林生山黧豆中2,4—二氨基丁酸合成代谢的体外酶学研究

用~3H-天门冬氨酸为底物,林生山黧豆(Lathyrus sylvestris L.)叶片匀浆上清液为粗酶液,进行体外反应。结果表明,天门冬氨酸的放射性掺入到2,4-二氨基丁酸,加入谷氨酸则能抑制这种掺入。将上述粗酶液透析,加入可能的辅助因子,天门冬氨酸的放射性也掺入到2,4-二氨基丁酸。研究证实在体外天门冬氨酸可以作为2,4-二基丁酸合成的底物,在林生山黧豆体内存在催化天门冬氨酸转变为2,4-二氨基丁酸的合成酶(系)。以2,4-二氨基丁酸和γ-氨基丁酸为底物,用氨基酸自动分析仪测定产物含量,结果表明,2,4-二氨基丁酸和γ-氨基丁酸不互相转变。     

胁迫处理对林生山黧豆蛋白质多肽及其含量的影响

应用二维电泳技术,分析了经水分胁迫（ＰＥＧ）、盐分胁迫（ＮａＣｌ）和热激（４０℃）处理后林生山黧豆（ＬａｔｈｙｒｕｓｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓＬ．）体内蛋白质多肽及其含量的变化。有些蛋白质经ＰＥＧ、ＮａＣｌ和热激处理后可以产生相同的变化。两种不同的胁迫因子对某些蛋白质的影响有一定的共同性。特定的胁迫条件可以造成特定的影响。不同胁迫因子对同一蛋白质多肽可以造成不同的影响。胁迫下蛋白质的变化可能与林生山黧豆抵抗和适应胁迫条件的能力以及体内非蛋白质氨基酸的代谢有关     

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分性质的研究

以林生山黧豆为材料,利用硫酸按分段盐析,丙酮沉淀,DEAE-SepharoseFF离子交换柱层析,SephacrylS300凝胶过滤柱层析及FPLC-MonoQ柱层析技术,以聚酰胺薄膜层析荧光定量法为酶活力检测手段,分离纯化了谷氨酸脱羧酶,达到电泳银染纯．纯化后的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶活力达375．09U·mp-1,纯化倍数38．2倍,经SDS-PAGE测定,其亚基分子量为70kD,经梯度PAGE确定,天然分子量为140kD,表明该酶是由两个亚基组成的二聚体．酶学研究表明,纯化的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的最适pH值为5．4,对谷氨酸的Km值为1．62×10-3mol·L-1,酶的最适温度为40℃,酶特异性地使谷氨酸脱羧,不能使天门冬氨酸等其它氨基酸脱羧．     

三七素检测方法研究进展

三七素是中药三七的止血活性成分,也存在于山黧豆等植物中,称山黧豆神经毒素,其化学成分为β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸,属非蛋白游离氨基酸。本文从传统氨基酸分析、气相、液相色谱及其色谱-质谱联用、毛细管区带电泳、流动注射等方面综述了三七素的分析检测方法,并对相关技术进行了评述,为合理选择三七素检测手段提供参考。     

林生山黧豆幼苗2,4—二氨基丁酸的合成及其与胁迫条件的关系

林生山黧豆幼苗用［3H］－天门冬氨酸标记后,高丝氨酸在6h内迅速增加。高丝氨酸合成速率降低后,2,4－二氨基丁酸的合成量上升,于18h达到高峰。赖氨酸和苏氨酸与二氨基丁酸的合成表现有协同反馈机制。结果支持了天门冬半醛转氨生成二氨基丁酸的假说。盐胁迫、渗透胁迫和热激增加了二氨基丁酸的合成,可能是因为不同胁迫条件都造成了细胞脱水,从而促进了二氨基丁酸的合成。     

三七素检测方法研究进展

三七素是中药三七的止血活性成分,也存在于山黧豆等植物中,称山黧豆神经毒素,其化学成分为β-N-草酰-L-α,p二氨基丙酸,属非蛋白游离氨基酸.本文从传统氨基酸分析、气相、液相色谱及其色谱-质谱联用、毛细管区带电泳、流动注射等方面综述了三七素的分析检测方法,并对相关技术进行了评述,为合理选择三七素检测手段提供参考.     

