大鼠脂肪间充质干细胞在体内向肝细胞样细胞方向的转化

目的:探讨大鼠脂肪间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)在体内向肝细胞样细胞转化的可能性.方法:将从4周龄雄性SD大鼠腹股沟分离得到的原代脂肪间充质干细胞传至第3代,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)在体外标记后,通过门静脉注射的方法移植入由四氯化碳造成慢性肝损伤的雄鼠体内.移植术后2周处死受体雄鼠,取其肝组织.通过免疫荧光双染色的方法观察BrdU标记细胞的存在和白蛋白的表达,以确定所注入的脂肪间充质干细胞在受鼠体内向肝细胞样细胞转化的情况.结果:在经门静脉注射法进行移植的实验组SD大鼠的肝组织内检测到同时表达BrdU和白蛋白的细胞.讨论:本研究证明了脂肪间充质干细胞在体内有向肝细胞样细胞转化的可能.     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝损伤的实验研究

目的:了解肝损伤大鼠在输注骨髓间充质干细胞后肝功能生化指标和肝脏组织病理变化情况,为临床应用提供实验依据。方法:将大鼠随机分为正常组和造模组。造模组采用腹腔注射四氯化碳的方法构建,然后将造模组随机分为干细胞移植治疗组、模型对照组。干细胞移植组经门静脉输注标记的骨髓间充质干细胞。3周后处死大鼠。然后检测大鼠肝功能、肝脏病理改变分析干细胞移植治疗肝损伤效果。结果:干细胞移植治疗3周后,大鼠的肝脏与对照组比较,明显恢复,但是并没有恢复到正常水平。结论:骨髓间充质干细胞对肝损伤的大鼠有治疗作用。     

大鼠脂肪间充质干细胞的鉴定及肝内移植的研究

目的:从脂肪组织中获取间充质干细胞(ADMSCs)并验证其多向分化潜能,探讨ADMSCs在肝再生中的作用。方法:获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取干细胞,并进行体外扩增、传代,取第3代细胞分别用不同诱导培养液进行成骨、成脂诱导,诱导后通过细胞形态学和特殊染色观察诱导效果。用PKH26标记细胞,制作部分肝切除模型,将标记的自体ADMSCs经门静脉植入体内,2周后切下取肝脏制成冰冻切片,荧光显微镜观察植入细胞在肝脏的定位,免疫荧光染色观察其白蛋白的表达。结果:从脂肪组织中分离出的细胞能在体外大量扩增,能被诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞,ADMSCs移植2周后,可见PKH26标记细胞散在分布于肝内,免疫荧光染色显示标记细胞白蛋白染色阳性。结论:大鼠脂肪组织中可以获取具有多向分化潜能的间充质干细胞,该细胞在肝再生环境中能向肝细胞分化,参与肝再生。     

脐带间充质干细胞移植对慢性试验性肝损伤的治疗作用

目的观察脐带间充质干细胞（UC-MSC）对慢性实验性肝损伤的治疗作用并探讨其分子生物学机理。方法 50只7周龄的NOD/SCID小鼠注射四氯化碳（CCL4）制备慢性肝损伤模型后,应用随机数字表的方法随机将实验小鼠随机分成2组：模型组（25只）和UC-MSC移植组（25只）。UC-MSC移植组通过尾静脉注射移植1×106 UC-MSC,模型组注射同样体积的PBS。分别于移植后1、2、3和4周收集肝组织,应用免疫组织化学,RT-PCR和Western blot的方法分析细胞移植前后肝组织的病理生理学特征的变化。采用t检验和方差分析进行统计学分析。结果 UC-MSC移植治疗后肝组织表达人肝细胞特异性AFP,Alb,和内皮细胞特异性CD31,Flk-1。细胞移植4周后v WF标记的血管密度明显增加,同时伴有部分的肝功能改善,谷丙转氨酶（ALT）水平从（55.71±11.33）U/L减至（36.75±12.80）U/L（P〈0.05）。此外,本研究结果表明UC-MSC分泌几种重要的生长因子HGF,FGF-2,VEGF,和VEGF受体通过旁分泌的途径发挥肝组织修复的功能。结论在CCL4诱导的慢性肝损伤模型肝组织,人UC-MSC可以分化成肝细胞样细胞和内皮细胞样细胞,同时旁分泌多种细胞生长因子修复损伤的肝细胞,并伴有肝功能的改善。认为UCMSC移植或许成为将来肝脏损伤疾病一个重要的治疗选择。     

