我国仓贮昆虫病原芽孢杆菌的研究

对９５１个样品分离鉴定,有７４７个样品含芽孢杆菌,有菌率为７８．５５％．共分离得到芽孢杆菌１１３８株,其中苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称Ｂ．ｔ）１４３株,占１２．５％;球形芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ,简称Ｂ．ｓ）１１株,占０．９７％;其他芽孢杆菌９８４株,占８６．４０％．从芽孢杆菌中选出产生晶体、苏云金素或磷酸酯酶Ｃ（ＰｈｏｓｐｈａｌｉｐａｓｅＣ,简称ＰＬＣ）的毒素菌株１６８株,其中Ｂ．ｔ占１４３株,Ｂ．ｓ有５株,其他芽孢杆菌１０株．在产毒素菌株中,经测定有１２０株菌对供试昆虫毒性达标．占７７．９２％．不同菌株的杀虫毒素、杀虫范围和毒力各异,认为这种差异取决于毒素和虫种两方面的特异性．     

苏云金芽孢杆菌的一个新亚种(Btsubsp.sinensis)

198 9年自云南昆明市石林的红棕壤中分离到数株苏云金芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎ ｓｉｓ,Ｂｔ)菌株[1] ,对其中的一株ＹＫ30 0 4进行了生物学特性、杀虫特性研究及分类鉴定。1　材料与方法1.1　供鉴定的Ｂｔ菌株由云南昆明市石林的红棕壤中分离的苏云金芽孢杆菌ＹＫ30 0 4菌株。1.2　标准Ｂｔ菌株血清型Ｈ1 Ｈ4 1、Ｈ4 4 Ｈ55及Ｈ57 Ｈ69标准Ｂｔ菌株由法国巴斯德研究院ＤｒＬｅｃａｄｅｔ提供 ,其余为本实验室保存。1.3　生物测定用昆虫小菜蛾 (Ｐｌｕｔｅｌｌａｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ) 3龄幼虫 ;斜纹夜盗蛾 (Ｐｒ…     

苏云金芽孢杆菌Cyt蛋白研究进展

苏云金芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称Ｂｔ)是目前世界上应用最广泛、最成功的微生物杀虫剂 ,也是公认的无公害生物农药。苏云金芽孢杆菌最主要的杀虫活性物质是杀虫晶体蛋白 (ＩｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌＣｒｙｓ ｔａｌＰｒｏｔｅｉｎｓ,ＩＣＰｓ) ,包括晶体蛋白 (Ｃｒｙ)和Ｃｙｔ蛋白 (Ｃｙｔ)两大类。这两类蛋白在氨基酸序列及其基因同源性上相距甚远 ,但它们均能在靶标害虫中肠内被激活成毒素 ,并在昆虫中肠细胞膜上形成孔道 ,进而引起中肠细胞胶样渗透裂解 (ｃｏｌｌｏｉｄ ｏｓｍｏｔｉｃｌｙｓｉｓ) ,最…     

高毒广谱杀虫Bt工程菌TnY

目前 ,农作物害虫在不同程度上对Ｂｔ制剂产生了抗性或不够敏感 ,在对这些害虫有效的Ｂｔ制剂中均不含Ｃｙｔ1Ａａ蛋白。含有ｃｙｔ1Ａａ和ｃｒｙ1 1Ａａ基因的天然苏云金杆菌 ,这两个基因均位于大质粒上。而通过质粒转移或ＩＣＰｓ的共表达构建苏云金杆菌重组菌株以期扩大Ｂｔ杀虫谱和增强毒力 ,常因质粒的不稳定性和质粒间的排斥性而受到一定限制。本研究利用转座子衍生载体ｐＴＶ1ＴＳ将ｃｙｔ1Ａａ和ｃｒｙ1 1Ａａ基因导入新分离Ｂｔ菌株Ｓ1 84的染色体中 ,并使之缺失转座酶而获得遗传稳定的初始工程菌Ｂｔ ＴｎＸ。在筛选工程菌过程中 …     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的启动子及其转录调控

苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）是一种Ｇ＋土壤杆菌,其之所以能成为世界上生产量最大的生物杀虫剂,是因为它能在细胞生长过程中,产生大量、高效的杀虫晶体蛋白（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　ＣｒｙｓｔａｌＰｒｏｔｅｉｎｓ,　ＩＣＰｓ...     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白与DNA分子的相互作用

苏云金芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称Ｂｔ)在形成芽孢的同时能够产生伴孢晶体 ,其中含有一种或几种杀虫晶体蛋白 (ＩＣＰｓ,ＩｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌＣｒｙｓｔａｌＰｒｏｔｅｉｎｓ) ,即δ 内毒素[1] 。伴孢晶体进入敏感昆虫的消化道后发生溶解并释放出 2 7～ 1 40ｋＤ的原毒素。在中肠蛋白酶的作用下 ,原毒素被激活为 2 3～ 70ｋＤ的毒性多肽[2～ 4 ] 。随后毒素与中肠刷状缘膜泡 (ＢＢＭＶ ,ＢｒｕｓｈＢｏｒｄｅｒＭｅｍｂｒａｎｅＶｅｓｉｃｌｅ)上的特异受体发生结合并且在细胞膜上形成孔道 ,破坏细胞…     

苏芸金杆菌cry基因的遗传学分析及基因工程进展

苏芸金杆菌ｃｒｙ基因的遗传学分析及基因工程进展李扬,任改新（南开大学生命科学学院微生物系,天津３０００７１）１引言苏芸金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ简称Ｂｔ）是一种微生物杀虫剂,在农林、卫生害虫的综合防治中占有极其重要的地位。...     

