血管紧张素Ⅱ增加新生鼠脑细胞胞浆Ca~(2+)浓度

本文应用荧光钙测定技术观察了血管紧张素Ⅱ(AⅡ)对新生Wistar鼠脑细胞胞浆Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i)的影响。结果表明:血管紧张素Ⅱ在1nmol/L—1μmol/L浓度下可诱导新生鼠脑细胞[Ca~(2+)]_i增加,具量效关系。在无外Ca~(2+)存在对,其增加幅度有所减少。上述效应可被血管紧张素Ⅱ拮抗剂Saralasin所阻断,并呈剂量依赖关系。上述结果提示,血管紧张素Ⅱ可激活血管紧张素AⅡ受体,增加脑细胞[Ca~(2+)]_i,该效应通过细胞内Ca~(2+)释放和细胞外Ca~(2+)内流两条适径实现,前者的作用是主要的。     

依他尼酸抑制小鼠气管平滑肌收缩

本研究旨在探讨依他尼酸(ethacrynic acid, EA)抑制气管平滑肌(airway smooth muscle, ASM)收缩的作用及其机制。利用BL-420S系统测量小鼠气管环张力,用全细胞膜片钳技术记录ASM细胞通道电流,用钙成像系统测量ASM细胞内Ca~(2+)浓度。结果显示,EA剂量依赖性地抑制高-K~+(80 mmol/L)和乙酰胆碱(acetylcholine, ACh, 100μmol/L)引起的小鼠气管环收缩,最大舒张百分比分别为(97.02±1.56)%和(85.21±0.03)%,半数有效浓度(median effective concentration, EC50)分别为(40.28±2.20)μmol/L和(56.22±7.62)μmol/L。EA分别降低高-K~+和ACh诱导的细胞内Ca~(2+)浓度,分别从0.40±0.04降到0.16±0.01,0.50±0.01降到0.39±0.01。此外,EA抑制ASM细胞L-型电压依赖钙通道(L-type voltage-dependent calcium channel,LVDCC)和钙库操纵的钙离子通道(store-operated calcium channel, SOCC)电流,以及高-K~+和ACh引起的外Ca~(2+)内流。同时,EA可以降低小鼠呼吸系统阻力(resistance of the respiratory system, Rrs)。以上结果提示,EA通过抑制小鼠ASM细胞LVDCC和SOCC,抑制Ca~(2+)的内流,降低细胞内Ca~(2+)浓度,导致ASM舒张,提示EA是一种潜在的支气管扩张剂。     

L-型钙通道自身调控异常参与缺血再灌注心肌钙超载的形成

钙超载作为心肌缺血再灌注损伤的重要机制之一,其形成原因与治疗策略一直是研究的热点。心肌遭受缺血再灌注后,参与细胞内钙循环的L-型电压依赖钙通道(L-type voltage-dependent calcium channel,L-VDCC)、肌浆网钙ATP酶2a(sarco/endoplasmic reticulum ATPase 2a,SERCA2a)和受磷蛋白(phospholamban,PLB)、Ryanodine受体2(RyR2)、Na~+/Ca~(2+)交换体、Na~+/H~+交换体等多种蛋白功能异常,导致舒张期[Ca~(2+)]_i上升,钙瞬变幅度降低,细胞出现钙超载。[Ca~(2+)]_i升高的过程大致可分为两个阶段:早期的[Ca~(2+)]_i升高过程(部分由钙通道介导)和晚期的[Ca~(2+)]_i升高过程(主要由Na~+/Ca~(2+)交换体介导)。L-VDCC活性增加参与钙超载的形成,但是L-VDCC蛋白在缺血再灌注过程中的分子变化机制尚不清楚。L-VDCC通道调控方式包括两类:自身调节和外源性调节,其中外源性调节蛋白PKG和PKA的调控不能解释细胞水平的L-VDCC活性增加现象,而在缺血再灌注过程中,钙依赖的失活(calcium-dependent inactivation,CDI)效应减弱、钙依赖的易化(calcium-dependent facilitation,CDF)效应增强、羧基远端部分肽链(distal carboxy terminus,DCT)的抑制效应减弱,这三种自身调节机制的改变引起L-VDCC活性的增加。因此,可以认为L-VDCC通道自身调控异常参与缺血再灌注损伤中心肌细胞钙超载的形成。     

