ITS（nrDNA）片段在冷杉属植物中的长度多态性及其在松科的系统与 …

由ＰＣＲ反应扩增了２８种冷杉属（ＡｂｉｅｓＭｉｌｌ．）植物的ｎｒＤＮＡ的ＩＴＳ（包括ＩＴＳ１、ＩＴＳ２和５．８ｒＤＮＡ）片段,经过与１００ｂｐ和１ｋｂ的标准分子量ＤＮＡ进行比较和某些类群ＩＴＳ的全序列和部分序列测定,发现分布于墨西哥和２种分布于北美的冷杉属植物的ＩＴＳ片段长度约为２５００ｂｐ,而分布于欧亚大陆和其他分布于北美的冷杉植物的ＩＴＳ长度约为１７００ｂｐ,二者相差约８００ｂｐ。Ａ．ｂｒａｃ     

中国苋属nrDNA的ITS序列分析及其系统学意义

运用ＰＣＲ直接测序法,对苋属（Ａｍａｒａｎｒｈｕｓ Ｌ．）１５个种及外类群鸡冠花（Ｃｅｌｏｓｉａ ｃｒｉｓｔａｔａ Ｌ．）ｎｒＤＮＡ的ＩＴＳ区（包括ＩＴＳ－１,５．８５ｒＤＮＡ和ＩＴＳ－２）进行序列测定。结果表明苋属植物的ＩＴＳ序列总长度为６２９－６３２ｂｐ,长度变异仅发生在ＩＴＳ－１区（２５０－２５３ｂｐ）。采用ＰＡＵＰ软件进行系统发育分析表明：分布于中国的苋属植物可分为３组,即刺苋组（ｓｅｃｇ     

山姜属中药草豆蔻和益智nrDNA ITS区序列的测定

中药草豆蔻、益智的原植物分别为山姜属草豆蔻（Ａｌｐｉｎｉａ ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓ Ｋ．Ｓｃｈｕｍ．）与益智（Ａ．ｏｘｙｐｈｙｌａ Ｍｉｑ．）。本文采用ＰＣＲ直接测序法,首次测定了它们的核糖体ＤＮＡ ＩＴＳ区序列。结果显示,两者序列长度（ＩＴＳ１＋ＩＴＳ２）分别为４０３ｂｐ与４０４ｂｐ,序列间具有２７个变异位点（包括５．８Ｓ编码区）。本研究为山姜属中药材的ＤＮＡ分子鉴定提供了必要的序列资料。     

采用PCR—RFLP和RAPD对球壳孢目真菌系统学的研究

对球壳孢目真菌首次采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ进行了系统发育研究,以ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对４属１２种２４个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区进行了ＰＣＲ扩增,４种内切酶酶切,结果表明：主要属的ＩＴＳ区长度不同,同属不同种相同。Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｎ,Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ,Ａｓｃｏｃｈｙｔａ,ＳｅｔｏｒｉａＩＴＳ区长度分别为６３０,５６０,５５０,５４０ｂｐ;酶切图各间差别明显,属内种间基本一致     

捕食线早真菌rDNA ITS区间RFLPs分析

利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对捕食线虫真菌进行了系统发育研究。以ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对３属１４种１６个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了ＰＣＲ扩增，４种内切酶（ＡｌｕⅠ、ＨａｅⅢ、ＨｐａⅡ、ＴａｑⅠ）酶切，结果表明不同属的ＩＴＳ区长度没有明显差异，其长度范围在５８５￣６９５之间。酶切图谱种间差别明显，种内基三一致，同属菌株图谱没有特异笥，暗示传统的分属可能过细，某些属的成立平常 有待商榷，     

节丛孢属rDNA ITS区RFLPs分析

利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对捕食线虫真菌节丛孢属进行了系统发育研究。以ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对该属１０种１２个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了ＰＣＲ扩增,４种内切酶（ＡｌｕⅠ、ＨａｅⅢ、ＨｐａⅡ、ＴａｑⅠ）酶切。结果表明该属的ＩＴＳ区长度没有明显差异,其长度范围在６５８－７０５之间,酶切图谱能体现不同种间的多态性,根据４种内切酶酶切结果,利用ＵＰＧＭＡ法构建的节丛孢属分子系统树,基于体现     

