模拟谷胱甘肽过氧化物酶活性三肽的制备及其性质研究

开发一种制备硒代谷胱甘肽（ＧｓｅＨ）的新方法。以合成的谷氨酰－γ－丝氨酰－甘氨酸（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ）三肽为原料,经苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）活化,用Ｈ＿２Ｓｅ突变Ｓｅｒ成硒代半脱氨酸（ＳｅＣｙｓ）制成ＧＳｅＨ。用元素分析及氨基酸分析确定此三肽的组成并推导出此三肽的结构。研究了ＧＳｅＨ的性质．结果表明,此三肽具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的活性,其活力比其它一些小分子有机模拟物高,在性质上也有优于它们的一些特点,其动力学行为与天然ＧＰＸ类似。     

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４）使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基因硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位,其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提     

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４）,使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团硒代半胱氨酸（Ｓｅ－Ｃｙｓ）,因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）．突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％,并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位,其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提高到５９８．９Ｕ／μｍｏｌ用黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤为中心的心肌线粒体自由基损伤模型证明Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ（ｍ４Ａ４）可减轻活性氧对线粒体的损伤。     

化学诱变抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

用诱变剂苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）活化兔抗人ＩｇＭ（Ｆｃμ）片段上特殊活性部位的丝氨酸（Ｓｅｒ）残基,经硒化氢（Ｈ_２Ｓｅ）处理,则将丝氨酸转变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）。诱变后的抗体具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性,其活性为世界最好的ＧＳＨ－Ｐｘ模拟物ＰＺ５１的７０多倍。抗体效价为１：８,与没诱变的抗体相似。     

化学突变具有底物结合部位的单克隆抗体制备含硒抗体酶

开发了一种制备抗体酶的新方法。用二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）专一地与谷胱甘肽（ＧＳＨ）的巯基反应,合成出半抗原ＧＳＨ－Ｓ－ＤＮＰ。用戊二醛将半抗原偶联到牛血清白蛋白（ＢＳＡ）上,制成全抗原。再用标准的单抗制备法获得具有ＧＳＨ结合部位的单抗（４Ａ４ＩｇＧ）。用苯甲基磺酞氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ２Ｓｅ相继处理该单抗,则将单拉结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）突变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ,因而在单抗结合部位上引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团。突变后的单抗具有ＧＰＸ活性,其活力已达到天然ＧＰＸ的数量级水平。动力学行为也与天然ＧＰＸ类似。这种新的含硒抗体酶有优于ＧＰＸ的一些特点。     

兼具SOD和GPX活力的双功能酶的制备及性质研究

用苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ２Ｓｅ相继处理铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）,将酶分子中的丝氨酸（Ｓｅｒ）转化为硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）,从而引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基因,使其在ＳＯＤ酶活性大部分保留的情况下,具有ＧＰＸ活性,其ＧＰＸ活力是ＰＺ５１活力的３０倍,研究了双功能酶的最佳制备条件,包括ＰＭＳＦ的剂量、反应最适温度及Ｈ２Ｓｅ处理时间等,并用电子能谱、ＤＴＮＢ等方法     

2-位硒桥联β-环糊精的合成及催化性质

将β－环糊精（β－ＣＤ）２位羟基选择性磺酰化后,再用ＮａＨＳｅ处理使谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团－ＳｅＨ引入β－ＣＤ的２位上,经空气氧化得到了ＧＰＸ模拟物双硒桥联β－环糊精．利用元素分析、核磁共振、红外光谱对此模拟物进行了表征．Ｘ光电子能谱技术测定了模拟物中硒的价态和含量．测活结果表明模拟物的ＧＰＸ活性是ＰＺ５１的７．５倍     

兼具SOD和GPX活力的双功能酶的制备及性质研究

用苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ_２Ｓｅ相继处理铜锌超氧化物岐化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）,将酶分子中的丝氨酸（Ｓｅｒ）转化为硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）,从而引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团,使其在ＳＯＤ酶活性大部分保留的情况下,具有ＧＰＸ活性,其ＧＰＸ活力是ＰＺ５１活力的３０倍。研究了双功能酶的最佳制备条件,包括ＰＭＳＦ的剂量、反应最适温度及Ｈ_２Ｓｅ处理时间等,并用电子能谱、ＤＴＮＢ等方法测定了双功能酶的硒含量;测定了双功能酶对不同底物的米氏常数及双功能酶的荧光光谱、紫外吸收光谱及稳定性。     

