基于亲和素-生物素双夹心体系测定外源性蛋白血清动态浓度的非抗体依赖新方法

建立一种非抗体依赖的检测外源性蛋白多肽分子代谢动力学血清浓度及动态变化的新方法．链亲和素为捕获分子,加入待测生物素标记蛋白或合成肽,辣根过氧化物酶标记链亲和素为检测分子,构成链亲和素-生物素标记大分子-酶链亲和素的双夹心体系,并进行特异性、敏感性、准确性及稳定性评价．本检测体系灵敏度高,可达0.3125 μg/L,且可通过改变亲和素包被浓度调整检出敏感度与检测范围．准确性回收率为97.82%～107.92%,批内、批间变异系数分别< 5.76% 和< 8.42%,并成功应用在生物素标记人血清白蛋白(biotin-HSA)与生物素标记鸡卵黏蛋白(biotin-OVM)的小鼠血清浓度动态检测．本方法不依赖抗体与放射性核素,可望在外源性蛋白多肽大分子及其药物的体内定量检测和代谢动力学研究中广泛应用．     

用生物素——抗生物素EIA法研究桥本氏病自身抗体产生机制

<正>为阐明桥本氏病自身抗体产生机制,本文建立了敏感度高的抗体测定法,研究末稍血淋巴细胞(PBL)对各种抗原刺激的反应和Ia阳性T细胞的作用。 方法:用生物素—抗生物素(B—A)EIA法测定甲状腺球蛋白(Tg)抗体价和微粒体(Mic)抗体价。在无刺激、特异抗原刺激及核系分裂原刺激下,研究PBL产生     

分子识别诱导的蛋白质和核酸多层膜的有序组装

通过生物大分子之间的特异性结合,采用表面等离激元共振技术监测,报导了支撑于固体表面脂单层膜上进行的亲和素、生物素标记的质粒ＤＮＡ,以及从系统性红斑狼疮患者血清中获得的抗ＤＮＡ抗体多层膜的有序组装。这种生物大分子的组装技术可以用于生物传感器以检测特定的抗原抗体。     

分子识别诱导的蛋白质和核酸多层膜的有序组装

通过生物大分子之间的特异性结合,采用表面等离激元共振技术监测,报导了支撑于固体表面脂单层膜上进行的亲和素、生物素标记的质粒ＤＮＡ、以及从系统性红斑狼疮患者血清中获得的抗ＤＮＡ抗体多层膜的有序组装。这种生物大分子的组装技术可以用于生物传感器以检测特定的抗原抗体。     

一种新型的抗原检测系统——免疫-PCR

一种新的抗原检测系统(技术)——免疫-PCR,最近由Takeshi Sano等发明。该系统以特定DNA分子作为标记物,利用链霉亲和素与蛋白A的交链物既能与生物素又能与抗体结合的双重特性,将抗原抗体复合物和生物素化DNA连接起来,形成特定的抗原抗体复合物-链霉亲和素蛋白A交链物-生物素化DNA结合物。     

定量测定DNA杂交物的灵敏方法——时间分辨荧光法

<正>核酸杂交不仅广泛用于分子生物学,而且也用于诊断医学等领域,这就需要有一种稳定、非放射性探针,到目前为止,用于杂交探针的非放射性标记物有:(1)用抗生物素或抗生蛋白链菌素检测的生物素化的核苷,(2)用于免疫学检测的半抗原以及(3)与核酸交联的蛋白质。所有这些方法,最终都要用酶催化显色来检测杂交探针分子,尽管这类非放射性标记探针可以在高浓度使用(这可以增加杂交速率),但是,其检测灵敏度和简易性都无法与放射性核酸     

抗生物素蛋白-生物素免疫荧光技术检测细胞培养中增殖的甲型肝炎病毒抗原

检测细胞培养增殖甲型肝炎病毒抗原(HAAg)的敏感方法主要有直接免疫荧光(DIF),间接免疫荧光(IDIF),固相放射免疫(RIA)及放射免疫斑分析(RIFA)等。本文第一次报告用抗生物素蛋白-生物素(Avidin-Biotin)放大作用提高免疫荧光技术的敏感性应用在细胞培养中检测HAAg,生物素化抗甲肝IgG与抗生物素蛋白联结的荧光素偶合检测(BA-FA)与DIF比较,BA-FA不仅可获得背景清晰的荧光。而且快速、节省特异抗体,BA-FA特异性亦好。     

