慢病毒转染SPOP基因对滋养层细胞HTR8-SVneo增殖和侵袭的影响及其机制

为了探讨慢病毒转染SPOP基因后对滋养层细胞HTR8-SVneo增殖和侵袭能力的影响,并阐明其可能的机制,分别构建过表达和敲低SPOP基因的慢病毒载体,转入到HTR8-SVneo细胞中。分别在荧光显微镜下观察转染的荧光效率。用qRT-PCR法检测感染病毒后的细胞中SPOP mRNA的表达量,Western blotting法检测各组细胞中SPOP、PTEN、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β和GAPDH的表达量。采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞的侵袭能力。结果显示,在HTR8-SVneo、JAR和JEG3这3种滋养层细胞中,HTR8-SVneo细胞中SPOP蛋白表达相对最高。HTR8-SVneo细胞经慢病毒转染后,与对照组比较,过表达组中SPOP mRNA和蛋白表达量明显升高(p0.01),PTEN蛋白表达量升高,而p-AKT和p-GSK3β表达量降低,细胞的侵袭能力明显下降(p0.05),细胞增殖活力无明显变化。相反,敲低组中SPOP mRNA和蛋白表达量明显下降(p0.01),PTEN蛋白表达量降低,p-AKT和p-GSK3β表达量升高,细胞的侵袭能力和增殖活力均明显增强(p0.05)。研究结果表明,慢病毒转染SPOP基因可以影响滋养层细胞HTR-8/SVneo的增殖和迁移能力,其机制可能与PTEN/AKT/GSK3β信号通路调节有关。     

p21在滋养细胞迁移和侵袭中的作用研究

目的探究p21基因在正常滋养细胞迁移和侵袭中的作用以及可能的机制。方法通过siRNA敲低滋养细胞HTR-8/SVneo中的p21基因。通过细胞增殖实验、划痕实验以及Transwell小室侵袭实验,来观察p21敲低的滋养细胞迁移和侵袭能力的变化。通过实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印记分析(Western Blot),在mRNA和蛋白质水平上检测p21敲低对ERK3和MMP2表达的影响。结果 p21敲低的滋养细胞迁移和侵袭能力显著减弱,但对细胞增殖无影响。ERK3及MMP2在mRNA和蛋白质水平上的表达都显著降低。结论以上结果说明p21基因能促进正常滋养细胞的运动能力,这种作用与调节ERK3和MMP2的表达有关。     

镉对胎盘绒毛外滋养层HTR-8/SVneo细胞内抗氧化酶活性的影响

目的:探究氯化镉(CdCl_2)对胎盘绒毛外滋养层HTR-8/SVneo细胞内活性氧(ROS)水平和抗氧化酶活性的影响。方法:用不同浓度的CdCl_2(0、3、6、12μmol/L)处理HTR-8/SVneo细胞24 h,或者用12μmol/L CdCl_2处理HTR-8/SVneo细胞不同时间(0、6、12、24 h)后,CCK-8检测细胞活性;采用时间依赖模型,显微镜下观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞内ROS含量变化;试剂盒法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性及丙二醛(MDA)水平的变化;用12μmol/L CdCl_2与500μmol/L ROS清除剂NAC共处理HTR-8/SVneo细胞24 h,观察NAC对细胞的保护效应。结果:CdCl_2可以显著抑制HTR-8/SVneo细胞活性,且呈剂量和时间依赖性(P<0.01);随着CdCl_2处理时间的延长,HTR-8/SVneo细胞逐渐皱缩、变圆;细胞内ROS水平和MDA含量呈时间依赖性升高,而SOD、CAT和GPx活性呈时间依赖性降低;NAC可以显著抑制CdCl_2引起的ROS及MDA含量升高,缓解CdCl_2引起的形态损伤和抗氧化酶活性降低(P<0.05)。结论:镉可以引起HTR-8/SVneo细胞内ROS升高,并导致SOD、CAT、GPx活性降低和脂质过氧化。     