苏云金芽胞杆菌YBT1520杀虫晶体蛋白基因的属性

通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交发现高毒力苏云金芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＴＢＴ－１５２０菌株含有两个杀虫晶体蛋白基因片段,其５’＝末端所在ＨｉｎｄⅢ片段分别为６．８ｋｂ和４．６ｋｂ,它们对应的基因分别命名为ｃｒｙ２１８和ｃｒｙ４．６。经ＰＣＲ鉴定,该菌含有ｃｒｙ１Ａａ、ｃｒｙ１Ａｂ和ｃｒｙ１Ａｃ基因,以及ｃｒｙ２基因,其中ｃｒｙ２１８属于ｃｒｙ１Ａｃ。分析了ｃｒｙ１Ａｃ基因     

昆虫对转Bt杀虫蛋白基因植物的抗性及其对策

1　引言苏云金杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ简称Ｂｔ)是目前世界上产量最大、应用最为成功的微生物杀虫剂 ,除了已筛选出多种Ｂｔ菌株直接发酵培养外 ,还培育出转基因工程菌及转基因植物 ,使Ｂｔ的使用范围大为扩大。Ｂｔ在形成芽孢时产生的伴孢晶体是Ｂｔ杀虫活性的主要来源 ,它可能由几种晶体蛋白即δ -内毒素组成 ,包括Ｃｒｙ和Ｃｙｔ两大类。一般认为 ,δ -内毒素的作用过程要经溶解、酶解活化、与受体结合、插入和孔洞或离子通道形成等五个环节[1] ,涉及到多种毒素和作用位点 ,单一因素的改变对其敏感性影响不大 …     

苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因在小麦基因组中的甲基化修饰

通过花粉管通道法将苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）毒蛋白基因（Ｂｔ．ｔｏｘｉｎｇｅｎｅ）转进了小麦品种京花５号与８６Ａｌ。利用点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ等技术鉴定了转化植株的当代和子代,证实了Ｂｔｔｏｘｉｎｇｅｎｅ的导入与对小麦染色体的整合。利用对腺嘌呤（Ａ）与胞嘧啶（Ｃ）甲基化敏感与否的限制性内切酶组（ｍｅｄｈｙｌａｔｉｏｎ－（ｕｎ）ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｇｒｏｕｐ,ＭＲＥＧ）酶切和ＲＣＲ扩增（ＭＲＥＧ－ＰＣＲ）,对转化子代中的Ｂｔ基因片段甲基化形式进行了研究。结果表明,整合在小麦基因组中的Ｂｔ基因的Ａ和Ｃ的甲基化形式发生了变化     

苏云金杆菌遗传工程杀虫剂

苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称 Ｂｔ）是一种对昆虫有致病作用的细菌。其杀虫活性物质主要是杀虫晶体蛋白质（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ ｃｒｙｓｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＣＰ）。由于该杀虫剂对人、畜无害,无致癌和致畸作用,是一种有着广泛应用前景的微生物杀虫剂。 根据１９９８年最新的分类,把ＩＣＰ基因分为２５类ｃｒｙ基因和２类ｃｙｔ基因,每类ＩＣＰ基因产生针对不同昆虫的晶体蛋白质。例如,ｃｒｙ３Ａ基因产生杀鞘翅目昆虫的晶体蛋白质,而ｃｒｙ１基因所产生的活性物质主要用于防治鳞…     

固氮菌接种对棉苗氮磷钾吸收,某些酶活性及产量的影响

Ｓｐｅｕｍｏｓｐｈｅｒｅ ｍｏｄｅｌｓ和盆栽试验结果表明,海岛棉（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｂａｒｂａｄｅｎｓｅ Ｌ．）苗接种自生固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、巴西固氮螺菌ＮＯ４０（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ ＮＯ４０）、多粘芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ＣＦ）和根瘤菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）,和以自生固氮菌分别与其它３种供试菌种两者混合菌,能增强棉花根际固     