用生物素标记的葡萄球菌蛋白A(SPA)检测日本脑炎抗体

<正>自从亲和素和生物素特异性相互反应由Guesdon(1979)引入ELISA以来,此方法已被广泛采用为一种有用的技术,以检测和定量免疫球蛋白或抗原。用生物素标记的抗猪免疫球蛋白(Ig)抗体,结合酶标记亲和素结合物的ELISA,也已成功用到作者     

以生物素为介质将大分子导入植物细胞

Purdue大学的M.A.Horn等研究出将大分子导入完整大豆细胞的新方法.他们发现,此技术的优点在于通过细胞内吞作用摄入生物素.使生物素与牛胰岛素、牛核糖核酸酶、人血红蛋白或牛血清白蛋白结合,可将大量这类分子导入培养的大豆细胞而不破坏细胞.Ho-rn等指出此方法具有如下优点:(1)它不损伤细胞,(2)可用于完整细胞,(3)可导入大量大分子,(4)技术简单,适于各种用途.     

基因工程小分子抗体研究进展

自从七十年代杂交瘤技术问世以来,人们获得了多种抗肿瘤的单克隆抗体(McAb),用单克隆抗体为载体,接上药物、毒素或放射性同位素而形成免疫交联物,用于肿瘤的导向诊断和导向治疗,一直是一个极有吸引力的前景。McAb标记上同位素用于肿瘤定位诊断的实验与临床研究取得了令人鼓舞的成绩,但导向治疗的临床研究结果却远远低于人们的期望值,主要原因有以下两方面。首先是所用的小鼠单位往往导致人抗鼠抗体反应,一次注射抗体有50％的病人产生抗抗体;其次是     

单链抗体抑制乙肝病毒的研究

单链抗体已用于抗乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)的研究,目前已研制出作用于各种靶点,如HBV表面抗原pre-S1、核心蛋白(hepatitis B virus core antigen, HBc)、DNA聚合酶及X 蛋白的多种单链抗体。单链抗体对偶联的分子具有靶向定位作用,因此,对抗原的亲和性大小、对靶细胞内化(Internalization)的强弱及其自身结构的稳定性是影响单链抗体应用的主要因素。     

鸡血清中一种可与HBsAg反应的抗体

本文采用生物素——抗生物素蛋白EIA试验证明,18.8%(24/128)的鸡和43.1%(25/58)的鸭血清中存在有人乙型肝炎病毒表面抗原的抗体。虽然该抗体在RPHA法中无中和作用,但在EIA法中可被已知的HBsAg所阻断。     

用光生物素标记大麦黄矮病毒cDNA探针

应用光生物素(Photobiotin)标记大麦黄矮病毒(BYDV)cDNA分子杂交探针,可用于检测大麦黄矮病毒。反应灵敏度至少可达1ng。在灵敏度相同的情况下,与常规应用α-~(32)p-dCTP标记的分子探针相比,具有安全、稳定、方便、经济的优点。     

多重PAP及多重PAP结合ABC免疫细胞化学方法的建立、敏感性分析与应用

作者在传统的 PAP 及 ABC 染色方法的基础上,通过重复使用桥抗及 PAP 的次数或重复使用生物素化桥抗及 PAP 和 ABC 的次数,使 PAP 与 ABC 方法成功地结合,增加连接于抗原部位的酶分子数,建立起两种敏感的免疫细胞化学方法。染色结果经显微分光光度图象分析,方差分析,回归分析及染色效果的直接观察表明,重复染色可增加阳性强度,扩大阳性染色范围,提高信噪比,从而提高方法的敏感性,以生物素化桥抗取代非生物素化桥抗,将 ABC 引入到多重 PAP 方法中,可使方法的敏感性进一步提高。该方法结合单克隆抗体及多克隆抗体成功地检测出用传统双PAP 及 ABC 难以或不能检测出的常规福尔马林固定石蜡包埋的肾综合征出血热尸检组织中的病毒抗原及石蜡包埋肿瘤活检组织中的桥粒抗原。     