下调RALA表达抑制人白血病K562细胞迁移和侵袭

目的 研究小干扰RNA（siRNA）抑制v-ral 白血病致病因子RALA基因表达对人白血病K562细胞迁移和侵袭的影响.方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,Real-time PCR检测细胞内RALA mRNA的表达水平;Western印迹检测细胞内RALA蛋白的表达水平;Boyden趋化小室实验检测细胞体外迁移和侵袭能力.结果与随机对照组相比,转染48 h后,RALA siRNA显著下调K562细胞内RALA mRNA和蛋白的表达（P＜0.05）.与随机对照组相比,转染RALA siRNA的K562细胞迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）.结论 癌基因RALA在人白血病K562细胞迁移和侵袭过程中发挥重要作用,通过siRNA下调RALA的表达可抑制K562细胞迁移和侵袭能力.     

增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)对绒毛外滋养层细胞侵袭和迁移的影响

为了探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)对人绒毛外滋养层细胞HTR-8/Svneo侵袭和迁移的影响及机制,分别采用MTT法和流式细胞术确定DEHP的作用浓度,Transwell小室检测DEHP对细胞侵袭和迁移能力的影响,Rea;-time PCR和Western blot检测侵袭与迁移相关因子表达的变化。研究结果显示:100μmol/L及以上浓度的DEHP可促进HTR-8/Svneo细胞侵袭、迁移及MMP-2、MMP-9的表达,并上调p38、JNK的磷酸化,而DEHP的作用受p38与JNK的抑制剂拮抗。由此证明DEHP可通过p38、JNK信号通路上调MMP-2、MMP-9的表达,进而促进HTR-8/Svneo细胞侵袭和迁移。     

整合素β1表达上调对肺癌细胞迁移和粘附能力的影响

目的:构建整合素β1的全基因表达载体,并探讨上调整合素β1蛋白表达对肺癌细胞生物学行为的影响.方法:根据GenBank数据库提供的整合素β1基因核苷酸序列,构建整合素β1的全基因表达载体,同时将空载体pCDNA3.1作为阴性对照.将载体转入感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组栽体.2种重组栽体转染非小细胞肺癌细胞株PC-9细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株.荧光显微镜、Real-time RT-PCR、Western blot检测整合素β1的基因及蛋白水平的表达情况.细胞划痕试验和粘附试验比较整合素β1对细胞迁移、粘附能力的影响.结果:G418筛选出稳定转染整合素β1全基因表达栽体和空载体的细胞,分别命名为PC-9/D6和PC-9/PCD.荧光显微镜见满视野带绿色荧光的细胞,PC-9/D6细胞整合素β1的mRNA、蛋白表达明显高于对照的PC-9/PCD细胞及母细胞PC-9.划痕试验和粘附试验表明整合素β1过表达的细胞株的迁移和粘附能力明显提高.结论:成功转染并筛选出整合素β1过表达细胞株,整合素β1过表达的细胞株的迁移和粘附能力明显升高.     

过氧化物酶体增殖物激活受体α 对人绒毛滋养层细胞功能的影响

人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)是胎盘建立血液循环的重要组成部分,过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)是调节脂代谢的关键转录因子亚型,本研究旨在研究PPARα对人绒毛滋养层细胞功能的影响。将构建的PPARα表达载体和PPARα小干扰RNA分别转染HTR8/SVneo细胞,检测细胞功能的变化。本实验采取EdU法和MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,transwell小室法检测细胞迁移和浸润能力。结果显示,PPARα过表达能抑制滋养层细胞增殖、迁移和浸润能力,促进细胞凋亡能力;敲低PPARα能促进细胞的增殖、迁移和浸润能力,抑制细胞凋亡能力。PPARα表达水平与其对细胞生长和迁移的影响负相关。     

