脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人外周血单个核细胞 HLA-I分子表达的影响

研究探讨了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞HLA-I(human leucocyte cyte antigen I)分子表达影响.采用流式细胞术(FCM)和免疫印迹方法研究了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞表面HLA-I分子表达的影响及其量效关系.FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度降低人外周血单个核细胞表面HLA-I分子的表达,DON 50ng/mL、100ng/mL、1000 ng/mL和2000 ng/mL组HLA-I类分子的平均表达量分别为6.92±0.68、6.64±0.69、5.95±0.48和5.48±0.77,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞HLA-I分子表达降低,两者呈显著负相关(r=0.737,P＜0.01).Western印迹结果显示,大剂量DON(1000ng/mL和2000ng/mL)组人外周血单个核细胞HLA-I分子表达明显减弱.研究结果表明脱氧雪腐镰刀菌烯醇可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞HLA-I分子的表达.     

高GC含量的鳜鱼rRNA基因家族的克隆

动物rRNA基因是一种GC含量较高、结构复杂的重复序列。该研究结合亲缘生物法生物信息学技术,经反复摸索后选用LA PCR法即LA PCR Taq酶结合GC缓冲液来扩增鳜鱼复杂的rRNA基因重复序列,经测序鉴定最终克隆了鳜鱼的3个rRNA基因及其2个间隔序列。分析了鳜鱼与相关动物的rRNA基因序列的同源性和进化关系。探索了克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用、循环参数的调整等措施。     

外源K+和水杨酸在缓解融雪剂对油松幼苗生长抑制中的效应与机理

随着融雪剂在国内外寒冷地区的广泛应用及其在城市使用量的逐年增加,融雪剂对城市生态环境的危害引起了广泛的重视。其中,融雪剂在城市道路土壤中的积累对植物生长的影响已日益凸现。以油松幼苗为材料,通过分析0.2%浓度融雪剂胁迫下外源钾(K+)和水杨酸(salicylic acid,SA)对油松幼苗各生长生理指标的影响,探讨外源K+和SA在缓解融雪剂对油松幼苗生长抑制中的机理与剂量效应关系。结果表明,0.2%浓度的融雪剂处理对油松生长有明显的抑制作用,而20 mmol/L KNO3和2 mmol/L SA能明显诱导过氧化物酶(peroxidase,POD)活性的增强,缓解膜脂过氧化作用,降低丙二醛(malondialdehyde,MDA)在叶片中的积累,维持细胞膜的稳定性。虽然外源K+和SA对油松幼苗叶片胞间CO2浓度(intracellular CO2concentrations,Ci)和气孔导度(stomatal conductance,Gs)的缓解作用并不显著,但其可通过提高叶绿素含量促进光合作用的进行,缓解融雪剂胁迫对油松幼苗生长的抑制,分别增加生物量24.9%和63.6%。可见,20 mmol/L KNO3和2 mmol/L SA处理能有效缓解融雪剂对油松幼苗的伤害,为城市化学融雪剂的污染防治提供科学依据。     

人正常食管鳞状上皮不同原代培养方法的比较

该研究通过比较人正常食管鳞状上皮不同的原代培养方法,以期为不同的实验目的提供不同的培养方法。实验用到的正常食管粘膜上皮来源于食管癌患者手术切除的标本,采用组织块法和酶消化法,分别用DMEM/F12混合培养基和K-SFM无血清培养基进行培养。通过直接观察、细胞形态学观察和免疫细胞化学方法观察细胞的生长情况、细胞形态学特征及鉴定所得到的细胞,比较不同方法与不同培养基组合中原代培养细胞的生长状况。用组织块法,在DMEM/F12混合培养基中人正常食管上皮细胞生长较好,细胞融合较快,成纤维细胞污染较少,15～17天上皮细胞铺满瓶底的70%～80%,获得的细胞数量大,但细胞传代后成纤维细胞污染严重。用酶消化法,在K-SFM无血清培养基中人正常食管上皮细胞生长好,细胞融合快,成纤维细胞污染基本消除,细胞纯度高,10～12天细胞便可以铺满瓶底的70%～80%,这种方法培养的细胞可以冻存、复苏和传代。其余各种培养方法所得细胞无论在生长状态、培养周期、成纤维细胞污染和传代方面均较前两种方法差。以上各种方法培养的细胞经免疫细胞化学染色鉴定证实细胞呈广谱细胞角蛋白阳性,确定是食管上皮来源的细胞。酶消化法加K-SFM无血清培养基是本实...     