含硒抗体酶性质的研究

在成功地制备了具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）活性含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）的基础上,我们筛选了制备Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ的最佳条件,并对其理化性质及酶学性质和稳定性进行了深入的研究。结果表明,Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ的等电点为６．９５和７．０８,一为１５８ｋｄ;适ＰＨ和最适温度范围比天然酶宽广;抗体酶的贮藏稳定性比天然酶高。高Ｘ射线光电子能谱技术测得在Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ中含硒量为５ｍｏｌＳｅ／ｍｏｌ     

超氧阴离子对心肌细胞Ca^2＋平衡的影响及硒的保护作用

在超氧阴离子（Ｏ２＾－）作用下,心肌细胞内游离钙深度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）显著升高;心肌细胞膜通透性明显增强;膜脂流动性下降。一定深度的硒代蛋氨酸（Ｓｅ－Ｍｅｔ）亚硒酸钠（ＮａＳｅＯ３）可不同程度地拮Ｏ２＾－的影响。前者作用更为显著。这两种硒化合物也能提高谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的活性。综上所述,硒缺乏,高自由基及心肌细胞Ｃａ＾２＋平衡失调三者之间存在着相关性。在Ｏ２＾－作用下,心肌细胞内     

酒色着色菌内膜系统光依赖性同化亚硒酸钠为硒半胱氨酸的研究

分离的酒色着色菌（Ｃｈｒｏｍａｔｉｕｍｖｉｎｏｓｕｍ）内膜系统在光照和Ｏ乙酰丝氨酸（ＯＡＳ）存在的条件下,能以３５９纳摩尔／毫克细菌叶绿素·小时（ｎｍｏｌ·ｍｇＢｃｈｌ－１·ｈ－１）的速度催化ＳｅＯ２－３合成硒半胱氨酸。用超声波处理的内膜系统,催化速度仅为处理前的１１％,加入谷胱甘肽（ＧＳＨ）和还原型辅型Ⅱ（ＮＡＤＰＨ）后,其速度增加至处理前的８８３％,该反应对光具有依赖性,进一步实验表明,纯化的谷胱甘肽还原酶,在有半胱氨合酶、ＯＡＳ和ＮＡＤＰＨ共存时,能催化ＳｅＯ２－３转化为硒半胱氨酸,表明ＳｅＯ２－３在内膜系统中能被光偶联的谷胱甘肽还原酶还原为Ｓｅ２－,然后经半胱氨酸合酶的催化作用转化为硒半胱氨酸     

硒对培养人胚肝细胞Ⅲ型前胶原,羟脯氨酸合成的影响

原代培养人胚肝细胞经１．１５６×１０￣(－７）ｍｏｌ／Ｌ硒预处理４ｈ,加入２０ｍｍｏｌ／Ｌ四氟化碳作用２０ｈ,观察硒对其Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）和羟脯氨酸（Ｈｙｐ）生成的影响。结果培养液中ＰＣⅢ水平、细胞内Ｈｙｐ含量及细胞内外丙二醛（ＭＤＡ）水平均降低,与未加硒对照组比较差别有显著性（Ｐ＜０．０１）。而硒谷腕甘肽过氧化物酶（Ｓｅ－ＧＳＨ－ＰＸ）活性则较对照组显著增高（Ｐ＜０．００１）,且ＰＣⅢ水平与Ｓｅ－ＧＳＨ－Ｐ＿Ｘ／ＭＤＡ比值呈负相关（ｒ＝－０．９１５６,Ｐ＜０．０１）。提示硒可提高Ｓｅ－ＧＳＨ－Ｐ＿Ｘ／ＭＤＡ比值,抑制脂质过氧化激发的肝细胞胶原合成。     

超氧阴离子对心肌细胞Ca~（2＋）平衡的影响及硒的保护作用

在超氧阴离子（Ｏ~－_２）作用下,心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ~（２＋）］_ｉ）显著升高;心肌细胞膜通透性明显增强;膜脂流动性下降。一定浓度的硒代蛋氨酸（Ｓｅ－Ｍｅｔ）或亚硒酸钠（Ｎａ_２ＳｅＯ_３）可不同程度地拮抗Ｏ~－_２的影响。前者作用更为显著。这两种硒化合物也能提高谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的活性。综上所述,硒缺乏,高自由基及心肌细胞Ｃａ~（２＋）平衡失调三者之间存在着相关性。在Ｏ~－_２作用下,心肌细胞内Ｃａ~（２＋）平衡失调比膜通透性的改变更为敏感。     

乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒＨＢＶＨＢｓＡｇ１２６Ｉｌｅ相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响ａ抗原决定簇（ａ１２４－ａａ１４７）的抗原性。为了证实这一点,构建了突变Ｓ基因表达质粒,在ＳＶ４０早期启动子的控制下进行抗原表达。利用ＨＢｓＡｇ９肽（Ｔｈｒ－Ｉｌｅ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｉ单克隆抗体和９肽（Ｔｈｒ－Ｔｈｒ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｔ单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ｓｅｒ１２６突变蛋白对抗ｉ单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗ｔ单克隆抗体的反应性则与ＨＢｓＡｇ１２６Ｔｈｒ接近。但用三种抗－ａ单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白ＨＢｓＡｇ１２６     

谷胱甘肽过氧化物酶的硒代半胱氨酸插入元件

真核生物将硒代半胱氨酸插入蛋白质必需硒代半胱氨酸插入元件（ＳＥＣＩＳ）的参与,后者位于硒蛋白ｍＲＮＡ的３′非翻译区．采用ＲＮＡ折叠程序对１５个谷胱甘肽过氧化物酶基因进行计算机处理发现,其可能的ＳＥＣＩＳ中都具有３段保守碱基ＡＵＧＡ－Ａ（Ｇ）ＡＡ－ＧＡ．根据Ａ（Ｇ）ＡＡ位于顶环或者顶环上游５′臂的突环上,可将ＳＥＣＩＳ分为Ⅰ型和Ⅱ型结构     

白内障晶体中某些微量元素、与谷胱甘肽相关酶类活性的动态观察及其相互关系

本文动态观察了用平阳霉素诱发的大鼠白内障晶体中与谷胱甘肽代谢相关酶类活性和微量元素水平的变化,并与正常晶体进行比较,同时就酶活性与微量元素水平的相关性进行了检验。结果表明：（１）注射平阳霉素早期酶活性增高,谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）、谷胱甘肽还原酶（ＧＳＳＧ－Ｒ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）等活性的升高达显著水平,后期酶活性均下降,尤以ＧＳＨ－Ｐｘ、ＧＳＳＧ－Ｒ和谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＨ－Ｓ）等的活性降低明显;（２）ＧＳＨ－Ｐｘ和ＳＯＤ酶活性分别与Ｚｎ具有相关性（Ｐ＜０．０５）,这两种酶也分别与Ｓｅ具有高度相关性（Ｐ＜０．０１）,此两种元素在该类型白内障形成中可能有一定意义。     

谷胱甘肽的生物学功能

谷胱甘肽的生物学功能郑云郎（浙江省台州卫生学校３１７０００）谷胱甘肽是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸三种氨基酸组成的小肽,有还原型和氧化型之分。还原型谷胱甘肽分子中含有活泼的流基（－ＳＨ）,故以ＧＳＨ表示。２分子ＧＳＨ脱氢生成氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ...     

青霉素酰化酶活性中心的定点突变

对Ｅ．ｃｏｌｅ ＡＴＣＣ １１１０５的青霉素酰化酶（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇ ａｃｙｌａｓｅ,ＰＧＡ）活性中心的Ｓｅｒ２９０分别进行了定点突变和和化学修饰,将活性中心的Ｓｅｒ２９０改变成Ｃｙｓ或Ｓｅｃｙｓ,ＰＧＡ水解活力均大为下降,但仍保留部分活性。其对底物６－硝基（３－苯乙酰氨基）苯甲酸（６－ｎｉｔｒｏ－３－ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｍｉｄｏ ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ,ＮＩＰＡＢ）的ｋｃａｔ分别从１     

植物谷胱甘肽转移酶

植物谷胱甘肽转移酶廖祥儒,万怡震,朱新产（西北农业大学园艺系,陕西杨陵７１２１００）关键词谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓ－ｆｅｒａｓｅ,ＧＳＴ,ＥＣ２．５．１．１８）专一催化谷胱甘肽（ＧＳＨ）巯基与其他化合物的亲电...     

猪骨胶原蛋白酶解物中血管紧张素转换酶抑制剂的提纯

将猪骨胶原蛋白粗提物用胰蛋白酶水解,经阳离子交换树脂层析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤,以及数次反相高效液相层析,最终获得一具有抑制血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性的单一峰值的多肽。其氨基酸组成为Ｉｌｅ,Ｈｉｓ,Ｓｅｒ,Ｇｌｙ,Ａｌａ,Ｐｒｏ,Ｔｙｒ,Ｌｅｕ,Ａｓｐ．以Ｈｉｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ为底物,在ｐＨ为７．１的条件下,此肽对猪肺ＡＣＥ的Ｉ＿（５０）值为２６μｍｏｌ／Ｌ。