稳定干扰ITGB1抑制人乳腺癌BT549细胞迁移和侵袭

在人乳腺癌细胞系BT549中稳定干扰整合素β1(integrinβ1,ITGB1),研究其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。构建靶向干扰ITGB1基因的sh RNA慢病毒,感染BT549细胞,通过筛选成功获得稳定干扰ITGB1蛋白的BT-549细胞系,实验设空白对照组(Blank)、病毒感染阴性对照组(shNC)、ITGB1-shRNA慢病毒感染组(shITGB1);Real-time PCR和Western blotting法检测稳定干扰后ITGB1 mRNA和蛋白的表达情况;Western blotting法检测稳定干扰ITGB1后上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志蛋白(E-cadherin,Vimentin,N-cadherin,Fibronectin)的表达情况;利用划痕试实验和Transwell侵袭试实验分别检测稳定干扰ITGB1后细胞的迁移及侵袭能力。Real-time PCR和Western blotting结果显示,shITGB1组细胞ITGB1 mRNA和蛋白的表达水平显著低于Blank组和shNC组细胞(p0.01,p0.01)。Western blotting结果显示,稳定干扰ITGB1可部分逆转乳腺癌细胞BT549的EMT化;稳定干扰ITGB1后,上皮标志蛋白E-cadherin表达显著上调(p0.01),间质标志蛋白Vimentin(p0.05)、N-cadherin(p0.01)和Fibronectin(p0.01)的表达显著降低。划痕和Transwell侵袭试验实验结果显示,稳定干扰ITGB1后可显著降低乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力(p0.05,p0.05)。在乳腺癌BT549细胞中稳定干扰ITGB1后,通过逆转EMT化抑制细胞迁移和侵袭。     

MiR-18b-5p对人滋养细胞系HTR-8细胞迁移功能的影响

目的:通过研究子痫前期胎盘组织中低表达的miR-18b-5p(微小RNA18b-5p)对人滋养细胞系HTR-8迁移能力的影响,进一步探讨miR-18b-5p在子痫前期发病过程中的作用。方法:将化学合成的miR-18b-5p inhibitor、miR-18b-5p inhibitor NC,采用瞬时转染的方法将miR-18b-5p inhibitor转入人滋养细胞系HTR-8中设为实验组;miR-18b-5p inhibitor NC转入HTR-8细胞中设为阴性对照组;空白转染组为空白对照组。应用Realtime RT-PCR技术检测各组miR-18b-5p在mRNA水平的表达,同时采用微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell实验)检测实验组与对照组细胞迁移能力的变化。结果:Realtime RT-PCR结果显示:转染miR-18b-5p inhibitor后miR-18b-5p的表达量分别与阴性对照组和空白对照组相比明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。Transwell实验结果显示miR-18b-5p inhibitor组与两对照组相比细胞的迁移能力明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:在HTR-8细胞中降调节miR-18b-5p可以显著的降低细胞的迁移能力,推测病理性低表达的miR-18b-5p有可能通过降低滋养细胞的迁移能力,使妊娠早期细胞滋养细胞从固体绒毛顶端迁出减少,导致覆盖合体滋养细胞进而形成具有增殖能力的细胞簇减少,最终造成滋养层浅表植入,从而引起子痫前期的发生。     

miR-155-3p对HANK1细胞EAF1 mRNA降解速率及恶性增殖的影响*

目的:探究miR-155-3p对人NK/T细胞淋巴瘤细胞HANK1恶性行为的影响及潜在机制。方法:Targetscan数据库预测miR-155-3p的靶基因,培养对数生长期HANK1细胞,将细胞分为空白组、过表达组、对照组及干扰组,利用细胞转染技术依次转入pENTER-puro空白载体、pENTER-miR-155-3p过表达载体、GV248对照载体、GV248-miR-155-3p siRNA干扰载体。同时放线菌素D(ActD)处理各组细胞,实时荧光定量PCR技术检测各组细胞miR-155-3p、EAF1、β-catenin及c-Myc的表达水平,并分析各组细胞ActD处理后EAF1 mRNA降解速率(n=5),Western blot检测细胞EAF1、β-catenin及c-Myc蛋白表达情况(n=3),CCK-8检测细胞恶性增殖能力变化(n=5)。结果:与空白组相比,过表达组细胞miR-155-3p、β-catenin及c-Myc表达水平显著增高,EAF1表达水平降低且EAF1 mRNA半衰期缩短,细胞恶性增殖能力增强(P均＜0.05);与对照组相比,干扰组细胞miR-155-3p、β-catenin及c-Myc表达水平显著降低,EAF1表达水平升高且EAF1 mRNA半衰期延长,细胞恶性增殖能力降低(P均＜ 0.05)。结论:miR-155-3p可促进EAF1 mRNA降解及HANK1细胞恶性增殖能力。     

