栽培稻—药用野生稻杂种F1及回交后代的基因组原位杂交鉴定

以ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的药用野生稻总ＤＮＡ作探针,未标记的栽培稻总ＤＮＡ封阻,地栽培稻－药用野姓稻Ｆ１及回交皇代材料根尖体细胞染色体制片进行基因组原位杂交,鉴定出３个双单体异源附加系和４个单体异附加系。当标记探针用ａｎｔｉ－ｃｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ＰＯＤ和ＤＡＢ检测时,药用生稻染色体显棕色,栽培稻染色体则因Ｇｉｅｍｓａ.地染而显浅蓝色;标记探针用ａｎｔｉ－ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ＦＩＴＣ检     

基因组原位杂交鉴定栽培稻与广西药用野生稻杂交后代染色体构成

广西药用野生稻 (Oryza officinalis)具有多种优良特性 ,是水稻遗传育种的重要种质资源之一。本实验以 Biotin标记的药用野生稻总 DNA作探针 ,未标记的栽培稻 (Oryzasativa)总 DNA作封阻 ,以 HRP- DAB系统进行信号检测 ,对栽培稻与广西药用野生稻的杂种F1植株的根尖染色体制片进行基因组原位杂交。采用封阻比例 1∶ 2 0～ 30时 ,杂交效果较为理想 ,药用野生稻的 1 2条染色体显深棕色 ,而栽培稻的 1 2条染色体着色很浅。在有丝分裂间期的细胞核中 ,也检测到大量杂交信号分布于核的周边。     

栽培稻与疣粒野生稻杂种F1代的基因组原位杂交鉴定

生物素标记的疣粒野生稻总DNA作探针,未标记的栽培稻总DNA封阻,对栽培稻与疣粒野生稻杂种F1体细胞染色体进行基因组原位杂交（Genomic in situ hybridization,简称GISH）分析。FITC检测表明,杂种细胞中来自瘛发粒野生稻的染色体有较多的黄色或黄绿色荧光信号,来自栽培稻的染色体只检出很少的信号。每条疣粒野生稻染色体上信号点所占的总的区域只是染色体的一小部分,表明疣粒野生稻染色体与栽培稻染色体的DNA序列大部分是同源的。     

Bph3在栽培稻和药用野生稻中的BAC-FISH比较物理定位(英)

用栽培稻 (OryzasativaL .)遗传图第四连锁群中与抗褐稻虱基因Bph3紧密连锁的RFLP标记RZ6 9及筛选出来的BAC克隆 38J9作探针 ,对药用野生稻 (O .officinalisWellexWatt)和栽培稻荧光原位杂交 ,供试标记RZ6 9及38J9均被定位于药用野生稻和栽培稻第 4染色体的短臂上 ,药用野生稻杂交信号的百分距分别为 2 2 .12± 3.4 4和2 0 .0 0± 5 .4 0 ,而栽培稻均为 0。在栽培稻中 ,信号检出率相应地为 6 .2 9%和 5 6 .10 % ,在药用野生稻中则为 6 .14 %和 5 0 .0 0 %。BAC克隆和RFLP标记探针杂交信号的百分距十分接近 ,说明在栽培稻和野生稻中RFLP标记RZ6 9都在同一BAC克隆的大插入片段中。由此推知 ,药用野生稻与抗性基因Bph3的同源顺序就在第 4染色体信号出现的相应位置。在未封阻的情况下 ,药用野生稻的BAC杂交在多条染色体上具有信号 ,这表明它和栽培稻的Cot_1DNA重复顺序也在一定程度上具有同源性。药用野生稻第 4染色体是根据栽培稻与药用野生稻的比较遗传图选用与Gm_6连锁的RG2 14通过FISH确定的。讨论了栽培稻BAC克隆对药用野生稻比较原位杂交物理作图的可行性问题。     