两种泥鳅中Sox基因的检出(英文)

性别决定基因ＳＲＹ都具有一个高度保守的基因序列──ＨＭＧ－ｂｏｘ,编码Ｓｏｘ蛋白,在胚胎发育过程中起重要作用。本文利用两种引物检测了泥鳅和大鳞副泥鳅的Ｓｏｘ基因。第一对引物特异扩增人类ＳＲＹ基因的保守区。在扩增泥鳅的基因组ＤＮＡ时可见长度分别为２００、５５０、９４０和１０００ｂｐ的四条扩增带。在大鳞副泥鳅中可以扩增出２００、５５０、９００ｂｐ三条带（Ｆｉｇ．１）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明２００和５５０ｂｐ两条带可以和ＳＲＹ基因探针杂交（Ｆｉｇ．２）。第二对引物是兼并引物,可以特异扩增Ｓｏｘ基因的ＨＭＧ－ｂｏｘ区域。以基因组ＤＮＡ为模板可以在大鳞副泥鳅中扩增出２２０、５５０、７００和１５００ｂｐ四条带（Ｆｉｇ．３）;而在泥鳅中则为２２０、５３０、５７０和１５００ｂｐ四条带（Ｆｉｇ．４）。ＰＣＲ产物的长度差异被认为是由于部分Ｓｏｘ基因的ＨＭＧ－ｂｏｘ区域中存在着内含子。没有发现性别特异扩增带。以上结果说明哺乳动物与性决定有关的组分在脊椎动物中是广泛存在的。但这些组分在鱼类中是否与性决定有关,或仅是哺乳动物性决定因子的进化前体尚不得而知。无论如何广泛深入研究鱼类的Ｓｏｘ基因对于揭示性决定系统和因子的进化方式是十分     

采用PCR-RFLP和RAPD对球壳孢目真菌系统学的研究

对球壳孢目真菌首次采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ进行了系统发育研究。以ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对４属１２种２４个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了ＰＣＲ扩增,４种内切酶（ＡｌｕＩ,Ｈｈａ,ＭｓｐＩ,ＴａｑＩ）酶切,结果表明：主要属的ＩＴＳ区长度不同,同属不同种相同。Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ,Ｐｈｙｌｏｓｔｉｃｔａ,Ａｓｃｏｃｈｙｔａ,ＳｅｐｔｏｒｉａＩＴＳ区长度分别为６３０,５６０,５５０,５４０ｂｐ;酶切图谱属间差别明显,属内种间基本一致,暗示传统的分种可能过细,某些种的成立还有商榷的余地,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ对确定疑难种属的地位有重要的意义。３属８种１６个菌株的ＲＡＰＤ结果表明,种内图谱相同或图谱类型相同,而种间明显不同,揭示出过去所划分的种的确存在本质的差别,但是否达到种级的差别还有待于进一步研究     

用核糖体DNA的ITS序列探讨裂叶沙参的系统位置——兼论ITS片段在…

本采用ＰＣＲ直接测序方法,对来自沙参属全部２组７亚组的１０个种和作为外类群的风铃草属２个种的核糖体ＤＮＡ ＩＴＳ片段进行了序列分析。在重点探讨裂叶沙参分类地位的同时,分析了ＩＴＳ片段序列的沙参属系统发育重建中的价值。结果表明,在沙参属中,ＩＴＳ片段在长度、ＧＣ含量和位点变异量上均比较一致;长度５３９ｂｐ￣５４１ｂｐ,ＧＣ含量５７％￣６０％,信息位点与只占总位点的３．９％。采用ＰＡＵＰ软件进行的系     

