人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制作用

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物。胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性。用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（ＨＬ－６０）的抑制作用为指标,跟踪指导分离过程。提取物经反相Ｃ１８中压液相色谱、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质,经ＮＭＲ和ＭＳ鉴定为７－酮基胆固醇（７－ｋｅｔｏｃｂｌｅｓｔｅｒｏｌ,７－ＫＣ）。体外琼脂培养条件下７－ＫＣ对小鼠ＷＥＨ１－３和Ｓ－１８０细胞较对正常小鼠骨髓粒一巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用。７－ＫＣ对ＨＬ－６０细胞增殖较对正常人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有更强的抑制作用。     

人胎肝中两种抑制肿瘤细胞生长活性成分的分离鉴定及功能研究

胎儿组织中存在低分子肿瘤抑制物。胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性。用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（ＨＬ－６０）的抑制作用为指标,跟踪分离过程。提取物经反相Ｃ１８中压液相色谱、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０凝胶色谱及正相高效液相色谱分离得到两种活性物质,经ＮＭＲ和ＨＲＭＳ鉴定为７－酮基胆固醇（７－ｋｅｔｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ,７－ＫＣ）和７－β－羟基胆固醇（７－β－ｈｙ     

脑肿瘤抑制因子的功能研究

本文证明了胎脑组织中存在一类可以抑制人白血病细胞系的生长的低分子天然抑癌物．这种抑瘤物抑制活性分布在小于１０ｋＤａ组分,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ２５凝胶过滤可分离为单一组分,且具有广谱的抗肿瘤效应．体外可抑制人白血病、肝癌、胃癌细胞系和小鼠粒、单核和淋巴系白血病细胞,而对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ和小鼠骨髓ＣＦＵ—ＧＭ的抑制作用较弱。     

人胚胎脑组织中低分子肿瘤抑制物的实验研究

人胚胎脑组织提取液可以抑制人白血病细胞系的生长。分析表明:肿瘤抑制活性主要分布在小于10kDa组分,经Sephadex-G25凝胶过滤可初步分离为单一组分。这种低分子肿瘤抑制物具有广谱的抗肿瘤效应,在体外可以抑制人白血病、肝癌、胃癌细胞系和小鼠粒、单核和淋巴系白血病细胞,但对人骨髓CFU-GM和小鼠骨髓CFU-GM的抑制作用较弱,说明人胎脑低分子肿瘤抑制物对肿瘤细胞具有一定的选择性抑制作用。     

大肠杆菌表达重组人白细胞介素-9的纯化及部分性质

表达重组人白细胞介素－９（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－９ｒｈＩＬ－９）的大肠杆菌经破碎、包涵体洗涤、裂解提取、凝胶过滤和离子交换色谱分离,得到了电泳纯的ｒｈＩＬ－９,回收率６６％,分子量与理论值相符,有刺激小鼠骨髓巨核系集落生成的活性．为ｒｈＩＬ－９的大规模制备及更深入的研究奠定了基础     

小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液及其超滤组分对粒巨噬系祖细胞生长的影响

本研究通过传代培养小鼠骨髓内皮细胞系细胞,收集无血清条件培养液(mBMECCM),将其作多级串联超滤,获得分子量大于10、3～10、1～3、05～1kD和小于05kD超滤组分。进行粒巨噬系造血祖细胞集落形成试验,检测了它们的作用。mBMECCM和3～10kD组分对粒巨噬系祖细胞(CFUGM)生长未见明显影响,而分子量大于10kD和05～1kD组分促进CFUGM的增殖,分子量1～3kD和小于05kD组分则抑制CFUGM的增殖。这4种超滤组分对CFUGM生长的效应均有剂量依赖性。这些结果提示,在体外培养条件下,小鼠骨髓内皮细胞分泌若干种活性成分,分别对CFUGM的生长起促进或抑制作用     

新生牛肝中低分子抑瘤物影响白血病细胞生长的实验研究

新生牛肝经匀浆、离心和分级超滤后,得到分子量≤1.0kDa的、耐热的成分——新生牛肝抑瘤物(new-bom calfliver suppressor,BLS-1)。对BLS-1的生物学活性进行了检测,结果表明在体外液体和半固体琼脂培养条件下,它对人和小鼠白血病细胞系(如HL-60、L833 和 P388 等)的生长均有明显的抑制作用,并存在着一定的量效关系;与同样条件下BLS-1对人和小鼠正常粒-巨噬系祖细胞的抑制作用相比较,BLS-1对白血病细胞生长的抑制作用具有较强的选择性。进一步观察了BLS-1对5例急性非淋巴细胞白血病病人骨髓的原代白血病细胞集落(leukemic blast progenitor,L-CFU)生成的影响,结果表明,当BLS-1的浓度达到500μg/ml时,L-CFU的生成受到明显抑制。上述研究结果提示,在新生牛肝中可能存在类似于人胎儿肝脏中的一类低分子天然抑瘤物。     