他汀对EPCs增殖力影响的PI3和ERK信号通道机制研究

目的:观察他汀对冠心病患者内皮祖细胞(EPCs)增殖力的影响及与PI3/Akt和ERK信号通道的相关性.方法:冠心病和非冠心病患者各16例纳入实验,非冠心病患者的10mL外周血来源的单个核细胞纳入正常组,冠心病患者的40mL外周血来源的单个核细胞均分纳入10μmol/L阿托伐他汀组、10 μmol/L阿托伐他汀+PI3/Akt通道阻滞剂LY294002组和10μmol/L阿托伐他汀+ ERK信号通道阻滞剂PD98059组,均向EPCs方向分化,以VEGFR2、CD34和AC133流式鉴定;观察冠心病患者EPCs增殖力的变化及他汀的影响,观察LY294002和PD98059分别阻断PI3/Akt和ERK通道后他汀对冠心病患者EPCs增殖力作用的变化.结果:与非冠心病人对比,冠心病患者EPCs的增殖(0.23± 0.02 to 0.14± 0.02,P＜0.001)功能下降,阿托伐他汀明显提高冠心病患者EPCs的增殖力(0.14± 0.02 to 0.20± 0.02,P＜0.05);该作用可为Pl3/Akt通道阻滞剂LY294002阻断(0.20± 0.02 t0 0.16±0.02,P＜0.001),但ERK信号通道阻滞剂PD98059无此作用(0.20±0.02比0.20±0.02,P＞0.05).结论:阿托伐他汀可通过PI3/Akt通道而非ERK信号通道上调冠心病患者外周血来源EPCs的增殖力.     

依他尼酸抑制小鼠气管平滑肌收缩北大核心CSCD

本研究旨在探讨依他尼酸(ethacrynic acid, EA)抑制气管平滑肌(airway smooth muscle, ASM)收缩的作用及其机制。利用BL-420S系统测量小鼠气管环张力,用全细胞膜片钳技术记录ASM细胞通道电流,用钙成像系统测量ASM细胞内Ca^2+浓度。结果显示,EA剂量依赖性地抑制高-K^+(80 mmol/L)和乙酰胆碱(acetylcholine, ACh, 100μmol/L)引起的小鼠气管环收缩,最大舒张百分比分别为(97.02±1.56)%和(85.21±0.03)%,半数有效浓度(median effective concentration, EC50)分别为(40.28±2.20)μmol/L和(56.22±7.62)μmol/L。EA分别降低高-K^+和ACh诱导的细胞内Ca^2+浓度,分别从0.40±0.04降到0.16±0.01,0.50±0.01降到0.39±0.01。此外,EA抑制ASM细胞L-型电压依赖钙通道(L-type voltage-dependent calcium channel,LVDCC)和钙库操纵的钙离子通道(store-operated calcium channel, SOCC)电流,以及高-K^+和ACh引起的外Ca^2+内流。同时,EA可以降低小鼠呼吸系统阻力(resistance of the respiratory system, Rrs)。以上结果提示,EA通过抑制小鼠ASM细胞LVDCC和SOCC,抑制Ca^2+的内流,降低细胞内Ca^2+浓度,导致ASM舒张,提示EA是一种潜在的支气管扩张剂。     