碳离子诱导的DNA双链断裂

ＤＮＡ双链断裂（ＤＳＢｓ）是电离辐射诱导的最重要的原发损伤,研究ＤＳＢｓ有利于揭示细胞辐射敏感性的机理。用倒转脉冲场凝胶电泳结合荧光扫描进行ＤＮＡ定量研究７５ＭｅＶ／ｕ１２Ｃ６＋对小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞ＤＳＢｓ的诱导,结果表明：ＤＳＢｓ产额约为０．７４ＤＳＢｓ／１００Ｍｂｐ／Ｇｙ;ＤＮＡ片段分布在两个区域。大片段区分子量约为１．４Ｍｂｐ～３．２Ｍｂｐ,分子量小于１．２Ｍｂｐ的为小片段区;并且随着剂量的增加,大片段区ＤＮＡ含量逐渐下降,而小片段区的ＤＮＡ含量显著增加。表明Ｂ１６ＤＮＡ分子上可能存在对重离子较为敏感的位点。     

一个新的受雄激素诱导的胞浆蛋白的组织分布

本文以３２Ｐ－５＇末端标记ＰＳＢＰ－Ｃ３基因启动子的３１ｂｐＤＮＡ片段作探针，用凝胶阻滞分析法检测了大鼠、小鼠、兔和猴各组织以及人病理组织的胞浆中与此ＤＮＡ片段特异结合的新蛋白质（Ｃ３Ｐ４），以期对其功能的探讨提供必要的线索。结果显示：（１）Ｃ３Ｐ４蛋白以不同的含量存在于４种动物的雄性器官中；（２）４种动物的脑组织均含有此蛋白质，其他组织中很难检测到，且其结果因种族而异：（３）雌性动物中此蛋白质的组织分布除性器官外，与雄性动物相同；（４）在所测定的８种人器官的几种病理组织中，初步观察到胃癌中含量较高，乳房的良性和恶性肿瘤中都有Ｃ２Ｐ４蛋白存在，７例前列腺肥大中有３例比较明显。     

抗原捕获聚合酶链式反应（AC－PCR）直接分型检测单纯疱疹病毒

用抗单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）型共同性ｇＣ和ｇＤ羊克隆抗体（ＭｃＡｂ）,包被即Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管,捕捉ＨＳＶ,同时加入３个引物：一个是ＨＳＶ─１／ＨＳＶ─２型共同性上游引物,另两个分别是ＨＳＶ─１和ＨＳＶ─２型特异性下游引物。借此建立了能直接分型检测ＨＳＶ的抗原捕获聚合酶链式反应（ＡＣ─ＰＣＲ）。ＨＳＶ─１的扩增产物为４７７ｂｐ,ＨＳＶ─２的为３９９ｂｐ两型病毒经ＡＣ─ＰＣＲ扩增后产生分子量不同的ＤＮＡ片段,致使ＡＣ─ＰＣＲ能直接分型检测ＨＳＶ。ＨＳＶ─１和ＨＳＶ─２扩增产物的克隆和序列分析表明,本方法特异性好。用本法检测Ｂａｌｂ／ｃ幼鼠中枢神经系统ＨＳＶ感染的脑标本,进一步证实本方法不仅敏感、特异,而且分型准确。     

杂交水稻及其“三系”线粒体DNA的AP—PCR指纹图谱

为了研究水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）细胞质雄性不育（ＣＭＳ）与线粒体基因组的关系,应用ＡＰ－ＰＣＲ 分析,用７ 个任意单引物对６ 种水稻品系线粒体ＤＮＡ 进行了扩增。水稻线粒体ＤＮＡ 的ＡＰ－ＰＣＲ 产物可分为三种类型：（１）所有供试品系均能扩增的片段,它们代表了线粒体ＤＮＡ 在进化上的保守性序列。有４ 个引物检测到这类片段。（２）２ 个以上水稻品系共同出现而在全部供试材料间存在差异的扩增片段,这类片段是检测水稻线粒体ＤＮＡ多态性的主要来源。（３）一种细胞质类型所特有的扩增片段,从引物Ｒ２ 和Ｖ５ 的扩增产物中发现了这类片段,它们可能与ＣＭＳ有关联。另外,ＷＡ型不育系珍汕９７Ａ 与其杂种之间在６ 个引物的扩增图谱上均存在不同程度的差异,说明两者的线粒体ＤＮＡ序列结构可能存在某种差别     