用121MB型氨基酸分析仪测定山黧豆中的毒素

山黧豆(Lathyrus sativusl)适应性强,含蛋白质25％,高于小麦。近年来在世界一些干旱地区种植面积不断扩大。因山黧豆中含有毒素β-草酰氨基丙酸(βOAA),所以国内外对选育低毒山黧豆品种、去毒及βOAA的测定方法做了不少研究;测定βOAA多采用纸层析比色法。本文介绍用121 MB型氨基酸分析仪测定βOAA,其优点是测定小肽化合物不会污染层析柱。 1.原理βOAA属双肽化合物,溶于水、酒精、柠檬酸缓冲液中,水溶液呈酸性,可用阳离子交换     

山黧豆毒素β-ODAP的生态学功能及应用

山黧豆是一种具有广谱抗逆性且营养丰富的豆科作物,但其含有β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙氨酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionic acid, β-ODAP)神经毒素,人畜长期大量食用会导致神经性中毒,因此限制了山黧豆种质资源的利用.本文综述了干旱胁迫下山黧豆毒素β-ODAP对植株渗透调节和生长调节的影响,以及β-ODAP的分析方法、毒理机理和实用价值方面的研究进展,并对低毒和无毒品种选育策略进行了总结.干旱胁迫下,山黧豆合成大量毒素β-ODAP,其含量随胁迫程度增强而逐渐升高.β-ODAP可为植株生长和种子发育提供氮源,并积极参与清除活性氧过程,作为小分子可溶性氨基酸参与渗透调节,作为锌离子转运体参与根瘤发育.而含硫氨基酸(甲硫氨酸和半胱氨酸)含量升高可使山黧豆毒性显著降低.近年来,在山黧豆种质资源收集、杂交育种,以及通过组织培养和基因操作等技术进行低毒或无毒山黧豆品种选育方面做了大量工作.β-ODAP可通过破坏细胞内Ca²⁺稳态和作为谷氨酸类似物引发兴奋性中毒,但在止血和抗肿瘤等方面有重要的药用价值.     

小麦谷氨酸脱羧酶的纯化及部分性质研究

谷氨酸脱羧酶（ｇｌｕｔａｍａｔｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ,ＧＡＤ,ＥＣ４．１．１．１５）催化谷氨酸脱羧生成γ－氨基丁酸（γ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒａｔｅ,ＢＡ）,植物中已从南瓜［１］、马铃薯和林生山黧豆［２］纯化了ＧＡＤ．ＧＡＤ活性在禾本科作物中作为...     

植物游离氨基酸样品的制备方法

<正> 绪言在植物组织中,氨基酸除了组成肽或蛋白质外,还能游离存在。游离氨基酸包括蛋白质氨基酸及非蛋白氨基酸,除去蛋白质的20种普通氨基酸外,在植物体内发现的非蛋白氨基酸已超过200种,近年来还陆续有新的发现。它们大多数是蛋白质中存在的。α-氨基酸的衍生物,但是也发现有β-,γ-,或δ-     

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分性质的研究

以林生山黧豆为材料,利用硫酸铵分段盐析,丙酮沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ离子交换柱层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶过滤柱层析及ＦＰＬ－ＭｏｎｏＱ柱层析技术,以聚酰胺薄膜层析荧光定量法为酶活力检测手段,分离纯化了谷氨酰羧酶,达到电泳银染纯,纯化后的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶活力达３７５．０９Ｕ．ｍｇ＾－１,纯化保数３８．２倍,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,其亚基分子量为７０ｋＤ,经工ＰＡＧＥ确定     