Bph3在栽培稻和药用野生稻中的BAC-FISH比较物理定位

用栽培稻(Oryza sativa L.)遗传图第四连锁群中与抗褐稻虱基因Bph3紧密连锁的RFLP标记RZ69及筛选出来的BAC克隆38J9作探针,对药用野生稻(O.officinalis Well ex Watt)和栽培稻荧光原位杂交,供试标记RZ69及38J9均被定位于药用野生稻和栽培稻第4染色体的短臂上,药用野生稻杂交信号的百分距分别为22.12±3.44和20.00±5.40,而栽培稻均为0.在栽培稻中,信号检出率相应地为6.29%和56.10%,在药用野生稻中则为6.14%和50.00%.BAC克隆和RFLP标记探针杂交信号的百分距十分接近,说明在栽培稻和野生稻中RFLP标记RZ69都在同一BAC克隆的大插入片段中.由此推知,药用野生稻与抗性基因Bph3的同源顺序就在第4染色体信号出现的相应位置.在未封阻的情况下,药用野生稻的BAC杂交在多条染色体上具有信号,这表明它和栽培稻的Cot-1 DNA重复顺序也在一定程度上具有同源性.药用野生稻第4染色体是根据栽培稻与药用野生稻的比较遗传图选用与Gm-6连锁的RG214通过FISH确定的.讨论了栽培稻BAC克隆对药用野生稻比较原位杂交物理作图的可行性问题.     

微卫星DNA和AFLP标记在水稻分子标记连锁图上的分布

以一个栽培稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）和野生稻（Ｏ．ｒｕｆｉｐｏｇｏｎＧｒｉｆ）杂交的Ｆ２作图群体以及由该群体构建的ＲＦＬＰ标记连锁图,分析了微卫星ＤＮＡ和ＡＦＬＰ标记的多态性、遗传行为及其在染色体上的分布。共定位了２８个微卫星ＤＮＡ标记和１７２个ＡＦＬＰ标记。２８个微卫星ＤＮＡ标记中有６个为华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室根据数据库中序列而设计,其余２２个来自美国Ｃｏｒｎｅｌ大学已发表的结果。１７２个ＡＦＬＰ标记出自２５对引物扩增得到的２２８个多态性带的片段。这些标记分布于水稻的１２条染色体。将此２００个ＰＣＲ标记与华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室构建的ＲＦＬＰ连锁图整合,得到一张含６１２个分子标记位点的遗传连锁图。     

RTSV和Glh在药用野生稻中的物理定位

药用野生稻具有多种抗病虫性,是水稻品种改良重要的种质资源之一。本研究采用与栽培稻遗传图第4连锁群中与RTSV和Glh紧密连锁的RFLP标记RZ262及其筛选出来的BAC克隆作探针,对药用野生稻进行荧光原位杂交,供试探针均被定位于药用野生稻第4染色体短臂的中部,百分距分别为74.86±3.72和73.98±4.44,信号检出率为7.6%和45.1%。BAC克隆和RFLP标记探针杂交位置几乎一致,说明在栽培稻和野生稻中RFLP标记RZ262都存在同一BAC克隆的大插入片段中,药用野生稻与抗性基因RTSV和Glh的同源顺序就在第4染色体信号出现的相应位置,从而为作物育种开发和利用野生资源的抗性基因提供了理论依据。     

RTSV和Glh在药用野生稻中的物理定位

药用野生稻具有多种抗病虫性,是水稻品种改良重要的种质资源之一.本研究采用与栽培稻遗传图第4连锁群中与RTSV和Glh紧密连锁的RFLP标记RZ262及其筛选出来的BAC克隆作探针,对药用野生稻进行荧光原位杂交,供试探针均被定位于药用野生稻第4染色体短臂的中部,百分距分别为74.86±3.72和73.98±4.44,信号检出率为7.6%和45.1%.BAC克隆和RFLP标记探针杂交位置几乎一致,说明在栽培稻和野生稻中RFLP标记RZ262都存在同一BAC克隆的大插入片段中,药用野生稻与抗性基因RTSV和Glh的同源顺序就在第4染色体信号出现的相应位置,从而为作物育种开发和利用野生资源的抗性基因提供了理论依据.     

应用基因组原位杂交及RFLP标记鉴定小麦中的的大麦染色体

用生物素（Ｂｉｏｔｉｎ－１６－ｄＵＴＰ）标记的大麦Ｂｅｔｚｅｓ基因组ＤＮＡ作探针,以普通小麦中国春总ＤＮＡ作封阻进行基因组原位杂交（Ｇｅｎｏｍｅ ｉｎ ｓｉｒｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,简称ＧＩＳＨ）,从１３株小麦－大麦杂交后代中鉴定出２个含有３条大麦Ｂｅｔｚｅｓ２Ｈ染色体的材料（２ｎ＝４３）;２个２Ｈ单体异代换系（２ｎ＝４２）;７个２Ｈ二体异代换系（２ｎ＝４２）。用已定位有小麦第２部分同源群     