化学融雪剂对生态环境的影响

化学融雪剂用于清除道路积雪具有操作简便、价格低廉及融雪效果良好等优点,在国内外的寒冷地区应用广泛。随着化学融雪剂施用量的逐年增加,其对生态环境危害已日益凸现。本文结合近年来中国和其他国家有关化学融雪剂对生态环境影响的研究进展,阐述了化学融雪剂对土壤环境、地表水、地下水、植物和动物等的影响,并提出了今后该领域的研究建议,以期为化学融雪剂对城市环境污染和生态影响的防治技术研究提供科学依据。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对体外培养的两株胃癌细胞（SGC-7901和BGC-823）增殖及细胞周期的影响。采用细胞培养、噻唑蓝（MTF）比色法、流式细胞定量检测（FCM）、蛋白质免疫印迹（Western印迹）以及免疫细胞化学染色（ICH）等方法,研究不同浓度DON处理72h对体外培养胃癌细胞的增殖、细胞周期及细胞周期相关蛋白—细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（CKIs）P21WAF/CIP1和细胞周期蛋白E（cyclin E）表达的影响。MTT法检测结果显示DON可明显抑制两株胃癌细胞的增殖,SGC．7901和BGC．823细胞100、500、1000ug／L DON处理组的增殖抑制率分别为4．28％、36．20％、45．35％和14．89％、32．30％、51．61％。FCM检测结果显示,给予1000ug／LDON处理72h可使两株细胞周期阻滞在GffM期。在100～1000u扎浓度范围内,两株细胞P21WAF／CIP1表达量均高于对照组,P21WAF／CIP1的表达与DON浓度呈显著正相关关系（SGC-7901细胞：r=0．886,P〈0．01;BGC-823细胞：r=0．943,P〈0．01）;两株细胞的细胞周期蛋白E表达量均低于对照组,与DON浓度有明显剂量依赖关系（SGC．7901细胞：r=-0．923,P〈0．01;BGC-823细胞：r=-0．854,P〈0．01）。Western印迹及免疫细胞化学检测进一步证实了DON处理对蛋白质表达的影响。综合结果表明,DON可抑制体外培养胃癌细胞的增殖活性,G2／M期阻滞、P21WAF/CIP1表达增高及细胞周期蛋白E表达下降可能是DON抑制胃癌细胞增殖的可能机制,DON对分化程度不同的胃癌细胞的影响没有明显差别。     

赭曲霉毒素A对体外培养人肾小管上皮细胞凋亡的作用

探讨赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OA)对体外培养的人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响.体外培养HKC,给予不同浓度OA处理24 h后,分别采用流式细胞定量检测术(FCM)检测细胞的凋亡率,应用免疫细胞化学染色(SP法)和免疫蛋白印迹(Western 印迹)方法,观察凋亡相关蛋白caspase-3的表达以及JNK的表达水平和磷酸化水平(p-JNK).FCM检测结果表明,经OA处理24 h,HKC的凋亡率明显升高.SP法和Western印迹结果表明,OA处理组HKC caspase-3的表达以及JNK的磷酸化水平(p-JNK)均明显高于空白对照组和溶剂对照组,但各组间细胞JNK的表达水平无明显变化.OA处理可促进体外培养的人肾小管上皮细胞发生凋亡,JNK激活以及caspase-3可能参与OA诱导HKC凋亡的过程.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇抑制体外培养人外周血单个核细胞低分子量蛋白酶体-2表达

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞参与抗原呈递的低分子量蛋白酶体-2(LMP-2)表达的影响。采用流式细胞术(FCM)和半定量RT-PCR方法从蛋白质和mRNA水平分析了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞LMP-2分子表达的影响及其量效关系。FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度抑制人外周血单个核细胞LMP-2的表达,50ng/mlDON组、100ng/mlDON组、1000ng/mlDON组和2000ng/mlDON组LMP-2平均荧光强度分别为6.99±0.72、6.21±0.55、5.34±0.56和5.03±0.43,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞LMP-2表达降低,与DON浓度呈显著负相关(r=0.824,P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,不同浓度DON处理均可抑制人外周血单个核细胞LMP-2mRNA表达。DON在蛋白质和mRNA水平可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞LMP-2的表达。     

伏马菌素B1对人外周血单个核细胞抗原加工相关转运子表达的影响

探讨伏马菌素B1(FB1)对体外培养的人外周血单个核细胞(hPBMC)抗原加工相关转运子(TAP-1)表达的影响。采用流式细胞定量检测(FCM)、免疫印迹(Western印迹)及半定量RT-PCR方法,研究不同浓度FB1(0,10和50μmol/L)处理后人外周血单个核细胞TAP-1在mRNA和蛋白质水平表达的影响。RT-PCR检测结果表明,10和50μmol/L FB1处理24h后,处理组细胞TAP-1mRNA明显低于对照组。在蛋白质水平,FCM定量分析表明,两个处理组细胞表面TAP1的平均荧光强度均较对照组降低,以50μmol/LFB1处理组降低显著(P<0.05)。免疫印迹结果亦表明,FB1处理组TAP-1的表达均较对照组降低。10和50μmol/LFB1可抑制体外培养的hPBMCTAP-1mRNA和蛋白质表达。