单纯疱疹病毒的PCR直接基因分型

本文利用ＰＣＲ技术建立一种对ＨＳＶ直接基因分型的方法。在ＨＳＶ－Ⅰ、Ⅱ两型的ＤＮＡ多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物（ＨＤＰ－Ｂ）和两条型特异的下游引物（ＨＤＰ－１、ＨＤＰ－２）。三条引物共同组成一个扩增反应体系,在ＨＳＶ－Ⅰ产生５４３ｂｐ条带,ＨＳＶ－Ⅱ产生３７２ｂｐ条带,据此在基因水平上对ＨＳＶ进行分型。５株不同来源的ＨＳＶ（２株Ⅰ型,３株Ⅱ型）分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该     

单纯疱疹病毒的PCR直接基因分型

本文利用ＰＣＲ技术建立一种对ＨＳＶ直接基因分型的方法。在ＨＳＶ－Ⅰ、Ⅱ两型的ＤＮＡ多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物（ＨＤＰ－Ｂ）和两条型特异的下游引物（ＨＤＰ－１、ＨＤＰ－２）。三条引物共同组成一个扩增反应体系,在ＨＳＶ－Ⅰ产生５４３ｂｐ条带,ＨＳＶ－Ⅱ产生３７２ｂｐ条带,据此在基因水平上对ＨＳＶ进行分型。５株不同来源的ＨＳＶ（２株Ⅰ型,３株Ⅱ型）分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该反应体系与其它来源的ＤＮＡ不产生特异反应,敏感性可达１ｆｇ。应用该法对１５１份临床可疑ＨＳＶ感染的标本进行检测并分型,结果与免疫学方法完全一致。     

应用套式PCR对恶性卡他热病毒在不同动物体内变异的研究

应用本实验建立的三组套式ＰＣＲ（ＰＣＲ１、２、３）和一组以前报道的套式ＰＣＲ（ＰＣＲ４）,对５９份外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）ＤＮＡ样品进行了恶性卡他热病毒（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｃａｔａｒｒｈａｌｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ,ＭＣＦＶ）核酸序列的检测。这些样品来自５１只羊,以及与羊接触而发病的６头牛和２只鹿。除ＰＣＲ４外,其它三组ＰＣＲ都能扩增现有４个角马型ＭＣＦＶ分离株。有６只羊在４组ＰＣＲ中都呈阴性,其余５３份样品经ＰＣＲ４检测均呈阳性。ＰＣＲ１只能从４５只羊体检出ＭＣＦＶＤＮＡ,未能从牛和鹿体检出病毒ＤＮＡ。ＰＣＲ２检测的所有样品均呈阴性。在ＰＣＲ３扩增中,除２头牛外,其它５１份样品均呈阳性。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和限制性酶切分析,对ＰＣＲ１－４产物的特异性进行了鉴定。此外,敏感性实验表明,四组ＰＣＲ的差异也不明显。因此,本实验结果说明ＭＣＦＶ基因组在不同种动物之间发生了变异,羊体内的变异株可能是导致其它反刍动物发病的病原     

