J亚群禽白血病病毒跨膜蛋白gp37基因克隆与表达

禽白血病病毒(ALV)跨膜蛋白(TM)在病毒-细胞融合过程中起关键作用,其蛋白内部存在的许多高度保守序列有可能成为抗病毒的重要靶点。对TM结构和功能的深入研究将为抗禽白血病病毒乃至其它反转录病毒相关制剂的研制提供科学的理论基础。本研究通过PCR从本实验室分离的ALV-J山东汶上毒株获得表达TM的gp37基因,克隆连接pMD18-T载体并测序,从已构建的质粒pMD18-T-gp37中酶切回收gp37基因,构建重组转移载体pFastBacHTb-gp37。利用昆虫杆状病毒表达系统对gp37基因进行表达,通过间接免疫荧光和Western blot检测gp37基因表达产物,间接免疫荧光显示,重组杆状病毒感染的sf9细胞呈现明显的强阳性反应;Western blot分析,重组病毒感染的sf9细胞蛋白显示出约21kD的阳性条带。结果表明,gp37基因在sf9细胞内表达成功。     

禽白血病病毒J亚群自然感染蛋鸡病毒负载、受体表达及致瘤谱关系

J亚群禽白血病病毒(Subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)通过与宿主细胞膜上的受体chNHE1蛋白结合感染细胞并引起宿主发病,进而引起肿瘤。本研究对确诊为ALV-J感染的肿瘤携带鸡进行病理组织学观察和病毒分离,应用荧光定量PCR技术检测ALV-J自然感染蛋鸡体内ALV-J负载量与其受体chNHE1蛋白mRNA表达量,分析ALV-J负载量、受体表达量及致瘤谱之间的相关性。结果显示:ALV-J在蛋鸡及地方品种鸡体内所诱发的肿瘤呈现多样化,但是病毒负载量与肿瘤谱相关性不明显;ALV-J负载量与chNHE1蛋白mRNA表达量呈正相关;组织在发生肿瘤时chNHE1蛋白mRNA表达量升高,可见,chNHE1蛋白不仅是ALV-J感染宿主细胞的受体,而且在肿瘤形成过程中也发挥重要作用。本研究为ALV-J致瘤机制的深入研究提供了科学基础。