的影响有一定规律性,即随剂量增加,掺入的放射性呈指数下降,10拉德导致~3H-TdR和~(14)C UR掺入放射性显著减少,四种标记化合物掺入下降的趋势基本一致。     

猪胸腺激素对淋巴细胞DNA复制和转录的刺激作用

胸腺激素可促进T细胞成熟分化,调节免疫细胞功能,因而在免疫中起重要作用。T细胞在成熟过程中,将出现Lyt 1,2,3及绵羊红血球受体等表面标志和TDT。本研究以~3H-TdR和~3H-Leu掺入试验观察猪胸腺激素PTH和DNA复制及蛋白质合成的关系,以玫瑰花结及TDT为标志研究PTH在T细胞成熟中的作用。     

~(60)Co-γ辐照对中国仓鼠卵巢成纤维细胞DNA和组蛋白合成的影响

本文介绍了~(60)Co-γ辐照对同步的和非同步的CHO细胞的DNA合成和组蛋白合成关系的影响的研究,用~3H-胸腺嘧啶核苷和~(14)C-丙氨酸双标记,未经辐照的和经4Gy～60Gy ~(60)Co-γ辐照的CHO细胞,通过~3H和~(14)C的参入来估价DNA和组蛋白的合成,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定辐照前后组蛋白各组分的变化情况,实验表明: 1)、在4～60Gy剂量范内,无论是同步的还是非同步的CHO细胞其DNA合成和组蛋白合成都受到不同程度的抑制。2)、在辐照后1—3小时,DNA合成和组蛋白合成都受到不同程度的抑制,但辐照后4小时,DNA合成被进一步抑制而组蛋白的合成却逐渐恢复正常,到辐照后48小时组蛋白的合成几乎接近对照水平。3)、16Gy ~(60)Co-γ辐照后8小时,非同步的CHO细胞的DNA合成被抑制的情况比G_1期CHO细胞更为严重。4)、16Gy ~(60)Co-γ辐照S期细胞,在辐照后1—24小时中DNA合成被明显抑制的同时,组蛋白的合成也受到相应的抑制。5)、从未经辐照的和经6、16和60Gy~(60)Co-γ辐照的CHO细胞分别提取全组蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,从电泳图谱的变化清楚地看到组蛋白H_1和H_3受辐照影响大于组蛋白H_4和H_(2B)+H_(2A),因此我们推测DNA合成和组蛋白H_1和H_3的关系较之组蛋白H_4和H_(2A)+H_(2B)更为密切。     

鼠肝细胞癌变中DNA甲基化作用的研究

本文用~3H标记的S-腺苷酰甲硫氨酸(~3H-SAM)为甲基供体,以同位素掺入法测定了正常小鼠肝细胞、H_(223)腹水癌细胞及荷癌肝细胞的DNA甲基化酶活力。并用HPLC法测定了上述细胞的DNA甲基化水平。发现:H_(223)腹水癌细胞及荷癌肝细胞的DNA甲基化酶活力和DNA甲基化水平明显低于正常肝细胞。当以抗肝癌药物去甲斑蝥素和斑蝥酸钠处理荷癌小鼠6天后,可使H_(223)腹水癌细胞及荷癌肝细胞的DNA甲基化酶活力回升,但并未检出DNA甲基化水平的回升。     

EGFR反义脱氧寡核苷酸及其硫代修饰片段抑制人肝癌细胞系BEL-7404细胞生长

本文旨在研究针对EGFR mRNA的反义寡核苷酸片段对BEL-7404细胞EGFR基因表达及其对细胞生长的影响。合成了互补于EGFR基因5′起始编码区的21聚脱氧寡核苷酸(ODNs)。实验结果显示,3.2μmol/L ODNs明显抑制BEL-7404细胞生长,[~3H]TdR掺入抑制试验显示其对细胞DNA合成的抑制作用表现剂量依赖性;密度扫描分析显示ODNs处理6、24h后,肝癌细胞EGFR mRNA分别下降10.5%和14.3%,ODNs处理4天后,细胞EGFR含量下降37.4%,同时观察了同一长度、针对同一靶基因区域的硫代磷酸型反义寡核苷酸对BEL-7404细胞的作用,表明3.2μmol/L ODNs在作用30h内,细胞DNA合成抑制率达62.1%,但此后渐下降,而SODNs在作用96h后达相应的抑制率(此后作用仍持续),提示S-ODNs在体外培养体系中有较好的稳定性。结果表明,针对EGFR基因的反义脱氧寡核苷酸片段可通过部分封闭EGFR基因表达而抑制BEL-7404细胞的生长,而硫代修饰型比未修饰型反义核酸片段具有更好的稳定性。     