乙酰胆碱抗体制成

ACh 一般储存于胆碱纯神经元的囊泡中,分子量小,缺乏抗原性,而且不稳定。要制得抗ACh 的抗体,首先必须建立起一套克服ACh 分子化学结构上的缺陷的免疫学方法。Geffard 等为了保持ACh 的结构同时赋予其抗原性,用化学方法给胆碱分子接上戊二酸酐(GA)及多肽(蛋白质),经此修饰后的胆碱-戊二酸酐-蛋白质与ACh 极相似,而且具有抗原性;继而免疫动物即可制得针对ACh 的抗体。他们又对组     

抗人CD8单链抗体基因的构建

CD8分子分布于部分T淋巴细胞和胸腺细胞。是MHC Ⅰ类抗原的配体,它与MHC Ⅰ类分子结合可以稳定CTL与带有MHC Ⅰ类分子与抗原复合物的靶细胞的结合。近年来已有不少抗CD8的单抗被用于预防及治疗骨髓移植时的移植物抗宿主反应及心、肾移植时的免疫排斥反应,但这些鼠源性单抗应用于人体时,其异源性会引起免疫排斥反应,限制了它的临床应用,因而有必要对鼠源性抗体进行人源化     

生物素-抗生物素系统免疫酶法用于乙型肝炎“e”系统检测的研究

近年来生物素-抗生物素系统(Biotin-Avidin-System)在免疫学技术中的应用,日益为国内、外学者所重视。这一技术的使用,大大提高了方法的灵敏度,为微量抗原和抗体的检测开辟了新的途径。我们在探讨这一新的技术中,运用标记抗生物素和生物素法(LAB法),检测乙型肝炎e系统,初步获得良好的效果,现报道如下:     

生物素化ATP硫酸化酶的表达、固定化与应用

现代大规模焦测序技术的产生是DNA测序技术的一次革命,其关键技术之一是得到高活性的、固定于磁性微球表面的ATP硫酸化酶．生物素化的ATP硫酸化酶可以通过生物素与亲和素之间的特异结合特性固定在包被亲和素的磁性微球表面,但是利用化学修饰法将ATP硫酸化酶进行生物素化修饰很可能会影响酶的活性．利用融合表达策略,将大肠杆菌生物素酰基载体蛋白C端87个氨基酸肽段(BCCP87)与ATP硫酸化酶在大肠杆菌内融合表达,经SDS-PAGE和Western blot分析,表达的融合蛋白分子质量约为64 ku,并且能够在大肠杆菌内被生物素化．生物素化的ATP硫酸化酶能够与亲和素包被的磁珠结合,固定后的ATP硫酸化酶具有活性,并且能够用于定量检测焦磷酸盐(PPi)和焦测序,为今后建立高通量大规模焦测序系统提供了一个有效的工具酶．     

1-甲基次黄苷抗体的制备、鉴定及其在酵母丙氨酸转移核糖核酸研究中的应用

本文制备了m~1I~*专一性抗体。经过双向琼脂扩散实验,微量免疫沉淀抑制实验,半抗原结合抑制实验及亲和层析实验证明:抗体可以特异性地与m~1I相结合。可以和含有该核苷的tRNA_y~(ala)的反密码环部位结合。这种结合并不影响tRNA_y~(ala)t与鼠肝氨酰基-RNA合成酶相互识别。似乎从较为直接的意义上说明:反密码环部位不参与tRNA_y~(ala)分子与相应的鼠肝氨酰基-tRNA合成酶的识别。文中强调了用于核酸大分子研究的核酸类物质抗体,必须去除核酸酶的污染。用固相化的m~1I抗体进行亲和层析,可能是一种纯化tRNA_y~(ala)的有用手段。     

1-甲基次黄苷抗体的制备、鉴定及其在酵母丙氨酸转移核糖核酸研究中的应用

本文制备了m~1I专一性抗体。经过双向琼脂扩散实验,微量免疫沉淀抑制实验,半抗原结合抑制实验及亲和层析实验证明:抗体可以特异性地与m~1I相结合。可以和含有该核苷的tRNA_y~(ala)的反密码环部位结合。这种结合并不影响tRNA_y~(ala)t与鼠肝氨酰基-RNA合成酶相互识别。似乎从较为直接的意义上说明:反密码环部位不参与tRNA_y~(ala)分子与相应的鼠肝氨酰基-tRNA合成酶的识别。文中强调了用于核酸大分子研究的核酸类物质抗体,必须去除核酸酶的污染。用固相化的m~1I抗体进行亲和层析,可能是一种纯化tRNA_y~(ala)的有用手段。