在ts-RSV LA90细胞转化过程中钙流变化的研究

本文以ts-RSV LA90细胞为模型,用放射性同位素示踪技术测定了通过细胞质膜的~(45)Ca~(2+)流水平;同时用钙指示剂Indo-1 AM和光学多道分析仪测定了胞内[Ca~(2+)]_i,初步研究了Ca~(2+)流和[Ca~(2+)]_i在v-src基因引起细胞转化过程中的动态变化。结果表明LA90细胞质膜上~(45)Ca~(2+)流的改变是细胞转化过程中可以检测到的早期事件之一,转化状态(33℃)细胞的~(45)Ca~(2+)流大于正常状态(40℃)的,细胞从正常到转化(40℃→33℃)的25分钟内~(45)Ca~(2+)流就有明显增大。TMB-8可以抑制转化引起的~(45)Ca~(2+)流出的增大,小牛血清可以刺激正常状态细胞的~(45)Ca~(2+)流出增大,~(45)Ca~(2+)流出与温度有一定依赖关系;细胞转化引起的~(45)Ca~(2+)流入增大,可被异博定抑制,~(45)Ca~(2+)流入不受温度的影响。LA90细胞[Ca~(2+)]_i在转化早期有明显升高,并维持在较正常细胞高2—3倍的水平,A23187-Br可提高正常LA90细胞[Ca~(2+)]_i,[Ca~(2+)]_i不受温度的影响。从质膜上~(45)Ca~(2+)流和[Ca~(2+)]_i的增大说明转化细胞虽然对胞外Ca~(2+)浓度依赖性下降,但维持增殖及转化状态仍然需要一定的胞外Ca~(2+),并通过提高质膜Ca~(2+)流入和释放内源性Ca~(2+),使转化细胞[Ca~(2+)]_i维持在较高水平上。LA90细膜质膜上~(45)Ca~(2+)流和[Ca~(2+)]_i的增大在细胞转化中起着重大作用。     

瞬时感受器电位A1通道参与冷刺激引起的离体大鼠结肠平滑肌收缩(英文)

瞬时感受器电位A1(transient receptor potential A1,TRPA1)通道是一种可以被伤害性冷刺激激活的TRP家族离子通道。本研究的目的是探讨TRPA1通道是否参与冷刺激引起的大鼠结肠平滑肌收缩及其可能的机制。分离雄性Wistar大鼠升结肠和降结肠的平滑肌,制备成肌条,灌流不同温度Krebs液给予冷刺激,然后17°C冷刺激条件下用不同药物灌流,用张力换能器记录张力变化。逆转录PCR(RT-PCR)检测上述平滑肌中TRPA1、TRPM8和TRPV1的mRNA表达。结果显示,在大鼠升结肠和降结肠的平滑肌层有TRPA1的表达,但无TRPM8和TRPV1的表达。肌张力研究显示,不同温度(32、25、17、12°C)的冷刺激可以引起大鼠升结肠和降结肠纵行平滑肌的收缩,并且收缩张力随着温度降低而增强,17°C冷刺激可引起最大收缩(P0.01)。TRPA1的阻断剂钌红(30μmol/L)可以抑制冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩(P0.05)。TRPA1激动剂异硫氰酸烯丙酯(AITC,300μmol/L)和桂皮醛(CA,1mmol/L)预处理肌条后,可降低或几乎取消冷刺激引起的升结肠(P0.01,P0.05)和降结肠(均P0.001)平滑肌的收缩。去除细胞外Ca2+(EGTA,1mmol/L)、PLC阻断剂U73122(10μmol/L)、IP3受体阻断剂2-APB(30μmol/L)均可抑制17°C冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩(P0.001,P0.05,P0.001)。阿托品(1μmol/L)则对17oC冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩均无影响。L-型钙通道阻断剂硝苯地平(1μmol/L)和神经毒素河豚毒素(2μmol/L)可抑制降结肠平滑肌的收缩(P0.01,P0.05),而对升结肠没有作用。综上所述,TRPA1通道参与冷刺激引起的大鼠升结肠和降结肠平滑肌的收缩,其胞内信号转导机制可能涉及PLC/IP3/Ca2+途径的激活。另外,L-型钙通道和非M受体介导的神经机制部分参与冷刺激引起的降结肠平滑肌收缩,这可能是降结肠收缩张力大于升结肠的原因。     