甲2巨球蛋白对辐照细胞的保护效应

用~3H—TdR掺入办法观察电离辐射对培养的人成纤维细胞的影响。在0—500cGy钻-60γ射线照射剂量范围内,细胞~3H-TdR掺入计数与照射剂量呈线性关系。y=33745.4e~(-0.0036×)。低浓度α_2M对细胞~3H-TdR掺入没有影响,高浓度α_2M能抑制细胞~3H-TdR掺入。4×10~5细胞经钻-60γ射线500cGy照射后加α_2M制剂,细胞~3H-TdR掺入计数与不照射对照组相比有明显升高(P<0.05)。在照射前加α_2M制剂与对照组相比无明显差别。     

组蛋白H1~0的制备凝胶电泳分离

组蛋白H1~0是一种富赖组蛋白。它在细胞分裂不旺盛的哺乳动物组织中才含有,在DNA合成活跃的胸腺及培养的肿瘤细胞中却没有或很少。传代细胞经丁酸钠等诱导药物作用后可使H1~0出现。目前多推测H1~0通过阻断DNA合成参与基因调控作用。H1~0这一不寻常的性质正日益受到重视,已发现某些组织和细胞的H1~0含有两个分子量十分接近的亚部,为探求其精确的结构和功能,需将它们完全分离。Pehrson等用Bio-Gel P-100连续两次     

U46619双向调节系膜细胞DNA合成的研究

Mene用血清或佛波醇肉豆寇乙酸(PMA)预失活化系膜细胞的PKC,可抑制U46619所致的IP合成及细胞内Ca~(2 )的升高,提示PKC预先活化后,可对再次活化PLC-PKC的物质起负反馈抑制作用。血清中含有血液凝固时血小板释放的血小板源性生长因子(PDGF),可活化PLC及PKC,可能对U46619的作用起负反馈抑制,使U46619促增殖作用丧失。第三,TXA_2可能直接或间接刺激前列腺素(PG)E_2或PGI_2的合成,而后两者有抑制细胞增殖的作用。不论何种机制参与,U46619这种抑制作用在病理上可能有积极意义:在正常状态下,体内肾小球系膜细胞为静息状态,肾小球合成的PG及TX极少,当肾小球产生炎症时,肾小球白细胞及血小板浸润增多,合成的PG、TX及PDGF增多,这时TX的升高可能有抑制PDGF所致细胞增殖的作用。 摘要 本实验用[~3H]TdR掺入法测定TXA_2类似物U46619对大鼠系膜细胞DNA合成的调节作用,测定系膜细胞合成的DAG及1,4,5-IP_3量,用PKC抑制剂Calphostin C预处理系膜细胞,观察其对U46619促增殖作用的影响。结果表明,U46619促进生长停滞的系膜细胞的DNA合成及IP_3的生成。本文首次证实U46619也促进DAG的生成并发现PKC抑制剂可抑制U46619的促增殖作用,提示U46619使生长停滞的系膜细胞的PLC活化,促进IP及DAG生成,进而激活PKC,促进系膜细胞DNA合成     

同位素标记法专题复习

同位素标记法是利用同位素的电离辐射对乳胶 (含AgBr或AgCl)的感光作用,对细胞内的生物大分子进行动态研究和追踪的一种细胞化学技术。包括: 同位素标记的大分子前体的掺入和细胞内同位素所在位置的显示。常用的同位素有:15N、35S、3H和14C等。研究DNA合成时通常用氚(3H)标记的胸腺嘧啶脱氧