双探针原位杂交揭示稻属BB,CC和EE基因组之间的分化

利用双探针原位要交技术,揭示了稻属Ｏｒｙｚａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ复合体中ＢＢ、ＣＣ和ＥＥ基因组之间的分化。以标记的ＢＢ基因组（来自二倍体的Ｏ．ｐｕｎｃｔａｔａＫｏｔｅｃｈｙ ｅｘ Ｓｔｅｕｄ．）的总ＤＮＡ为探针,同ＢＢＣＣ基因组（Ｏ．ｍｉｎｕｔａＪ．Ｓ．Ｐｒｅｓｌ．ｅｔ．Ｃ．Ｂ．Ｐｒｅｓｅｌ）的中期染色体杂交,结果表明,ＢＢ基因组的ＤＮＡ探针同与四倍体Ｏ．ｍｉｎｕｔａ中的ＢＢ基因组的染色体之间     

高秆野生稻与栽培稻杂交后代的RFLP分析

应用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析了高秆野生稻（Ｏｒｙｚａ ａｌｔａ Ｓｗ ａｌｌｅｎ）与栽培稻（Ｏ．ｓａｔｉｖａ Ｌ．）之间的多态性差异,以及二者杂交后通过胚挽救获得的后代植株的染色体大致组成情况。结果表明,高杆野生稻基因组与栽培稻基因组差别极大,经胚挽救获得的杂种后代植株大部分为三倍体,不育;两个部分不育的植株中发生了染色体丢失,基因组趋向栽培稻的基因组。结果还表明,在野生稻与栽培稻杂交获得后代的过程中,可能存在一种非传统的遗传重组机制导致野生稻染色体片段向栽培稻基因组的“渗入”     

药用野生稻对褐飞虱抗性基因的遗传分析及利用研究

从198份广西药用野生稻中筛选出3份对褐飞虱高抗（0级）的材料,用高抗材料与感虫材料杂交,结果表明其抗性是受一对显性基因控制;与14个已知抗褐飞虱基因品种杂交、回交和自交,对BC2F2后代材料进行了抗性遗传分析,等位性测定结果表明,抗源材料与已知的14个抗性基因不等位,结果发现广西药用野生稻与国外药用野生稻的抗性基因（隐性基因）不同。初步认为它是一个新的抗性基因。在利用方面,通过幼胚离体培养获得绿苗,经多代回交和自交,成功地将CC染色体组中的抗性基因转育到栽培稻中,获得了BC4F5高世代、异源附加系。     

麦类作物原位杂交影响因素的研究

为了更好地利用原位杂交技术进行麦类作物外源染色体的检测和基因定位,对麦类作物原位杂交的影响因素进行了研究。（１）利用缺口转译法对克隆的ＤＮＡ 片段进行生物素标记,即节省时间,又可以获得较高的标记效率;对麦类作物的基因组ＤＮＡ,宜采用随机寡核苷酸引物标记法进行生物素标记,适当延长标记时间可以提高标记效率。（２）共变性法比较适宜麦类作物的原位杂交,分别变性法如掌握不当易使染色体产生膨胀现象,变性温度过高也会使黑麦（Ｓｅｃａｌｅ ｃｅｒｅａｌ）染色体的轮廓模糊不清。（３）应根据麦类作物亲本之间的亲缘关系决定封阻ＤＮＡ 的使用浓度,并利用生物素标记的簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａ ｖｉｌｌｏｓａ）基因组ＤＮＡ 为探针,从普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ ）－簇毛麦双二倍体的染色体中识别了簇毛麦的染色体。（４）麦类作物的原位杂交受洗脱强度的影响很大,利用甲酰胺进行洗脱可以获得背景清晰的原位杂交带型。随着原位杂交技术分辨率的不断提高,该技术还将用于单拷贝基因的染色体定位     

一个嵌合型药用野生稻7号染色体单体附加系及其回交后代的分析

对一个药用野生稻(Oryza officinalis Wall ex Watt,基因组型CC)异源单体附加系(monosomic alien addition line,MAAL)及其回交后代进行了分析,应用分子标记技术确定了该异源单体附加系所附加的染色体是一条嵌合的7号染色体,药用野生稻贡献了其长臂部分,而短臂和着丝粒则来源于栽培稻。将该植株与栽培稻亲本回交,得到109株回交后代,考察了回交群体的主要农艺性状并进行了分子标记分析,发现野生稻染色体片段的渗入影响了回交后代的株高、千粒重、结实率、结实密度、叶宽等农艺性状,而且这些性状之间正相关度很大。     

