白血病抑制因子受体与白血病细胞U937内促分裂原活化蛋白激酶的关系

探讨人白血病细胞系U937白血病抑制因子 (LIF)受体α亚基和另一亚基gp130细胞内区与促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)的关系 ,旨在研究白血病细胞增殖和分化的机制。用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体 (190 130 ,130 190 )并分别在U937表达 ,其与野生受体竞争性结合白血病抑制因子 ,用免疫组化和免疫印迹法分析受体细胞内区形成同源性二聚体(190cyt 190cyt,130cyt 130cyt)后的细胞状况和细胞内MAPK的水平。结果表明 ,转染pE190 130后用LIF作用 6h ,U937细胞MAPK表达量增加 ,MAPK形成的二聚体较明显 ,细胞增殖较快 ;而另一嵌合体受体与α亚基形成 190cyt 190cyt时U937细胞MAPK的表达无变化 ,二聚体不明显。说明LIF受体中gp130亚基的细胞内区参与了MAPK的激活及白血病U937细胞增殖信号的传递。     

白血病抑制因子受体细胞内区对HL-60细胞表达CD14和CD15的影响

观察白血病抑制因子 (LIF)受体gp190亚基完整的细胞内区和gp190胞内区C末端片段(190CT)对人白血病系HL 6 0表达CD14、CD15的影响 ,进一步了解LIF引发白血病细胞增殖抑制和分化的关系 .用基因重组技术将LIF另一亚基gp130的细胞内区换成gp190的细胞内区 ,用PCR技术扩增gp190细胞内区C末端的一个多肽的编码序列 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190CT片段 ,并分别在HL 6 0细胞表达 .用免疫组化和流式细胞术检测分析在LIF的诱导下 ,HL 6 0细胞表达CD14、CD15的水平 .转染pcDNA130 /190的HL 6 0细胞 ,CD15表达量明显增高 ;转染pcDNA190CT的细胞 ,CD15的表达量降低 ;但 2组细胞的CD14表达量均较低且水平接近 .LIF可能诱导HL 6 0细胞向粒细胞而不向单核细胞分化 ,该效应是由gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190C末端片段可干扰LIFα受体介导的信号传导效应 .     

人可溶性gp190在酵母Pichia pastoris中的表达

人可溶性gPl90(sgp190)是白血病抑制因子(LIF)的可溶性受体,可能在LIF行使众多生物学功能中扮演着重要的角色。为获得这一蛋白以研究它在人体内的生物学活性,在酵母Pichia pastoris中实现了重组sgp190分泌表达。利用基因重组技术,将编码人可溶性gP190(LlF受体α亚基gP190胞外区)cDNA克隆到毕赤酵母Pichia pastoris分泌表达载体pPIC9K,构建了重组表达质粒pPIC9K-sgp190。原生质体法转染Pichia pastoris GS115菌株,经过G418筛选,得到了高效分泌表达sgp190蛋白的毕赤酵母菌株GS115／pPIC9K-sgp190,sgp190蛋白占摇瓶培养表达上清中总蛋白质的26％。经初步纯化,对表达产物的性质鉴定表明,其分子量约125kD,具有免疫活性。对sgp190体外活性分析表明它能够抑制LIF诱导滋养层细胞分泌hCG。     

人白血病抑制因子基因LIF的克隆、真核表达及活性检测

白血病抑制因子 (LIF)是一种多功能细胞因子 ,在生物发育及维持正常生理功能中发挥着重要的作用。以成人血细胞的总RNA为模板 ,利用RT PCR方法从成人外周血细胞中扩增人白血病抑制因子 ,而后将其克隆到真核表达载体pcDNA3,在哺乳动物细胞中成功表达。将分泌到细胞培养基中的LIF因子收集 ,通过LIF信号转导通路下游蛋白质STAT3磷酸化水平的检测、EMSA实验以及荧光酶报告系统检测 ,发现其具有激活STAT3信号通路的生物学活性。同时 ,[3H] TdR参入实验的结果也表明 ,所表达LIF因子能显著抑制鼠骨髓白血病细胞系M1的增殖。     

白血病抑制因子与胚胎干细胞

白血病抑制因子对细胞的生长和分化有多种作用,通过与其受体结合传导信号,gp130与LIF受体β链的结合激活JAK激酶(JAK1和JAK2),JAK激酶磷酸化STAT信号转录子,STAT3的磷酸化对于阻止体外培养的干细胞的分化具有十分重要的作用。     

白血病抑制因子促进胚泡植入的研究进展

白血病抑制因子是一多效性细胞因子,能促进哺乳动物的早期胚胎发育和启动胚泡植入,其基因表达和生物合成受母体因素(如甾体激素和其他细胞因子)的控制.gp130是白血病抑制因子家族受体的亲和力转化亚基,其同源/异源亚基的二聚体能够激活酪氨酸激酶,通过不同途径调节靶基因的表达.     