荧光增白剂对苏云金杆菌毒力的增效作用及其紫外防护功效的研究

以棉铃虫 (Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ)初孵幼虫为供试虫测试了三种二苯乙烯类荧光增白剂 (ｆｌｕ ｏｒｅｃｅｎｔｂｒｉｇｈｔｅｎｅｒｓ)ＴｉｎｏｐａｌＬＰＷ ,ＶＢＬ和ＪＤ 3对苏云金杆菌 (ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｅｓＢ .ｔ.)杀虫剂毒力的影响 ,并检测了荧光增白剂ＶＢＬ作为佐剂在Ｂ .ｔ.受紫外线照射时对Ｂ .ｔ.的光保护功效。结果表明 :添加 0 .1 2 5 % ,0 .2 5 % ,0 .5 %及 1 % (ｗ/ｗ)不同浓度荧光增白剂ＴｉｎｏｐａｌＬＰＷ的复混型苏云金杆菌制剂对初孵棉铃虫的ＬＣ5 0 值与单剂Ｂ .ｔ.的ＬＣ5 0 值…     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3A在鳞翅目特异菌株中的？…

将对鞘翅目昆虫有特异毒性的苏云芽孢杆菌ｃｒｙ３Ａ基因电转化到只对鳞翅目昆虫有毒性的苏云金芽孢杆菌野隆型菌株ＹＢＴ８０３－１中,获得转了ＢＭＢＹ－００１。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析及镜检结果表明,ｃｒｙ３Ａ基因可在该菌株中高效表达,但出发菌株中原有的ｃｙｒ１Ａｂ、ｃｒｙ１Ａｃ及ｃｒｙ２的表达则受到不同程度的影响。生物测定结果显示,转子ＢＭＢＹ－００１对柳蓝叶甲（鞘翅目）具有较高毒力,ＬＣ５０为０．４１３μ     

α-乙酰乳酸脱羧酶的基因克隆及在大肠杆菌和酿酒酵母中的表达

以ｐＵＣ１９质粒为载体,以Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９为受体,构建了含α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ＡＬＤＣ）基因的地衣芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＳ１０１０６的基因文库,得到４８００个重组转化子中均含有４～１０ｋｂ的外源插入ＤＮＡ片段,从基因文库中筛选到６个阳性克隆,对其中１个克隆的α－乙酰乳酸脱羧酶基因片段进行亚克隆分析表明,该α－乙酰乳酸脱羧酶基因位于１．６ｋｂ的ＢａｍＨⅠ     

二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用

利用已构建的含有短芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）和产气肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ, α-ＡＬＤＣ）基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α－ＡＬＤＣ。在实验室,用 ２Ｌ体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 ２种重组α－ＡＬＤＣ后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在０.１ｍｇ／Ｌ以下。证明得到的重组ａ－ＡＬＤＣ能有效地降低啤酒中双乙酰含量。     

转双基因抗虫棉对棉铃虫的抗性

将苏云金杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ)杀虫晶体蛋白 (ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ ,ＩＣＰ)基因转入棉花植株中获得的抗虫棉花 (下略为Ｂｔ棉 ) ,为棉花害虫综合防治开辟了新的途径。Ｂｔ棉除具有丰产性、纤维品质好和对靶标害虫的良好控制作用等特性外 ,更重要的应用价值在于其高杀虫效果与维护生态环境的协调发展的良性作用上[1] 。但研究结果已表明 ,害虫对ＢｔＩＣＰ的抗性适应 ,将严重威胁Ｂｔ棉的使用寿命[2 ] 。已有的报道证明 ,将两种不同作用机制的杀虫基因转入植物并同时表…     

芽孢杆菌M50产生β—甘露聚糖酶的条件研究

从土壤中分离到９株产生β－甘露聚糖酶的芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）。Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．Ｍ５０２５０ｍＬ三角瓶摇瓶培养试验,以４％的魔芋粉为碳源,１．０％（ＮＨ４）２ＳＯ４为氮源,０．３５％Ｎａ２ＣＯ３,３０～３４℃培养６０ｈ产酶达到高峰。酶活力为１８０～２２０ｕ／ｍＬ。１００Ｌ罐发酵,在３０～３２℃,１：０．７５ｖｖｍ通气量,２００ｒ／ｍｉｎ条件下,发酵液酶活力高达３３０ｕ／ｍＬ。     

二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用

利用已构建的含有短芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）和产气肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ, α-ＡＬＤＣ）基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α－ＡＬＤＣ。在实验室,用 ２Ｌ体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 ２种重组α－ＡＬＤＣ后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在０.１ｍｇ／Ｌ以下。证明得到的重组ａ－ＡＬＤＣ能有效地降低啤酒中双乙酰含量。     

芽孢杆菌原生质体融合技术

微生物原生质体融合技术是近20年来国内外细胞工程领域的一个研究热点。1972年匈牙利学者Ｆｅｒｅｎｃｚｙ率先进行了微生物原生质体融合的研究[1]。在1976年匈牙利学者Ｆｏｌｄｅｒ和Ａｌｆｏｌｄ则首次报道了用ＰＥＧ或新生态磷酸钙诱导巨大芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ)种内株间原生质体融合[2];同年法国的Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ等也用ＰＥＧ诱导枯草芽孢杆菌(Ｂ.ｓｕｂｔｉｌｉｓ)进行种内株间原生质体融合获得成功[3]。有关芽孢杆菌原生质体融合的研究,在国内直至1981年才见报道[4]。经典改变微生物遗传性状的手段有两…