丁一氨酸研究的历史、现状及前景

<正> 丁二氨酸(2,4 DiaminobutyricAcid,英文缩写DABA)’也称为2,4一二氨基丁酸,是一种次生非蛋白质氨基酸,属于四碳化合物,其结构式为(NH_2)CH_2CH_2CH(NH_2)COOH,与天门冬氨酸有内在的联系。由于氨基数目多于羧基,故该氨基酸属于碱性氨基酸。它广泛存在于动物、植物和微生物体内,呈游离或结合状态存在,具有独特的生理功能。尽管丁二氨酸从发现     

γ-氨基丁酸代谢旁路在植物响应逆境胁迫中的作用机制研究

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是普遍存在于生物体内的一类四碳非蛋白质氨基酸,其合成与代谢主要是通过三羧酸循环的一个旁路,即γ-氨基丁酸旁路(GABA-shunt)进行的,其生物学功能十分广泛,主要参与植物的生长发育、碳/氮源营养平衡、逆境胁迫响应和信号传递等一系列重要生命活动。本文从生理生化、分子水平简要介绍植物γ-氨基丁酸代谢旁路在逆境胁迫响应中的作用机制及生物学功能的研究进展。     

丹磺酰氯法和聚酰胺薄膜层析法检测2,4—二氨基丁酸和γ—氨基丁酸

Measuring2,4－DiaminobutyricAcidandY－AminobutyricAcidbythe恤th一讪ofDansyl－clandThin－layerChromatographyonP0lyaM砌SHENLIMins,MUXia。Min,ZHAOGe（＆山…功m山叨,ffei－xmn地加加动血U～…,ffei－x－－si100094）2,十二氨基丁酸（丁二氨酸,DABA）是一种次生非蛋白质氨基酸,存在于一些动物、植物和微生物体内。在豆科植物林生山势豆（hampsmZwesiT。）体内,游离的D＾B＾的含量很高,可占到干重的l％以上［‘］。研究表明,高浓度的DABA与这种植物抗旱、耐贫瘠、耐盐碱和抗虫的特性有关。此外,DABA还…     

湖南道地白芷氨基酸含量与组成分析

白芷是我国常用中药材的一种,关于白芷镇痛的有效成分,主要认为是异欧前胡素、欧前胡素等香豆素类具有解痉、镇痛等作用的挥发油类化学成分,但白芷镇痛的成分及其机理尚不十分清楚,是否有其他物质也具有一定的药理作用也不得而知,比如说某些药效性氨基酸。该研究采用自动氨基酸分析仪测定了湖南道地茶陵白芷的蛋白质类氨基酸和游离氨基酸的含量,并分析其氨基酸组成。结果表明:总氨基酸检出除Asn以外的其他16种蛋白质氨基酸,含量最高的Arg占总氨基酸的31.21%,接近1/3;必需氨基酸总量达27.01%,其中含量最高的是Leu,占总必需氨基酸的24.14%;药效氨基酸比例较高,在酸水解产物总氨基酸和游离氨基酸中分别达到73.89%和85.78%,其中Arg的含量最高,达1.383g·100g-1,占比为42.24%,游离氨基酸中γ-氨基丁酸、鸟氨酸含量也较高。此外,还含有少量的高半胱氨酸和鹅肌肽等游离非蛋白质氨基酸和短肽;必需氨基酸的组成接近WHO/FAO的建议摄入值,但Met+Cys的RC值最小,为第一限制性氨基酸。这些药效性氨基酸和游离氨基酸可能是茶陵白芷具有良好药效的一个因素,而且茶陵白芷的氨基酸组成和配比较合理、符合人体需要,在强化含硫氨基酸的基础上具有开发成为新型药食同源保健性食品的潜力。研究结果可为进一步研究白芷的药理作用提供依据。     