ω-3脂肪酸对人滋养层细胞侵袭和血管生成的影响

摘要 目的：探讨ω-3脂肪酸对人滋养层细胞（HTR-8/SVneo）侵袭和血管生成的影响。方法：本实验设置了不同浓度二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）处理组,依次为0、1、50和100 μmol/L EPA组;0、1、50和100 μmol/L DHA组。各组HTR-8/SVneo细胞分别用相应浓度的EPA和DHA培养48 h。然后通过CCK-8法检测细胞增殖,Matrigel Transwell实验检测细胞侵袭。使用EPA和DHA处理的HTR-8/SVneo细胞的上清液培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）6 h,然后检测HUVEC的小管形成能力。通过qRT-PCR和Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中三结构域蛋白22（TRIM22）、信号转导和转录激活因子1（STAT1）、p-STAT1（Tyr701）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、MMP9和VEGF的表达。结果：与0 μmol/L EPA组或0 μmol/L DHA组相比,50 μmol/L EPA组、100 μmol/L EPA组、50 μmol/L DHA组和100 μmol/L DHA组的OD_450nm 、侵袭细胞数量、MMP2和MMP9的蛋白相对表达量均升高（P<0.05）。与0 μmol/L EPA组或0 μmol/L DHA组相比,50 μmol/L EPA组、100 μmol/L EPA组、50 μmol/L DHA组和100 μmol/L DHA组的相对小管长度和VEGF蛋白相对表达量均升高（P<0.05）。与0 μmol/L EPA组或0 μmol/L DHA组相比,50 μmol/L EPA组、100 μmol/L EPA组、50 μmol/L DHA组和100 μmol/L DHA组的TRIM22 mRNA和蛋白相对表达量均升高,而STAT1 mRNA相对表达量和p-STAT1 (Tyr701)蛋白相对表达量均降低（P<0.05）。结论：ω-3脂肪酸处理可促进滋养层细胞的侵袭性和血管生成,其机制可能与TRIM22的上调和STAT1活性的抑制有关。     

芳姜黄酮对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞迁移、侵袭及凋亡的影响和机制研究

为研究芳姜黄酮(Ar-Turmerone)对人鳞状细胞癌A431细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及机制。实验采用CCK-8法检测抑制率,吉姆萨染色观察细胞形态,划痕实验和Transwell小室实验研究细胞迁移和侵袭能力的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。此外,通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)与蛋白质印迹法(western blot)法检测mRNA和蛋白表达。siRNA阻断Notch1,Hes1和PTEN,检测相应的下游mRNA和蛋白的表达变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果发现,芳姜黄酮可以抑制A431细胞增殖,使细胞形态发生改变,抑制细胞体外迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。经过芳姜黄酮处理后,Notch1,Hes1,PTEN的mRNA和蛋白表达升高。沉默Notch1,Hes1 mRNA和蛋白表达低于单纯给药组,而沉默Hes1,PTEN mRNA和蛋白表达也低于单纯给药组;沉默PTEN后,与单纯给药组相比,细胞死亡率降低。总之,芳姜黄酮可以抑制人鳞状细胞癌A431细胞的增殖并促进其凋亡,且具有抑制体外迁移和侵袭的作用,其促进细胞凋亡的机制是通过Notch1/Hes1/PTEN途径实现的。     