Con A刺激致T淋巴细胞胞浆游离Ca~(2+)浓度升高

本文分别应用荧光Ca~(2+)指示剂Quin2和Indo-1研究了Con A刺激的T淋巴细胞[Ca~(2+)]i升高过程及其发生机制.结果表明Con A与T淋巴细胞作用可导致细胞[Ca~(2+)]i的迅速升高.这种增加的胞内游离Ca~(2+)不仅来自胞外Ca~(2+)的内流,也来源于胞内钙库的释放.其中Ca~(2+)内流与T细胞钙通道的开放有关.可被钙通道抑制剂戊脉胺抑制,细胞的去极化及钾通道阻断剂四乙胺均不能阻断Ca~(2+)的内流,提示Ca~(2+)内流不是通过电位操纵的钙通道实现的,也与拥通道的开闭无关.Ca~(2+)内流可能是通过Con A受体活化的受体操纵的钙通道而实现的.     

槲皮素舒张大鼠离体肾动脉及其与L-型电压依赖性钙通道和蛋白激酶C的关系

为了观察槲皮素对大鼠离体肾动脉的舒张作用,并探讨该作用与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的关系,本研究采用血管张力测定仪记录大鼠肾动脉肌张力变化,用膜片钳全细胞记录方式记录大鼠肾动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)L-型电压依赖性钙通道(L-type voltage-gated Ca~(2+) channels,LVGC)电流。实验结果显示,槲皮素能够舒张60 mmol/L KCl或1×10~(-5) mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)预收缩的大鼠肾动脉,其最大舒张百分比分别为(84.53±7.35)%和(76.42±4.63)%;血管内皮完整组和去内皮组肾动脉相比,槲皮素对预收缩肾动脉的最大舒张百分比没有显著性差异;预孵育PKC特异性抑制剂C6303可使槲皮素对肾动脉的最大舒张幅度降低,与未孵育C6303组相比具有统计学差异(P0.05);离体大鼠肾动脉VSMC的正常LVGC尖峰电流密度为(23.17±1.33)pA/pF,10μmol/L槲皮素可以降低其电流密度到(10.46±1.35)pA/pF,其抑制百分比为54.86%,1μmol/L C6303可部分逆转槲皮素对LVGC电流的降低幅度,其抑制百分比为62.08%(P0.05)。上述实验结果提示,槲皮素可舒张大鼠离体肾动脉,该作用具有浓度依赖性且不受内皮影响,可能与抑制LVGC和激活PKC有关。     

平面双分子层脂质膜上人工重建大电导钙激活钾通道

本研究旨在探索建立一种稳定平面双分子层脂质膜(planar lipid bilayer membranes,PLBMs)的制备方法,并尝试将大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channel,BK_(Ca))蛋白融合其上进行单通道电流研究。将卵磷脂与胆固醇氯仿按3:1比例混合,用N_2吹干氯仿,制成癸烷脂质液,采用涂抹法制备PLBMs,并将BK_(Ca)重建到PLBMs上,用膜片钳研究其单通道特性。结果显示,重建到PLBMs上的BK_(Ca)的单通道的电导值为(206.8±16.9)pS,当浴液中[Ca~(2+)]=0μmol/L时,无论超极化或去极化状态下均很少见到BK_(Ca)的通道活动。膜电位为+40 m V时,当[Ca~(2+)]由1μmol/L增加到100μmol/L时,通道开放概率由0.034±0.002增加到0.961±0.013,平均开放时间由(1.1±0.2)ms延长到(151.3±10.2)ms,平均关闭时间由(32.2±2.8)ms缩短为(2.1±1.8)ms;当K+浓度为40/140 mmol/L(Cis/Trans)时,重建的BK_(Ca)反转电位在-30 mV左右。以上结果提示:(1)涂抹法可用于PLBMs的制备;(2)重建后的BK_(Ca)通道具有电导值大、电压依赖性、Ca~(2+)敏感性和K~+选择性;(3)PLBMs技术可用于BK_(Ca)通道的药理学和动力学特性的研究。     