一个AA基因组特异的串联重复序列的克隆及其在中国普通野生稻和栽培稻中的分化特征

从籼稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐｐ．ｉｎｄｉｃａ）“窄叶青”中克隆到了１个重复序列（ｐＯｓ１３９）。经分子杂交证明,ｐＯｓ１３９为一稻属内ＡＡ基因组特异的串联重复序列。序列分析表明,ｐＯｓ１３９以３５５ｂｐ为一重复单位。以ｐＯｓ１３９为探针对２９份中国普通野生稻和４３份中国栽培稻的基因组ＤＮＡ进行的分子杂交表明,籼、粳亚种之间具有明显的差异,籼稻杂交带数明显多于粳稻,普通野生稻与籼稻相似,具有较多的杂交带数。拷贝数测定结果表明,ｐＯｓ１３９在普通野生稻和籼稻中丰度均较高,在粳稻中丰度较低。结合ｐＯｓ１３９的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果和以前的ＲＡＰＤ结果,认为籼稻和粳稻共同起源于普通野生稻。     

应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10—A中的黑麦染 …

利用ＡＰＡＧＥ,荧光原位杂交技术和ＲＦＬＰ标记,对导入黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）多小穗等性状创制的小麦新种质１０－Ａ进行了分子标记检测,ＡＰＡＧＥ分析发现,１０－Ａ与其他１ＲＳ／１ＢＬ易位系一样,含有１ＲＳ的醇溶蛋白标记位点Ｇｌｄ１Ｂ３。以黑麦基因组总ＤＮＡ作探针,用中国春（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｕｍｃｖ．ＣｈｉｎｅｓｅＳｐｒｉｎｇ）基因组ＤＮＡ作封阻,与１０－Ａ根尖细胞有丝分裂染     

普通野生稻和亚洲栽培稻线粒体DNA的RFLP分析

通过７个探针、１７种内切酶探针组合对１１８份普通野生稻和７６份亚洲栽培稻的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）ＲＦＬＰ分析表明,籼粳分化是亚洲栽培稻线粒体基因组分化的主流,７６个栽培稻中,３６个品种ｍｔＤＮＡ为籼型,４０个品种ｍｔＤＮＡ为粳型。普通野生稻ｍｔＤＮＡ以籼型为主（８６份）,粳型较少（７份）,１份类型难以确定,还有２４份没有籼粳分化。     

普通野生稻和亚洲栽培稻线粒体DNA的RFPL分析

通过７个探针、１７种内切酶探针组合对１１８份普通野生稻和７６份亚洲栽培稻的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）ＲＦＬＰ分析表明,籼粳分化是亚洲栽培稻线粒体基因组分的主流,７６个栽培稻中,３６个品种ｍｔＤＮＡ为籼型,４０个品种ｍｔＤＮＡ为粳型。普通野生稻ｍｔＤＮＡ以籼型为主（８６份）,粳型较少（７份）,１份类型难以确定,还有２４份没有籼粳分化。     

一个AA基因组特异的串联重复序列的克隆及其在中国普通野生稻和栽？…

从籼稻“窄叶青”中克隆到了１个重复序列（ｐＯｓ１３９）。经分子杂交证明,ｐＯｓ１３９为一稻属内ＡＡ基因组特异的串联重复序列。序列分析表明,ｐＯｓ１３９以３５５ｂｐ为一重复单位。以ｐＯｓ１３９为探针对２９份中国普通野生稻和４３份中国栽培稻的基因组ＤＮＡ进行的分子杂交表现,籼、粳亚种之间具有明显的差异,籼稻杂交带数明显多于粳稻,普通野生稻与籼稻相似,具有较多的杂交带数。拷贝数测定结果表明,ｐＯｓ１３９     

野生稻对褐稻虱和白背飞虱的抗性鉴定

采用国际水稻所制定的《水稻系统评价标准》,对广西1400多份野生稻种质资源进行了对褐稻虱和白背飞虱的抗性筛选鉴定,明确了广西野生稻资源中的药用野生稻绝大多数对褐稻虱和白背飞虱具有强的抗性,而普通野生稻则多为感虫。