siRNA沉默整合素beta1 基因对子宫内膜癌细胞侵袭、转移的影响

目的：探讨siRNA 沉默整合素茁1 基因对子宫内膜癌细胞侵袭、转移的影响。方法：选取子宫内膜癌ECC-1细胞系(ER阳性) 和KLE细胞系(ER阴性)，分别转染Integrin beta1 siRNA 质粒(Integrin beta1 siRNA 组)、无义序列siRNA质粒(无义序列对照组)和空载 质粒(空载对照组)，利用实时荧光定量PCR 检测各组细胞中Integrin 茁1 mRNA的表达，Western blot 检测各组细胞中Integrin beta1、 beta-catenin 和C-Myc 蛋白的表达，Transwell 小室检测各组细胞迁移和侵袭能力，MTT 法检测各组细胞的增殖情况。结果：Integrin beta1 siRNA 组ECC-1 细胞和KLE 细胞中Integrin beta1 mRNA 和蛋白相对表达量均低于无义序列对照组和空载对照组(P<0.05)； Integrin beta 1 siRNA组ECC-1 细胞和KLE细胞中beta-catenin 蛋白和C-Myc 蛋白相对表达量均低于无义序列对照组和空载对照组， 差异均有统计学意义(P<0.05)；Integrin beta1 siRNA组ECC-1 细胞和KLE 细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数均低于无义序列对照组 和空载对照组(P<0.05)；Integrin beta1 siRNA 组ECC-1细胞和KLE 细胞的A 值均低于无义序列对照组和空载对照组(P<0.05)。结 论：特异性抑制Integrin beta1 基因可抑制子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和增殖，可能与抑制Wnt信号传导有关。     

SIK1作为miR-93新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

该文探讨了SIK1作为miR-93新的靶基因对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。采用重组质粒pcDNA3.1-SIK1上调前列腺癌细胞中SIK1的表达后,利用CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖;利用细胞划痕和Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;利用Western blot检测E-cadherin和Vimentin的蛋白表达。采用生物信息学方法预测靶向SIK1 mRNA的3’UTR的miRNAs并进行筛选;双荧光素酶报告实验和Western blot验证miR-93靶向调控SIK1。结果显示,上调SIK1的表达能抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并增加E-cadherin和减少Vimentin蛋白表达;miR-93能够靶向负调控SIK1。总之,SIK1可作为miR-93一个新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。     

HMGB1 siRNA 对HT-29 细胞侵袭转移能力的影响

目的:观察干扰HMGB1表达对HT-29细胞侵袭转移能力的影响。方法:HMGB1 siRNA通过脂质体转染HT-29细胞,western blot和实时定量RT-PCR检测HT-29细胞中HMGB1蛋白和mRNA的表达,Transwell小室观察HT-29的转移侵袭能力。结果:干扰HMGB1后HMGB1蛋白和mRNA的表达均减少,HT-29的转移侵袭能力下降。结论:HMGB1能促进HT-29的转移侵袭能力,干扰其表达可抑制HT-29的转移侵袭。     

HMGB1 siRNA对HT-29细胞侵袭转移能力的影响

目的：观察干扰HMGBl表达对HT-29细胞侵袭转移能力的影响。方法：HMGB1siRNA通过脂质体转染HT-29细胞,westernblot和实时定量RT—PCR检测HT-29细胞中HMGB1蛋白和mRNA的表达,Transwell小室观察HT-29的转移侵袭能力。结果：干扰HMGBl后HMGB1蛋白和mRNA的表达均减少,HT-29的转移侵袭能力下降。结论：HMGB1能促进HT-29的转移侵袭能力,干扰其表达可抑制HT-29的转移侵袭。     

下调窖蛋白-1表达抑制小鼠肝癌H22细胞侵袭能力

窖蛋白-1在不同肿瘤中发挥作用不同. 本研究以小鼠肝癌细胞H22为研究对象 ,观察下调窖蛋白-1表达对H22细胞侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制. 利用RT－PCR和Western印迹法检测了窖蛋白-1在H22及小鼠正常肝细胞IAR20中的 表达.结果显示,窖蛋白 1在H22中的表达高于其在IAR20中的表达,提示窖蛋白 -1高表达可能与H22细胞恶性表型有关. RNA干扰和凝集素印记实验结果显示,窖 蛋白-1－siRNA能够有效抑制窖蛋白－1mRNA和蛋白表达,并抑制细胞表面N－聚糖 β1,6GlcNAc分支形成. Transwell细胞迁移和侵袭实验结果显示,与未转染组和 siRNA 对照组比较,转染窖蛋白-1 siRNA的H22细胞迁移和侵袭数目明显减少. 本研究证明,下调窖蛋白－1表达可抑制H22细胞表面N 聚糖β1,6GlcNAc分支形 成,从而抑制细胞迁移和侵袭能力.     