强声暴露对巴马小型猪海马细胞内Ca~(2+)变化及其信号通道的影响

声音对神经系统有重要影响,本研究旨在探讨噪音或高强度声音刺激对神经系统的影响及其机制。将听力正常的巴马小型猪随机分为正常对照组与强声暴露组。强声暴露组的巴马小型猪暴露于中低频强声(900 Hz-142 dB SPL)环境中15min,暴露结束后即刻分离出海马组织。用Fluo-4探针观察海马组织细胞内Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i)的变化,用real-time PCR和Western blot分别检测Ca~(2+)受体、L-型Ca~(2+)通道α2/δ1亚基、PKC和PI3K的mRNA和蛋白表达,用DAPI染色法观察细胞核形态变化。结果显示,相对对照组,强声暴露组小型猪海马组织细胞[Ca~(2+)]_i明显增加,L-型Ca~(2+)通道α2/δ1亚基、PKC和PI3K mRNA表达上调,Ca~(2+)受体和PKC蛋白表达显著上调。此外,强声暴露引起海马组织细胞核出现肿胀变形等损伤样改变。以上结果提示,强声暴露可以通过激活海马组织PKC信号通路,引起[Ca~(2+)]_i上调,最终导致海马组织内细胞的损伤。本研究结果不仅揭示了强声引起神经损伤的可能机制,同时为防护强声对神经系统造成的损伤提供了新的思路。     

CYP4A抑制剂HET0016对小鼠离体主动脉血管张力的影响

为研究CYP4A抑制剂HET0016对小鼠离体主动脉血管张力的影响,对雄性C57BL/6J小鼠进行脱臼处死后,取主动脉并剪成3~4 mm长的血管环,固定于微血管测定仪的浴槽内,分别用高钾溶液(KCl 60 mmol/L)和去氧肾上腺素(Phe 1μmol/L)进行血管功能性检测,发现二者均能让离体主动脉环产生持续性收缩;然后采用累积给药法观察1μmol/L Phe处理组、60 mmol/L高钾处理组、eNOS抑制剂L-NAME(100μmol/L)和L-钙通道阻滞剂nifedipine(1μmol/L)单独或共同孵育后Phe(1μmol/L)预收缩处理组中不同浓度HET0016对小鼠离体主动脉环张力的影响,并探讨其可能的作用机制。结果发现,高浓度的HET0016可以舒张高钾和Phe预收缩的内皮完整的主动脉环;对于L-NAME单独孵育后Phe预收缩的内皮完整的主动脉环,只有高浓度的HET0016有显著舒张作用;而对于nifedipine单独孵育以及L-NAME和nifedipine共同孵育后Phe预收缩的主动脉环,HET0016的舒张作用呈明显的浓度依赖性。这些结果显示,HET0016这种舒张作用是多通道的,呈部分的内皮依赖性,但也不是主要通过L-电压门控钙通道产生,只有在高浓度的情况下才开始影响L-电压门控钙通道。     