人羊膜间充质干细胞移植对CCl_4诱导的小鼠损伤肝HGF、SIRT-1、α-SMA及P~(27kip1)表达的影响

人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)具有自我增殖和多向分化潜能,有望为干细胞移植性治疗提供新来源,是病变组织器官损伤修复的理想种子细胞.但目前关于h AMSCs对肝损伤的修复机制仍不十分清楚.本研究采用胰蛋白酶-胶原酶消化法从羊膜组织中分离、纯化了间充质干细胞.免疫荧光检测表面标记波形丝蛋白(vimentin)和阶段特异表达抗原4(SSEA-4)均呈阳性.h AMSCs表达CD29、CD49d、CD73表面抗原,但不表达骨髓间充质表面抗原CD34、CD45和人类白细胞抗原DR位点(HLA-DR).实时定量PCR和Western印迹检测揭示,h AMSCs移植后可提高受损肝组织中肝细胞生长因子(HGF)和沉默信息调节因子1(SIRT-1)的表达,抑制α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和周期性蛋白依赖性激酶抑制因子(P27kip1)的表达.因为上述蛋白质分子涉及肝细胞增殖、再生、凋亡调节,抑或肝纤维化过程,因此h AMSCs移植后所引起的上述分子表达变化可改善四氯化碳(CCL4)诱导的肝损伤,抑制肝细胞凋亡,促进肝细胞有丝分裂,对肝损伤有一定的修复作用.该研究为进一步探索调控肝再生、损伤修复信号通路(机制)及预防肝纤维化提供了新启示.     

利用人脐血单个核细胞重建急性肝损伤小鼠肝组织的实验研究

利用人脐血单个核细胞重建急性肝损伤小鼠肝组织,探索建立人-小鼠嵌合肝模型方法。15只SCID小鼠,以四氯化碳(CCL4)制备急性肝损伤模型,24h后行2/3肝切除,然后分为三个实验组细胞移植组(7只)、阴性对照组(3只)及空白对照组(5只);将人脐血单个核细胞悬液注入细胞移植组小鼠脾脏内,阴性对照组小鼠脾脏内注入等量磷酸盐缓冲液(PBS),空白对照组不注射细胞悬液和PBS。术后7d、14d及21d取小鼠肝组织观察病理变化、检测人白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19),同时检测小鼠血清及肝组织匀浆中人ALB含量。全部小鼠表现出急性肝损伤组织学特征;细胞移植组小鼠术后7d、14d、21d肝组织内均见大量人ALB及CK19阳性表达细胞,血清及肝组织匀浆可检测出人ALB;阴性对照组小鼠肝组织未见人ALB及CK19阳性表达,血清及肝组织匀浆中未检测出人ALB。人脐血单个核细胞在部分肝切除的急性肝损伤小鼠肝组织内可大量分化为人肝细胞及胆管细胞,在建立模型方面已取得关键突破。     

移植骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞治疗大鼠脊髓损伤

目的:研究骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞移植治疗成鼠脊髓损伤的可行性。方法:选取成年SD大鼠32只,两只用以提取骨髓间充质干细胞,其余被分为3组,其中细胞移植组10只,PBS缓冲液组10只,空白对照组10只。骨髓间充质干细胞分离传代培养并诱导成神经元样细胞后用Hoechst33342标记,损伤1周后采取静脉注射移植的方法移植于大鼠脊髓损伤区,移植六周后用免疫荧光方法检测细胞的存活及与宿主脊髓的整合情况。脊髓损伤后的1~6周对各组动物进行BBB评分,用SPSS12.0进行数据分析。结果:细胞移植组动物的BBB评分提高显著,于其他两组差异有统计学意义。细胞移植组免疫荧光显示,移植细胞在体内大量存活并桥接于脊髓损伤区的两端,存活的多数细胞神经元特异性标记物NSE、NF-200、星形胶质细胞特异性标记物GFAP表达呈阳性。结论:移植定向诱导的神经元样细胞有助于大鼠脊髓损伤后的功能恢复。     