党参、莱菔子提取物与抗性糊精复合配方的辅助通便功能研究

目的：研究党参及莱菔子提取物与抗性糊精复合配方对便秘小鼠模型的肠推进和促进排便作用的影响,并进一步研究复合配方中莱菔子提取物和党参提取物在体外实验条件下对鸦片受体的抑制作用。方法： 采用地芬诺酯灌胃造成小鼠便秘模型,观察受试样品对动物小肠推进的影响;采用地芬诺酯灌胃造成小鼠便秘模型,观察受试样品对动物排便的影响;采用体外细胞模型,观察莱菔子提取物和党参提取物单独或联合作用对鸦片受体的抑制作用。结果 ：单独使用党参及莱菔子提取物（933mg/kg BW）小鼠肠推进和首粒排黑便时间有明显效果,抗性糊精（1 000mg/kg BW） 对首粒排黑便时间、排黑便粒数和总重量有明显作用,二者复合配方（1 933mg/kg）在肠推进、对首粒排黑便时间、排黑便粒数和总重量等方面均有明显作用,表明了二者的体内协同作用。同时,体外实验结果表明,党参提取物（IC50,7.97mg/mL）、莱菔子提取物（IC50,1.95mg/mL）以及二者复合使用（IC50,4.84mg/mL）对鸦片受体的抑制作用显著。结论 ：该复合配方能显著增加小鼠的小肠推进,缩短便秘小鼠排便时间、增加排便次数及便重,具有辅助通便的作用。     

猴头菌发酵液中抑制非酶糖基化反应物质的分离及分析

以体外非酶糖基化反应抑制率为考察指标,对猴头菌发酵液中抑制非酶糖基化反应的高活性物质进行分离并纯化,通过发酵液浓缩、二步醇沉、提取物冷冻干燥、C18层析柱等步骤进行分离,获得1种对非酶糖基化反应具有良好抑制作用的物质组分HE35,经液相色谱-质谱(LC-MS)分析后发现,HE35的相对分子质量为294,2mg/m L的HE35对体外非酶糖基化抑制率达到92.17%,半抑制质量浓度IC50为0.65 mg/m L。初步分析猴头菌发酵液中可能存在一种以上的活性物质,对体外非酶糖基化反应具有抑制作用。     

GM-CSF基因转染增强经肿瘤抗原刺激的树突细胞的体内抗肿瘤作用

为探讨GM-CSF基因转染的树突细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用,GM-CSF重组腺病毒感染小鼠脾脏树突细胞后,FACS分析表明其B7-1且和B7-2表达水平明显提高,混合淋巴细胞培养反应显示其对T淋巴细胞具有更强的刺激作用;树突细胞体外经放射线灭活的B16肿瘤细胞刺激后免疫正常同系小鼠,能诱导出显著的CTL活性.使免疫小鼠对野生型B16肿瘤细胞的攻击具有一定抵抗作用;这种经瘤苗刺激的树突细胞导入GM-CSF基因后,体内可诱导更强的CTL活性,更有效地抵抗肿瘤细胞的攻击,并且对肺转移荷瘤小鼠具有更强的治疗作用,使肺转移结节明显减少,60%的荷瘤小鼠长期存活.结果提示体外经瘤苗刺激、GM-CSF基因转染的树突细胞可望成为肿瘤免疫基因治疗的新途径.     

大蒜油对人CFu－L与CFu－GM集落形成能力的影响

本研究用体外细胞培养技术观察了大蒜油对人白血病细胞集落（ＣＦｕ－Ｌ）及骨髓粒单细胞集落（ＣＦｕ－ＧＭ）形成能力的影响。结果证明大蒜油对白血病细胞集落生长有明显的抑制作用,而相同浓度的大蒜油对正常人骨髓（ＢＭ）粒单细胞集落的形成能力亦有一定程度的抑制作用,但抑制作用较弱。     

人骨髓细胞培养液中干细胞刺激物的分析研究

人骨髓细胞体外培养液中含有高活力的 CSF,在长期培养过程中,CSF 活力的变化,与 CFU-C 数量的变化有大致平行的趋势。这种 CSF 对狗和小鼠也同样有效。人骨體条件液中的 CSF 对培养中的 CFU-S 也有明显的激发作用。这一结论可以从几个方面获得证据:第一,小鼠骨髓细胞与人骨髓条件液保温六小时后,再测定其中 CFU-S 数,结果是增加了。第二,经亚致死剂量照射的小鼠,腹腔注射适量的人骨髓条件液,其内源性脾结节也明显增多。第三,采用阿糖胞苷自杀的方法,测定小鼠骨髓经与人骨髓条件液保温后,其中 CFU-S 的自杀率也有增高的趋势。上述几方面的实验,说明人骨髓长期培养中存在着某种活性物质,调节体外造血。至于这种物质的来源,以及在体外造血中所起的作用,还需要做很多工作,逐步予以澄清。     