siRNA沉默TGFβR1对人口腔上皮癌Ca9-22细胞增殖和凋亡影响

为了研究转化生长因子β受体1 (transforming growth factor-βreceptor 1,TGFβR1)在人口腔上皮癌Ca9-22细胞中的表达,并探讨TGFβR1 siRNA对Ca9-22细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测TGFβR1 mRNA在人口腔上皮癌Ca9-22细胞中的表达水平。通过lipofectamine 2000将TGFβR1 siRNA转染到Ca9-22细胞,荧光定量PCR检测TGFβR1 siRNA干扰效率,CCK8和流式细胞术分别检测TGFβR1 siRNA对Ca9-22细胞增殖和凋亡的影响;Western blotting检测TGFβR1 siRNA对Ca9-22细胞Hes1、Bcl2和Notch1蛋白表达的影响。荧光定量PCR检测结果显示,与正常人口腔上皮HOK细胞比较,人口腔上皮Ca9-22细胞中TGFβR1 mRNA水平显著升高;CCK8结果显示,与Control组比较,TGFβR1siRNA组细胞增殖率显著降低(p0.01);流式检测结果显示,与Control组比较,TGFβR1 siRNA组Ca9-22细胞凋亡率为显著升高(p0.01);Western blotting结果显示,与Control组比较,TGFβR1 siRNA组Hes1、Bcl2和Notch1蛋白表达显著降低(p0.01)。研究结果初步表示,siRNA干扰TGFβR1能够抑制Notch1/Hes1通路,抑制Ca9-22细胞增殖,促进Ca9-22细胞凋亡。     

DLC-1基因表达对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响

目的:研究DLC-1基因对结肠癌细胞侵袭迁移能力的影响.方法:将DLC-1 shRNA(短发夹状RNA,short hairpin RNA)序列克隆到质粒pGCsi-U6/Neo载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的DLC-1 shRNA表达质粒转入结肠癌细胞系LoVo细胞.采用RT-PCR技术和Western Blot技术分别检测LoVo细胞中DLC-1mRNA和蛋白表达水平的变化.Transwell小室人工重组基底膜侵袭转移实验观察LoVo细胞侵袭迁移能力的改变.结果:结肠癌细胞系LoVo细胞表达DLC-1分子.所构建质粒表达载体能有效地干扰LoVo细胞DLC-1 mRNA和蛋白质表达水平;Transwell小室人工重组基底膜侵袭转移实验结果显示,转染后LoVo细胞侵袭转移能力明显增强(p＜0.05).结论:结肠癌细胞系LoVo细胞表达DLC-1基因,应用RNAi技术可特异性降低其表达.DLC-1的表达水平与结肠癌细胞侵袭转移相关.     

siRNA沉默SIRT1基因对宫颈癌细胞HeLa增殖和凋亡的影响

化学合成靶向SIRT1基因的小干扰RNA,脂质体法转染人宫颈癌细胞株HeLa,观察小干扰RNA沉默SIRT1基因对HeLa增殖及细胞凋亡的影响。在优化siRNA SIRT1转染条件的基础上,应用RT-PCR和Western blot分别检测各组SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白及凋亡相关蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Hoechst荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果表明,siRNA SIRT1转染细胞组SIRT1 mRNA水平和蛋白表达量明显低于对照组;siRNA SIRT1转染组细胞增殖受抑制,细胞凋亡率明显增加;凋亡相关蛋白P53、P21表达上调,Survivin表达下调。上述结果表明:siRNA SIRT1诱导的HeLa细胞凋亡与P53、P21、Survivin通路关系密切,但siRNA SIRT1诱导HeLa细胞凋亡的详尽机制有待进一步研究。