脐血间充质干细胞对小鼠辐射性肝损伤的作用

目的:研究脐血间充质干细胞(UCMSC)对全身X线受照小鼠的肝组织辐射损伤后的防护作用,为相关放射性肝疾病的治疗提供理论依据。方法:选取清洁级SD小鼠进行全身辐射,建立小鼠辐射损伤模型,观察辐射前后小鼠的一般状态;给小鼠注射UCMSC悬浮液1 m L和等体积生理盐水,分别于处理后第1、2、7、14 d取小鼠肝脏,用苏木精-伊红染色,观察辐射后肝组织病理形态学的变化;取肝脏组织匀浆检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果:辐射组小鼠与正常组小鼠相比活动明显减少,治疗后的小鼠状况有所恢复;肝组织石蜡切片染色显示,按组织学标准评价后各组肝组织比较有显著性差异;辐射组与正常组比较,肝细胞内MDA含量显著升高,SOD活性显著降低,差异有统计学意义;普通组与辐射组比较,肝细胞内MDA含量有所降低,SOD活性有所升高有明显改善作用;加强组与普通组比较,MDA含量降低,SOD活性有所升高。结论:脐血间充质干细胞移植具有清除自由基、减轻肝损伤及修复再生损伤肝细胞的作用,能够有效改善肝脏损伤。     

灰树花胞外多糖对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用

四氯化碳可导致小鼠急性肝损伤,采用灰树花胞外多糖(GFP)防治后,对其血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和过氧化氢酶活力(CAT)以及肝组织匀浆中的丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)进行测定,与模型组相比较,灰树花胞外多糖治疗组ALT、AST、MDA、LDH活力明显降低,而CAT活力明显升高。通过组织切片染色可以直观的看出灰树花胞外多糖能显著减轻肝组织病理变化程度。结果显示GFP对CCL4致小鼠急性肝损伤具有保护作用。     

菲立磁标记食蟹猴骨髓间充质干细胞的脑内移植示踪研究

中枢神经系统损伤后的再生修复问题一直是神经科学领域关注的重点之一,骨髓间充质干细胞移植治疗拓宽了人类中枢神经系统损伤的治疗前景,而非侵入性的磁共振成像能活体追踪移植细胞,评价移植效果。应用菲立磁标记食蟹猴骨髓来源的间充质干细胞,在脑立体定位仪引导下,自体脑内移植。结果显示,菲立磁标记间充质干细胞的有效率高达90%以上,移植区磁共振影像呈明显的低信号改变。标记的间充质干细胞移植后在脑内存活,并向周围的脑实质内迁移。移植8周后,发现移植细胞通过血管向对侧脑部迁移,但并未发现移植细胞向神经细胞分化。这些结果提示,菲立磁可用于标记、追踪脑内移植的食蟹猴骨髓间充质干细胞,标记的移植细胞可在脑内存活、迁移。     

人脐带间充质干细胞对CCl4诱导肝纤维化的治疗作用研究

目的：探讨人脐带间充质干细胞（UC-MSC）治疗肝纤维化的可行性。方法：采用CCL腹腔注射小鼠制备肝纤维化模型,分别于第4、10周给予尾静脉注射移植UC-MSC进行治疗,检测治疗后血清学指标的改变和病理变化,观察UC-MSC对肝纤维化的疗效。结果：4周和10周进行治疗均可改善肝功能,减轻纤维化程度。结论：UC-MSC对CCl4诱导的肝纤维化具有一定的疗效。     

人羊膜间充质细胞分离培养及其干细胞特性研究

目的：研究人羊膜间充质细胞（Humanamnioticmesenchymalcells,HAMCs）的分离、培养及其干细胞特性,为羊膜间充质细胞在再生医学的潜在应用奠定实验基础。方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,经胰酶胶原酶序贯消化,DMEM/F12培养,倒置显微镜下观察其形态,MTT法检测其生长规律,免疫荧光的方法对细胞进行鉴定,定向诱导方法检测细胞的多向分化潜能。结果：来源于羊膜的间充质细胞,细胞免疫荧光显示SSEA-4,OCT-4阳性,具有很强的增殖能力,并且具有一定的多向分化能力,在特定条件下可分化为脂肪细胞和成骨细胞;结论：羊膜间充质细胞能够在体外分离、培养、扩增,并且具有干细胞特性。羊膜间充质细胞在再生医学和组织工程应用有很好的前景。     