白血病抑制因子 LIF 第 29 位氨基酸 突变导致其功能完全丧失

白血病抑制因子 (LIF) 为一种多功能细胞因子,在生物发育及维持正常生理功能中发挥着重要的作用. LIF 在所有的哺乳动物中都具有高度的保守性,某些氨基酸在不同物种中保持不变. LIF 中 29 位氨基酸在所有的哺乳动物中都是Q. 为了研究 Q 对 LIF 功能的重要性,利用随机 PCR 的方法将 29 位氨基酸突变为 R,并将突变后的 LIF 克隆到真核表达载体 pcDNA6 ,在哺乳动物细胞中成功表达. 同时以克隆到的野生型 LIF 作为对照. 将分泌到细胞培养基中的野生型和突变 LIF 因子收集,通过 EMSA 实验以及荧光素酶报告系统检测,发现野生型 LIF 因子具有激活 STAT3 信号通路的生物学活性. 同时, ³H-TdR 掺入实验结果表明,野生型 LIF 因子能显著抑制鼠骨髓白血病细胞系 M1 的增殖. 而 29 位氨基酸突变的 LIF 因子则完全丧失了以上功能,但所发现的突变没有显性负的作用. 结果充分说明, LIF 中高度保守的 29 位氨基酸对 LIF 功能的维持具有重要的作用.     

白血病抑制因子受体与血病细胞U937内促分裂原活化蛋白激 …

探讨人白血病细胞系Ｕ９３７白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体α亚基和另一亚基ｇｐ１３０细胞内区与促分裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）的关系,旨在研究白血病细胞增殖和分化的机制。用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体（１９０／１３０,１３０／１９０）并分别在Ｕ９３７表达,其与野生受体竞争性结合白血病抑制因子,用免疫组化和免疫印迹法分析受体细胞内区形成同源性二聚体（１９０ｃｙｔ－１９０ｃｙｔ,１３     

小鼠子宫内膜LIF基因表达与雌、孕激素的关系

白血病抑制因子（LIF）是一种多功能活性的糖蛋白,LIF基因在大多数妊娠第4天的小鼠子宫内膜进行着强烈的表达,然而LIF基因表达调控的机制目前尚不清楚。本实验对168只妊娠第4~5天的小鼠LIF基因表达和血清中雌、孕激素水平分别进行了检测,发现18只小鼠无LIF基因表达,其血清中雌、孕激素水平分别极显著（P＜0.01）和显著（0.01＜P＜0.05）低于其他表达的小鼠。提示：雌、孕激素对小鼠LIF基因表达过程中起着一定的作用,将为LIF基因表达调控机制的深入研究打下基础。     

白血病抑制因子

白血病抑制因子(leukemia inhibitory fa-ctor,LIF)是一类具有广泛生物学功能的细胞因子。60年代末,人们发现一种能诱导M1白血病细胞系分化为正常细胞的分化诱导因子,被称为D-因子。但由于当时研究条件限制,未能对这种因子的生理和生化特性有更多的了解。1984年,Tomida等人从小鼠成纤维细胞株L 929细胞和小鼠Ehrlich腹水瘤细胞条件培养液中分别提取出能诱导M1细胞分化的D-因子。1988年,Hilton等人从小     

小鼠早期胚胎发育期间LIF基因表达的研究(简报)

白血病抑制因子(Leukemia inhibitory fac-tor,LIF)是近年来研究较为广泛的细胞生长调节因子之一。最初发现LIF能够在体外诱导小鼠髓样白血病细胞株M1细胞向正常细胞分化,进一步分离纯化蛋白以及克隆基因后发现LIF在体外还具有多种功能,作用于不同的靶细胞时引起的生理效应也各不相同。目前已知的功能有:刺激肝脏细胞急性期反应蛋白的     