愈伤组织形成过程中钙离子与激素诱导效应的关系

实验研究了在胡萝卜、烟草愈伤组织形成过程中,激素诱导作用与钙离子的关系。结果表明:在含有正常浓度的激素和Ca~(2+)的培养基中,0.1—1mmol/L Ca~(2+)螯合剂EGTA抑制愈伤组织鲜重增长78.0%—88.4%; 10—50μmol/L尼群地平及10—60μmol/L异博定等细胞膜钙通道阻断剂分别抑制愈伤组织鲜重增长19.1%—81.9%及17.6%—70.3%。除去上述Ca~(2+)螯合剂及Ca~(2+)通道阻断剂后,受抑制的外植体基本上可恢复生长。在无激素培养基中,10—30μmol/L Ca~(2+)载体A_(23187)可使外植体膨大,使外植体脱分化细胞增多,并出现分生细胞团,初步说明A_(23187)诱导的Ca~(2+)内流可以部分地模拟激素的作用。以膜显示剂氯四环素探测胞内Ca~(2+)分布时发现分裂细胞、脱分化细胞、分生细胞团及愈伤组织区域的细胞荧光较强。以上事实说明在愈伤组织形成中激素诱导效应与细胞内Ca~(2+)有密切关系。     

钙通道与钙释放通道

1.Ca~(2+)的重要生理作用胞内游离钙浓度([Ca~(2+)])的变化调节着细胞的代谢、基因表达等细胞共有的活动,以及始动兴奋、收缩或出胞分泌以及激活和失活离子通道等细胞不同的反应。[Ca~(2+)]的升高主要依赖于胞外钙经质膜上的钙通道内流或/和胞内储存钙的释放。释放的内钙也是藉细胞器膜的钙释放通道进入胞浆。可见通道启闭活动的正常是维持[Ca~(2+)]正常的一个重要保证。2.离子通道及其分类离子通道是贯穿于质膜或细胞器膜的大分子蛋白质,其中央形成能通过离子的亲水性孔道(pores)。离子的跨膜转运是通过膜上通道蛋白的功能来完     

MAPKs介导NMDA诱导的大鼠皮层神经元凋亡(英文)

NMDA诱导兴奋毒造成的神经损伤,包括细胞的凋亡和坏死。本研究旨在探讨神经元凋亡在NMDA兴奋毒所致大鼠皮层神经元死亡中的所占比例,并分析了NMDA致神经元凋亡的信号通路机制。通过使用Caspase抑制剂和测定乳酸脱氢酶活性,研究NMDA(100μmol/L,2h)兴奋毒所致的神经元凋亡;并使用MAPKs选择性抑制剂,分别采用Caspase-3活性检测,TUNEL和Annexin V染色方法,进一步观察MAPKs通路中细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N-末端激酶(JNK)和p38 MAPK三条不同途径在NMDA所致神经元凋亡中的作用。结果显示:(1)Caspase依赖的凋亡占NMDA所致细胞死亡总数的22.49%;(2)p38 MAPK抑制剂SB203580(10μmol/L)使NMDA诱导的caspase-3活性降低30.43%(P0.05);而ERK抑制剂PD98059(20μmol/L)和JNK抑制剂SP600125(20 μmol/L)不影响caspase-3的活性;(3)SB203580(10μmol/L)使NMDA所致的TUNEL阳性细胞数减少33.10%(P0.05);而PD98059(20μmol/L)或SP600125(20μmol/L)都没有作用;(4)Annexin V染色结果显示,SB203580(10μmol/L)使NMDA所致的早期凋亡细胞减少55.56%(P0.05);SP600125(20μmol/L)使NMDA所致的晚期凋亡/死亡细胞减少67.59%(P0.05);PD98059(20μmol/L)对细胞凋亡/死亡没有明显作用。以上结果表明,NMDA介导的大鼠皮层神经元死亡除坏死外,还包含有一小部分神经元凋亡;p38 MAPK途径,而非JNK和ERK途径,介导了NMDA诱导的神经元凋亡,抑制与此相关的凋亡信号通路可发挥神经保护作用;JNK途径可能介导了NMDA所致的神经元坏死而非凋亡。     