60Coγ射线与EMS复合处理对山黧豆抗氧化酶活力及ODAP含量的影响

1　引　　言山黧豆抗寒、抗旱、耐贫瘠 ,尤其适于干旱、半干旱地区种植 .但山黧豆中含有的毒素 β ＯＤＡＰ会导致下肢瘫痪 .由于这个原因限制了山黧豆的大面积栽培 .我们采用 60 Ｃｏγ射线和ＥＭＳ单因子、复因子诱变的方法选育丰产、低毒、无毒山黧豆新品系 .近年来对生物辐射敏感性的研究表明 ,其抗性除与本身ＤＮＡ损伤修复能力有关外 ,还与体内所含防护物质有关 ,ＳＯＤ、ＰＯＤ、ＣＡＴ即是重要的保护物质 .关于抗氧化酶活性与辐射剂量、诱变剂浓度关系的研究很少 ,因此本实验对山黧豆成苗率、抗氧化酶活性、和 β ＯＤＡＰ含量进行…     

山黧豆毒素的薄层分离

通过对山黧豆中常见的20几种游离氨基酸薄层层析发现,其毒素ODAP的Rf值与好几种相关氨基酸的接近,而用阳离子交换柱对氨基酸抽提样进行简单的分离纯化,第一个洗脱出来的即为ODAP,这样在排除其它氨基酸干扰的情况下再进行ODAP的薄层分析将得到准确的结果。     

山黧豆毒素ODAP的生物合成及与抗逆性关系研究进展

有关山黧豆毒素ODAP的生物合成途径的前体物和合成程序已经证实,但其关键合成酶尚未分离与鉴定,因而无法克隆相应基因和利用反义RNA技术以控制其生物合成。研究表明,利用相应的抑制剂控制ODAP生物合成前体物可降低ODAP的积累量。山黧豆中ODAP含量与其抗逆性之间密切相关,这与其能有效地清除山黧豆中·OH自由基有关,外源ODAP处理获同样效果。此外,因ODAP既是含氮化合物,又是游离氨基酸,极易溶于水,可在逆境胁迫下与脯氨酸和多胺一样大量而迅速地积累,推测它也可能作为细胞渗透调节物质和防脱水剂,并在氮代谢和能量代谢方面起重要作用。对今后该领域的重点研究方向也进行了探讨。     

鼎湖山季风常绿阔叶林林下层3种优势树种游离氨基酸和蛋白质对模拟氮沉降的响应

报道了林下层3种优势树种光叶山黄皮（Randia canthioides）、黄果厚壳桂（Cryptocarya concinna）和厚壳桂（Cryptocarya chinensis）叶片游离氨基酸和蛋白质对模拟氮沉降的响应,并探讨这3种植物中重要氨基酸对氮沉降的指示作用,以及γ-氨基丁酸含量的变化对植食性动物的可能影响,为揭示氮沉降对森林植物生理生态影响及其机理,以及监测氮沉降对植被的影响等一系列问题提供初步的理论基础.结果表明,试验21个月后,3个树种叶片游离氨基酸和蛋白质的含量均发生了明显的变化.对总的游离氨基酸含量而言,光叶山黄皮和厚壳桂对氮处理的响应相似,氮处理样地的含量均高于对照,并且中氮处理显著高于对照（p＜0.05）,但两者在高氮处理下均出现了下降的趋势;黄果厚壳桂随着氮处理强度的增加,游离氨基酸总量呈现下降趋势.对于可溶性蛋白质含量来说,光叶山黄皮、黄果厚壳桂和厚壳桂在氮处理下都出现了增加的趋势,黄果厚壳桂和厚壳桂增加尤为明显.找出了对氮沉降响应敏感的指示剂.游离氨基酸丝氨酸、精氨酸和γ-氨基丁酸,特别是精氨酸,可以用来作为光叶山黄皮对氮沉降响应的指示剂;γ-氨基丁酸可以作为黄果厚壳桂对氮沉降响应的指示剂;丝氨酸和γ-氨基丁酸可以作为厚壳桂对氮沉降响应的指示剂.个别游离氨基酸的积累情况可被用来监测氮沉降对植被的影响.     

臭灵丹草氨基酸成分分析

用氨基酸分析仪分析中药臭灵丹草叶片的氨基酸成分,并比较其水解氨基酸和游离氨基酸含量.结果表明:臭灵丹草中鉴定出18种氨基酸成分,水解氨基酸总量为18.68%,游离氨基酸总量为2.75%.γ-氨基丁酸含量可达0.1%以上.