小鼠白血病病毒致白血病机制的研究进展

小鼠白血病病毒分为两类;（１）急性转化ＭｕＬＶ：Ａｂｅｌｓｏｎ,ＭｕＬＶ 其代表,基因组含有ｖ－ａｂｌ癌基因,编码产生Ｐ１２０＾ｇａｇ－ａｂｌ磷蛋白,诱发小林巴细胞白血病,（２）慢性转化ＭｕＬＶ：极大多数ＭｕＬＶ均属于此类。基因组不携有ｖ－ｏｎｃ癌基因为其特点,Ｍｏｌｏｎｅｙ－ＭｕＬＶ（Ｍ－ＭｕＬＶ）是研究这类ＭｕＬＶ致瘤机制的良好模型。白血病生成中包括原癌基因激活、ＭＣＦ重组体形成、１５号染色体     

白血病抑制因子与哺乳动物的胚胎着床(英文)

胚胎着床是处于活化状态的胚泡与处于接受态的子宫相互作用,最后导致胚胎滋养层与子宫内膜建立紧密联系的过程。已证实白血病抑制因子(LIF)在哺乳动物胚胎着床过程中起着十分重要的调节作用。LIF通过其受体及信号传递亚单位gp130发挥其生物学功能。LIF对胚胎发育到胚泡阶段及以后内细胞团和滋养层细胞的生长和分化有明显的促进作用。 在小鼠中,LIF及其受体和gp130在着床期小鼠子宫内表达量最高,因此LIF可能在小鼠胚胎着床过程中起重要作用。在人中,LIF在子宫内膜中的表达与人胚胎着床的时间一致,提示LIF可能与人的胚胎着床紧密相关。此外,LIF在猪、羊、水貂、兔和臭鼬等动物胚泡着床前和着床期的子宫中也都有表达,并在着床期出现峰值。因此,LIF也可能在这些动物的胚胎发育和着床过程中有重要作用。LIF受体基因敲除小鼠表现为胎盘发育不全,这说明LIF对小鼠胎盘形成和胎盘的功能维持起重要作用。 小鼠子宫中LIF的表达可能受雌激素而上调。美洲长尾猴(绒)及兔子宫中LIF的表达则呈孕酮依赖性。然而孕酮可抑制人着床期子宫内膜腺上皮和蜕膜组织内LIF的表达。在不同种类的动物中,LIF在子宫中的表达有不同的调节机制。 胚泡在LIF基因敲除的雌鼠子宫内不能着床的原因并不是由于胚泡发育异常,而是由于雌鼠不能表     

人类T细胞白血病病毒I型pX基因反式调节和致白血病机理的研究进展

人类Ｔ细胞白血病病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）是成人Ｔ细胞白血病（ＡＴＬ）的病因。ＨＴＬＶ－Ｉ基因组中的ｐＸ基因区域编码ｐ４０＾ｔａｘ和ｐ２７＾ｒｅｘ蛋白,前者可反式激活病毒的ＬＴＲ和ＩＬ－２Ｒ及ｃ－ｆｏｓ、ＴＧＦβ１等细胞基因,加强转录过程,在白血病发生中发挥重要作用。ｐ２７＾ｒｅｘ蛋白则在转录后水平进行反馈性调节。白血病的发生机理是多因子参加的多步骤过程。     

Cdk6在维持ES细胞自我更新中的作用

细胞周期蛋白依赖性激酶6（cyclin dependent kinase 6,Cdk6）对胚胎早期发育有着重要的作用.然而,它在胚胎干（embryonic stem,ES）细胞中的生物学功能仍不清楚.在该研究中,我们运用RNA干扰技术和基因表达分析方法探索了Cdk6在小鼠胚胎干细胞中的功能及分子机制.结果表明：Cdk6的表达水平与小鼠ES细胞的自我更新密切相关.首先,维甲酸（RA）处理和白血病抑制因子（LIF）去除实验显示 ,随着ES细胞的分化,Cdk6的表达水平明显降低.更为重要的是,RNA干扰介导的Cdk6表达抑制导致ES细胞自我更新相关基因的显著下调,同时伴随细胞分化基因的表达激活,提示Cdk6对维持ES细胞自我更新至关重要.     