烟碱对脑细胞内钙离子浓度的调控及其机制分析

神经肌肉接头及神经节N受体均可引起细胞外Ca~(2 )内流和细胞内Ca~(2 )释放,增加细胞内Ca~(2 )浓度。尚无资料证明脑N受体是否影响细胞内Ca~(2-)浓度。本实验观察烟碱对脑细胞内Ca~(2 )浓度的影响并探讨其可能的机理。 烟碱对大鼠脑突触体主动摄取~(45)Ca~(2 )的影响 本实验条件下钙通道激动剂Bay-k-8644(10~(-7)～10~(-4)～mol/L)浓度依赖性地增加突触体~(45)Ca~(2 )主动摄取量;钙通道拮抗剂异搏定(10~(-9)～10~(-5)mol/L)浓度依赖性地抑制~(45)Ca~(2 )摄取     

心肌细胞核Ca2+库特点及其调节的离体研究

研究核外Ca~(2+)浓度对核Ca~(2+)的影响,及细胞核Ca~(2+)摄取和释放的关系,以探讨核Ca~(2+)转运的调节机制。采用差速离心和密度梯度离心法分离纯化心肌细胞核,以Fluo-4/AM荧光指示剂负载心肌细胞核,应用激光共聚焦扫描显微镜和荧光分光光度计进行观察和测定。结果显示,分离纯化的成年大鼠心肌细胞核内自由[Ca~(2+)]随着核外[Ca~(2+)]的增加而逐渐增加,孵育液[Ca~(2+)]为1000 nmol/L达高峰,但二者增加的程度并不一致,之后随核外[Ca~(2+)]浓度的增加而呈降低趋势。ATP和100—600nmol/L的核外游离Ca~(2+),使心肌细胞核显示核被膜腔Ca~(2+)荧光,ATP和1000nmol/L的核外游离Ca~(2+)则进一步引起核浆内的Ca~(2+)荧光强度升高。荧光染色观察可见IP_3受体染色主要位于核内膜,而钙泵和ryanodine受体染色主要位于核外膜。IP_3和Ryancodine使核Ca~(2+)短暂升高1.68倍和1.93倍(P<0.001),而钙泵抑制剂Thapsigargin和IP_3受体抑制剂Heparin则分别使核Ca~(2+)降低64%和35.6%(p<0.05)。ryanodine使IP_3升高的核Ca~(2+)显著回落至正常水平以下(p<0.001)。Thapsigargin不能阻断IP_3和Ryanodine所致的核Ca~(2+)释放增加(p<0.05),但事先采用钙泵抑制剂Thapsigargin预处理心肌细胞核,则能显著的阻断IP_3和Ryanodine所致的核Ca~(2+)升高作用(Ca~(2+)释放作用)(p<0.05)。结果提示大鼠心肌细胞核可能也是细胞内的钙库之一,心肌细胞核上存在Ca~(2+)-ATPase、ryanodine受体和IP_3受体等Ca~(2+)转运系统,可能参与核Ca~(2+)摄取和释放的调节。     

心肌缺O2再给O2时延迟后除极和触发活动的发生及机制

应用细胞内微电极技术观察了豚鼠右心室乳头肌缺O_2/再给O_2与延迟后除极(DADs)及触发活动的关系;以及高Ca~(2 )、Ca~(2 )通道阻断剂、吗啡对再给O_2过程诱发的DADs及触发活动的效应。结果表明:单纯缺O_2和再给O_2期间均未产生DADs及触发活动,在缺O_2和葡萄糖条件下,再给O_2和葡萄糖时能诱发出DADs及触发活动,并且DADs幅度与缺O_2和葡萄糖的持续时间有关。高Ca~(2 )(由2.45mmol/L增加到4.9mmol/L)明显增加再给O_2和葡萄糖期间产生的DADs幅度和触发活动发生数;异搏定(1mg/L)明显减低再给O_2和葡萄糖期间产生的DADs幅度。吗啡(120μmol/L)明显减低再给O_2和葡萄糖期间产生的DADs幅度,且吗啡这种作用可被纳洛酮(5μmol/L)所阻断。这些实验表明:DADs和触发活动的发生与心肌能量状态、缺O_2时间的长短、细胞外液中Ca~(2 )浓度有密切关系。异搏定和吗啡可明显降低DADs及触发活动。     