The potential of mesenchymal stem cells derived from amniotic membrane and amniotic fluid for neuronal regenerative therapy

The mesenchymal stem cells (MSCs), which are derived from the mesoderm, are considered as a readily available source for tissue engineering. They have multipotent differentiation capacity and can be differentiated into various cell types. Many studies have demonstrated that the MSCs identified from amniotic membrane (AM-MSCs) and amniotic fluid (AF-MSCs) are shows advantages for many reasons, including the possibility of noninvasive isolation, multipotency, self-renewal, low immunogenicity, anti-inflammatory and nontumorigenicity properties, and minimal ethical problem. The AF-MSCs and AM-MSCs may be appropriate sources of mesenchymal stem cells for regenerative medicine, as an alternative to embryonic stem cells (ESCs). Recently, regenerative treatments such as tissue engineering and cell transplantation have shown potential in clinical applications for degenerative diseases. Therefore, amnion and MSCs derived from amnion can be applied to cell therapy in neuro-degeneration diseases. In this review, we will describe the potential of AM-MSCs and AF-MSCs, with particular focus on cures for neuronal degenerative diseases. [BMB Reports 2014; 47(3): 135-140]     

Neural Stem-Like Cells Derived from Human Amnion Tissue are Effective in Treating Traumatic Brain Injury in Rat

Although human amnion derived mesenchymal stem cells (AMSC) are a promising source of stem cells, their therapeutic potential for traumatic brain injury (TBI) has not been widely investigated. In this study, we evaluated the therapeutic potential of AMSC using a rat TBI model. AMSC were isolated from human amniotic membrane and characterized by flow cytometry. After induction, AMSC differentiated in vitro into neural stem-like cells (AM-NSC) that expressed higher levels of the neural stem cell markers, nestin, sox2 and musashi, in comparison to undifferentiated AMSC. Interestingly, the neurotrophic factors, brain-derived neurotrophic factor (BDNF), nerve growth factor (NGF), neurotrophin 3 (NT-3), glial cell derived neurotrophic factor (GDNF) and ciliary neurotrophic factor (CNTF) were markedly upregulated after neural stem cell induction. Following transplantation in a rat TBI model, significant improvements in neurological function, brain tissue morphology, and higher levels of BDNF, NGF, NT-3, GDNF and CNTF, were observed in the AM-NSC group compared with the AMSC and Matrigel groups. However, few grafted cells survived with minimal differentiation into neural-like cells. Together, our results suggest that transplantation of AM-NSC promotes functional rehabilitation of rats with TBI, with enhanced expression of neurotrophic factors a likely mechanistic pathway.     

Flk1+间充质干细胞减轻四氯化碳导致的肝纤维化的研究

许多慢性肝脏疾病都会发生肝纤维化,但是目前尚缺乏对肝纤维化切实有效的治疗手段。实验发现,Flk1(fetal liver kinase)阳性间充质干细胞(MSC)能够减轻四氯化碳(CCl4)所致小鼠肝纤维化。取雄性BALB／c小鼠骨髓,分离培养Flk1^ MSC,用CCl4制作雌性小鼠肝纤维化模型,在CCl4损伤后立即或1周后经尾静脉注射Flk1^ MSC,2或5周后检测受体小鼠肝脏的纤维化程度和供体细胞的植入。结果发现,CCl4损伤后立即注射Flk1^ MSC,可以使肝脏损伤程度明显减轻,减少胶原沉积,使肝脏羟脯氨酸含量及血清纤维化指标显下降;而损伤1周后注射细胞则无明显变化。免疫荧光、PCR和荧光原位杂交方法证实,在受体肝脏中有供体细胞植入,呈上皮细胞形态,并表达白蛋白,但是数量很少。因此,Flk1^ MSC具有潜在的植入肝组织的能力,并可能启动肝组织的内源性修复,减轻CCl4导致的肝纤维化。