白血病抑制因子mRNA的表达受雌激素的调控

运用RT—PCR方法检测了体外培养的大鼠成骨样细胞Ros17／2．8在17β雌二醇(E2)刺激前后细胞中一些细胞因子的mRNA水平．发现在E2刺激后,细胞中白血病抑制因子（LIF）的MRNA水平明显上升,且呈现E2浓度依赖的特点．该结果提示,LIF可能参与替代性治疗过程中雌二醇对于骨质疏松症的缓解作用．这为进一步研究细胞因子与骨质疏松症的相关性,阐明细胞因子在骨代谢中的作用打下了基础,并将有利于发展治疗骨代谢疾病的药物．     

白血病抑制因子受体与细胞内信号分子

白血病抑制因子（ＬＩＦ）与细胞膜上的ＬＩＦ受体β亚基结合并使之与ｇｐ１３０形成异源性二聚化后,ＬＩＦ受体β亚基细胞内区的３个Ｔｙｒ和ｇｐ１３０的４个Ｔｙｒ（均呈（ＹＸＸＱ结构）分别激活ＪＡＫ酶,ＭＡＰＫ,Ｆｅｓ,Ｂｔｋ,Ｔｅｃ激酶,ＰＴＰ１Ｄ和ＳＴＡＴＳ等,Ｃ－ｍｙｃ,Ｃ－ｍｙｂ的转录活性下降,以及ＪｕｎＢ,ＩＲＦ１和Ｓｔａｔ３的转录活性上升促进细胞分化,抑制细胞增殖,从而维持垂体功能,促进神经肌     

人类嗜T细胞白血病Ⅰ型病毒TAX蛋白对NF—kB转录因子的作用

人类嗜Ｔ细胞白血病Ⅰ型病毒（ＨＴＬＶ－Ⅰ）是成人Ｔ细胞白血病（ＡＴＬ）的致病因子,其编码的ＴＡＸ蛋白的反式激活在白血病形成中有重要作用。ＮＦ－ｋＢ是细胞活化和产生细胞因子的重要转录调控因子。正常情况下,ＮＦ－ｋＢ因子与抑制性蛋白ＩＫＢ结合,形成复合物存在于胞质中。ＴＡＸ蛋白可与ＩＫＢ激酶γ（ＩＫＫγ）直接结合,而后启动ＴＡＸ对ＩＫＫα和ＩＫＫβ的结合,并使之发生磷酸化。后者使ＩＫＢ蛋白降解,ＮＦ－     

J亚群禽白血病病毒跨膜蛋白gp37基因克隆与表达

禽白血病病毒(ALV)跨膜蛋白(TM)在病毒-细胞融合过程中起关键作用,其蛋白内部存在的许多高度保守序列有可能成为抗病毒的重要靶点。对TM结构和功能的深入研究将为抗禽白血病病毒乃至其它反转录病毒相关制剂的研制提供科学的理论基础。本研究通过PCR从本实验室分离的ALV-J山东汶上毒株获得表达TM的gp37基因,克隆连接pMD18-T载体并测序,从已构建的质粒pMD18-T-gp37中酶切回收gp37基因,构建重组转移载体pFastBacHTb-gp37。利用昆虫杆状病毒表达系统对gp37基因进行表达,通过间接免疫荧光和Western blot检测gp37基因表达产物,间接免疫荧光显示,重组杆状病毒感染的sf9细胞呈现明显的强阳性反应;Western blot分析,重组病毒感染的sf9细胞蛋白显示出约21kD的阳性条带。结果表明,gp37基因在sf9细胞内表达成功。     

C／EBPβ作为LIF的中介维持小鼠胚干细胞于未分化状态

C／EBPβ（CCAAT／增强子结合蛋白β,又称NF—IL6）是一个多功能的转录因子,其主要功能之一是促进细胞分化。白血病抑制因子（LIF）是一个细胞因子．其在不同类型的细胞中具有不同的效应：它诱导前脂肪细胞分化,却抑制小鼠胚多能干细胞（mES）的分化。在mES中,C／EBPβ究竟起什么作用．尚未有报道。本文首次报告在mES中。在LIF蛋白存在下,C／EBPβ的作用是维持mES的未分化状态．即C／EBPβ是LIF的调控对象。主要事实如下。在mES细胞中．内源C／EBPβ蛋白的表达量与加到培养基中的LIF蛋白的量呈正相关。而在未分化的mES细胞中人工高表达的外源C／EBPβ蛋白和其截短形式LIP蛋白。在LIF存在下．也不但不促进反而抑制mES细胞分化,C／EBPβ的大分子异型蛋白还显著促进mES细胞的增殖：而且,在LIF去除后,这种促进mES细胞增殖的效应还能持续一段短时间。当LIF不存在时。C／EBPβ和LIP才如所预期的那样．诱导分化相关基因表达并促进细胞分化。C／EBPβ和LIP所调控的某些分化相关的基因的表达水平．当LIF存在时．也比没有LIF时显著降低。因此,在mES细胞中C／EBPβ是受LIF的调控而作为LIF的中介．维持mES于未分化状态。