心梗大鼠通过有氧运动激活PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a通路抑制心肌细胞凋亡改善心功能

为探讨有氧运动对心梗大鼠心功能的影响,将3月龄SD雄性大鼠适应性喂养1周后随机分为正常组(C组)、假手术组(S组)、心梗安静组(MI组)、正常+运动组(CE组)、心梗+运动组(ME组),每组8只. MI组结扎左冠状动脉前降支制备心梗模型;S组只穿线不结扎;CE组与ME组术后1周开始有氧训练,运动方式为依次以10 m/min×10 min,13 m/min×10 min,16 m/min×40 min进行跑台训练,60 min/d,每周5 d,连续4周.训练结束后次日,采用血流动力学检测左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)和收缩/舒张速率(±dp/dtmax)等心功能相关指标,单细胞可视化动缘探测系统(IonOptix)测定[Ca~(2+)]i变化百分数([Ca~(2+)]iamplitude)、[Ca~(2+)]i荧光比率(ratio)、达峰速率(departure velocity)、达峰时程(time to peak,TTP)、达峰50%时程(time to peak50%,TTP50%)、达基线50%时程(time to baseline50%,TTB50%)、达基线速率(return velocity)以及ratio改变幅度(ratio amplitude)等钙瞬变指标和肌节最大收缩及舒张速率(±dl/dtmax)、肌节长度(sarcomere length,SL)、肌节收缩幅度(peak twitch amplitude,PTA)、肌节缩短分数(SL shortening%)等心肌细胞收缩指标,蛋白质印迹(Western blotting)方法检测PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号通路及细胞凋亡相关蛋白.与S组相比,MI组PI3K-Akt-PKG-1/p-PLNSERCA2a信号通路被显著抑制,心肌细胞凋亡显著增加,LVEDP显著升高,LVSP和±dp/dtmax显著降低,[Ca~(2+)]i amplitude、ratio amplitude、departure velocity和return velocity均显著下降,TTB50%、TTP和TTP50%均显著增加,心肌细胞SL shortening%、PTA、±dl/dtmax均显著减少;与MI组相比,ME组PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号通路显著被激活,细胞凋亡显著被抑制,LVEDP显著降低,LVSP和±dp/dtmax显著升高,ratio amplitude、[Ca~(2+)]iamplitude、 ratio velocity和departure velocity均显著提高,TB50%、TTP和TTP50%均显著缩短,心肌细胞SL Shortening%、PTA、±dl/dtmax均显著提高.上述结果表明,有氧运动改善MI大鼠梗死周边区心肌细胞的钙瞬变和收缩功能异常,并激活PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号,抑制心肌细胞凋亡,改善心梗心功能,且心梗心功能的改善与PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号通路激活和心肌细胞凋亡抑制关系密切.     

ERK1/2信号通路对黄芪苷Ⅳ抗H_2O_2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用

目的:研究黄芪苷Ⅳ(AST)是否通过细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。方法:用200μmol/L的H2O2处理细胞6 h,采用MTT法检测细胞存活率,建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型;比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力以及丙二醛(MDA)含量;Western blot检测H9c2细胞ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果:在H2O2浓度为200μmol/L作用6 h条件下,细胞存活率降低程度适中,实验结果重复性好,确定后续实验采用200μmol/L H2O2作用6 h建立模型。与H2O2组比较,10 mg/L及20 mg/L AST均显著提高细胞存活率(P<0.01),使细胞培养液中LDH活性显著降低(P<0.01),T-SOD及Mn-SOD活力显著提高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01)。10 mg/L及20 mg/L AST均显著增加H2O2损伤的H9c2细胞p-ERK1/2蛋白的表达(P<0.01),当用PD98059(ERK1/2的抑制剂...