双光子及共聚焦激光扫描显微镜同时多参数观察三尖杉酯碱诱导的HL-60细胞凋亡

三尖杉酯碱(harringtonine,HT)是从中国海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis Li)中提取的一种抗肿瘤药物,能诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡.应用双光子及共聚焦激光扫描显微镜,结合特异性荧光探针Hoechst 33342,四甲基罗丹明乙酯(TMRE)和Fluo 3-AM,同时观察了HT诱导HL-60细胞凋亡过程中细胞核、线粒体膜电势和细胞内钙浓度的变化,建立了一种在单细胞层次适时、无损伤、多参数观察活细胞的方法.     

胞内钙的稳态调节

胞内钙的稳态调节主要有两方面：质膜钙运转调节和胞内钙库的调节。质膜钙运转包括质膜钙泵,质膜钙通道和Ｎａ＾＋／Ｃａ＾２＋交换的调节作用。胞内钙库的调节受第二信使操纵,钙库有其特异的库蛋白分子参与钙的贮存、诱导释放和重新摄取过程。这两方面的协同作用精确保证了细胞溶质中自由钙离子的稳定水平。     

丁酸钠对M期同步的HeLa细胞的阻断效应

5mM的丁酸钠对M期的同步的HeLa细胞主要阻断在早G_1期,并且给药后立即发挥阻断效应,9小时以内完全阻断在早G_1期,9小时以后有少量细胞进入中、晚G_1期及S期。早G_1细胞进入中、晚G_1期的中位数时间,5mM丁酸钠处理组比对照组长4倍,G_1期进入S期的速率完全是由早G_1期进入中、晚G_1的速率所决定的。看来丁酸钠的主要作用点是阻断和大大减缓早G_1期向中、晚G_1的进入。     

封面及有关照片说明——切割牛胚胎得到孪生牛

美国科罗拉多州立大学的科学家发明了一种切割和移植胚胎的技术,从一个胚胎产生二头动物。用这种技术可以增加良种动物的繁殖率,并可得到用于实验室研究的遗传学上一致的孪生动物。上图1为武田哲夫博士在福特·克林斯学校胚胎移植实验室里演示这种技术。他正准备把一个中空的玻璃吸管(他手指所指示的)插到一个放置一周牛胚胎的培养皿中。上图2是通过显微镜听见到的情况。他固定着一个将被分割的胚胎。用左侧的吸管借助吸力固定着胚     

Simultaneous multi-parameter observation of Harringtonine-treating HL-60 cells with both two-photon and confocal laser scanning microscopy

Harringtonine (HT), a kind of anticancer drug isolated from Chinese herb-Cephalotaxus hainanensis Li, can induce apoptosis in promyelocytic leukemia HL-60 cells. With both two-photon laser scanning microscopy and confocal laser scanning microscopy in combination with the fluorescent probe Hoechst 33342, tetramethyrhodamine ethyl ester (TMRE) and Fluo 3-AM, we simultaneously observed HT-induced changes in nuclear morphology, mitochondrial membrane potential and intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) in HL-60 cells, and developed a real-time, sensitive and invasive method for simultaneous multi-parameter observation of drug- treating living cells at the level of single cell.     

对同一细胞内DNA、RNA和蛋白含量相关测定的显微荧光光度法

用荧光染料DAPI、PyroninY和FITC分别染同一细胞内DNA、RNA和蛋白.在紫外光、绿光和兰光顺序激发后,用MPVⅡ显微荧光光度计测量反映单个细胞内DNA、RNA和蛋白含量的荧光强度.根据荧光发射光谱分析,每种染料荧光之间的干扰是可以忽略的.测量结果与FCM获得的结果是一致的.显微荧光光度术对单个细胞多参数相关测量的优点是简单、便宜,并可用于对活细胞获得形态学和定量细胞化学的组合信息.     

用双参数流式细胞光度术(FCM)研究阿克拉霉素对L_(1210)白血病细胞周期的影响

本文用双参数FCM技术,对同一个细胞的DNA和RNA含量进行相关测量,比较了ACM B对小鼠L_(1210)白血病细胞周期和RNA含量的影响.结果发现在一次给药后8小时可导致早、中期S的积累,并抑制S期细胞的DNA合成;到24小时DNA合成恢复正常,并进入G_2期,但由于G_2期细胞进入M期受阻,造成G_2期细胞的积累,这时被阻断在G_2期的细胞RNA含量显著增加,形成正不平衡生长,而给药剂量较大的实验组(1/1.5LD_(50))S期细胞的RNA含量不随着DNA含量的增加而增加,形成负不平衡生长,ACM A和ACM B对体内Li_(210)细胞周期作用相同.     

谱带程序分析——显微光度术生物医学应用程序研究之一

显微光度术是光学显微镜技术和光度测量技术巧妙的结合,它能对显微镜分辨范围之内的样品微区进行米吸收、荧光、反射光和光的干涉等测量,从而可以进行物质的定量分析,同时还可以结合对样品的形态学观察达到定位目的,因此它在生物医学中获得了广泛的应用。它的应用还有两个重     

水霉(Soprolegnia fer ax)生长菌丝顶端细胞内游离Ca~(2 )和膜结合Ca~(2 )的分布

本文比较和研究了水霉(Saprolegnia ferax)生长菌丝顶端胞内Fluo-3游离Ca~(2 )和CTC膜结合Ca~(2 )的荧光分布影像。激光共焦扫描显微镜下观察可见:Fluo-3荧光有房室化现象,Fluo-3荧光反映的是细胞质游离Ca~(2 )与细胞器游离Ca~(2 )总的分布状况,Fluo-3游离Ca~(2 )的最大荧光强度出现在菌丝顶端2—10μm区域,10μm以后荧光强度逐渐下降,约40μm以后荧光降到很低,值得注意的是菌丝顶端2μm以前存在一个低荧光强度区。CTC膜结合Ca~(2 )的荧光影像显示:pH6.8或8.0的条件下菌丝最顶端2μm以前的区域都不能被染色,但pH8.0条件下的荧光较pH6.8弥散而强烈,代表线粒体的蠕虫状荧光斑点不再能够清晰辨认,说明其它细胞器也被染色,但菌丝顶端仍然不能被着色。结合菌丝顶端DIC和超微结构分析说明,菌丝顶端泡囊不是一个Ca~(2 )库,线粒体和内质网等是菌丝胞内重要的Ca~(2 )库。本文结果还澄清了有关菌丝内细胞质游离Ca~(2 )分布的矛盾报道。     

Role of calcium in apoptosis of HL-60 cells induced by harringtonine

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