汉滩病毒S基因及其5‘端真核表达载体的构建及在细胞中的表达

体外研究汉滩病毒（ＨＴＮＶ）Ｓ基因及其５'端表达的意义,为核蛋　白Ｔ细胞表位的研究奠定基础。设计２套引物,用ＰＣＲ方法从ＰＢＶ２２０－Ｓ２２原核质粒中扩增出Ｓ　基因全读码框（３７－１３２６ｂｐ）及Ｓ基因５'端（３７－５０１ｂｐ）,用ＴＡ克隆将其克隆入ｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５－Ｈｉｓ－ＴＯＰＯ载体中,成功构建ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ真核表达载体,并通过脂质体转　染至Ｖｅｒｏ细胞中,进行了瞬时表达。间接免疫荧光成功检测到ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ在Ｖｅｒｏ细胞中的表达。ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ及ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ－Ｎ真核表达载体有较高的转染效率,目　的基因能在宿主细胞中表达,有利于研究ＨＴＮＶ－Ｓ基因在Ｔ细胞表位研究中的意义。     

丙型肝炎病毒（HCV）广东株包膜蛋白区cDNA的序列测定

采用微粒吸附法从广东省一慢性丙型肝炎病人血清中提取现型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ,经随机引物逆转录为ｃＤＮＡ,再经聚合酶链反应（ＰＣＲ）,获得包膜蛋白区（Ｅ１,Ｅ２／ＮＳ１）两个部分重叠的产物片段,分别为４８９ｂｐ和８０６ｂｐ。其中,４８９ｂｐ片段主要位于Ｅ１区,小部分位于Ｃ区;８０６ｂｐ片段位于Ｅ２／ＮＳ１区。将４８９ｂｐ片段插入ｐＵＣ１９载体,再亚克隆进ｐＵＣ１８质粒载体。８０６ｂｐ片段则插入到     

普通小麦基因组最可能的4个供体的ITS1和ITS2序列及其亲缘关系

对普通小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）基因组（ＡＡＢＢＤＤ）最可能的供体－Ｔ．ｕｒａｔｒｔｕＴｈｕｍ．（ＡＡ）、Ｔ．ｍｏｎｏｃｃｕｍｖａｒ．ｂｏｅｏｔｉｃｕｍ（Ｂｏｉｓｓ．）ＭＫ（ＡＡ）、ＡｅｇｉｌｏｐｓｓｐｅｌｔｏｉｄｅｓＴａｕｓｃｈ．和Ａｅ．ｔａｕｓｃｈｉｉ（Ｃｏｓｓ．（ＤＤ）的核糖体ＲＮＡ基因ＩＴＳ区进行了ＰＣＲ扩增和克隆,并测定了ＩＴＳ１和ＩＴＳ２的ＤＮＡ序列,讨论和纠正了前人     

乙肝病毒核衣壳启动子内三链DNA的形成

用电泳迁移分析方法研究了２１ｎｔ脱氧寡核苷酸Ｇ３ＴＧ２ＴＧＴ２Ｇ５ＴＧ２ＴＧＴ（ＣＰ１）与１２９ｂｐ的乙肝病毒（ＨＢＶ）核衣壳启动子（Ｃｐ）片段内一位点结合形成的三链ＤＮＡ的特异性及稳定性．在克隆有ＨＢＶ基因组的质粒ｐＣＰ１０的酶切产物中,ＣＰ１仅与含Ｃｐ的１２９ｂｐ片段结合．在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中其解离常数（Ｋｄ）为１．４×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．不同离子稳定三链ＤＮＡ的效果依次为ｓｐ４＋（精胺）＞Ｍｇ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｎａ＋＞Ｋ＋,离子之间存在相互竞争作用．比ＣＰ１多一误配碱基的脱氧寡核苷酸Ｇ２ＴＧ２ＴＧＴＧ３ＴＧ２ＴＧ２ＴＧ２Ｔ（ＣＰ２）在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中与Ｃｐ结合的Ｋｄ值约为ＣＰ１的１／７,而在６０ｍｍｏｌ／ＬＫ＋或５ｍｍｏｌ／ＬＺｎ２＋溶液中检测不到它与Ｃｐ的结合,这进一步显示了三链ＤＮＡ形成的特异性．细胞的生理离子浓度被认为是：Ｓｐ４＋１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋１０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＋１４０ｍｍｏｌ／Ｌ,因此,ＣＰ１在细胞内将能特异地与Ｃｐ结合并具有较好的稳定性．