蓖麻籽提取物抗雌鼠生育活性成分体外筛选方法的建立

用不同剂量蓖麻籽乙醚提取物处理原代培养大鼠蜕膜细胞和黄体细胞,观察细胞形态变化,同时用MTT法检测细胞活力,探讨蓖麻籽提取物抗雌鼠生育活性成分的作用靶标,从而建立其有效成分的体外筛选方法。结果表明：400μg／mL蓖麻籽提取物处理液对体外培养大鼠蜕膜细胞生长有明显的抑制作用（P〈0．05）;提取物对蜕膜细胞的半抑制浓度（IC50）为568．6±5．3μg／mL,r=0．9790;其抑制作用具有较好的量-效关系。而提取物对黄体细胞活力的抑制作用不显著。结论：用大鼠离体培养蜕膜细胞的活力测定方法,作为蓖麻籽乙醚提取物抗雌鼠有效成分分离、提纯的活性跟踪指标是可行的。     

蒲公英抗肿瘤活性部位的GC-MS分析研究

目的：考察蒲公英提取物对MCF-7增殖作用的影响,研究蒲公英抗肿瘤活性部位的化学成分。方法：采用MTT法比较蒲公英水提物、醇提物和不同极性提取物对MCF-7增殖的影响;以气相色谱．质谱（GC-MS）联用技术对具有抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖的部位进行分离和鉴定。结果：蒲公英水提物和醇提物对MCF-7细胞均有抑制作用,体外最大抑制率分别达到92．95％、93．59％,蒲公英不同极性溶剂提取物中,氯仿部位抑制MCF-7的增殖,且抑制作用高于醇提和水提物,乙酸乙酯和石油醚部位促进MCF-7的增殖。从蒲公英氯仿提取物中鉴定出80种化合物,占其总量的98．07％。结论：蒲公英氯仿部位具有抗肿瘤活性,为蒲公英抗肿瘤活性成分的研究提供了依据,拓展了筛选中药活性成分的方法。     

入侵植物猫爪藤体外细胞毒活性成分的筛选分离

为了筛选分离入侵植物猫爪藤的细胞毒活性成分,采用MTT法以75%乙醇提取物的不同组分分别处理人肝癌细胞SMMC7721、Bel7402和正常肝细胞Chang Liver,对他们的体外增殖抑制率进行了研究。结果表明,总醇提物的氯仿组分对肝癌细胞表现出明显的体外增殖抑制作用,其次是石油醚组分。从氯仿萃取组分中分离出具有更强细胞毒活性的成分熊果酸。因此,入侵植物猫爪藤具有体外细胞毒活性,熊果酸是其体外细胞毒活性的主要成分之一。     

射干中乳酸脱氢酶抑制剂的筛选分离与质谱分析

本研究采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI-MS)对射干提取物中异黄酮类化学成分进行分析鉴定,以乳酸脱氢酶作为生物靶分子,运用超滤质谱技术筛选出6种酶抑制剂,分别为鸢尾苷(tectoridin)、鸢尾新苷A(Iristectorin A)、野鸢尾苷(iridin)、鸢尾苷元(tectorigenin)、野鸢尾黄素(irigenin)和次野鸢尾黄素(irisflorentin),并采用半制备型高效液相色谱技术(Semi-prep·HPLC)分离纯化射干提取物中的活性成分。所得单体分离收集液经分析型高效液相色谱法检测,纯度均大于90%。结果证明利用液相色谱-超滤-质谱-半制备型高效液相色谱联用技术可以快速筛选、鉴定、分离射干中的活性物质。此方法对于筛选酶抑制剂有快速和灵敏等优势,具有广泛的应用前景。     

烟草提取物对十一种植物病原真菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法研究烟叶95%乙醇提取物和正己烷提取物对苹果腐烂病菌等11种植物病原真菌的抑菌活性,并通过液相色谱及气质联用色谱对烟叶提取物中多酚类、黄酮类、萜烯类等抑菌活性成分进行测定。实验结果表明,0.5 g/m L(工作浓度5 mg/m L)的两种溶剂提取物对11种病原真菌的菌丝生长均有抑制作用,其中对苹果腐烂病菌(V.mali)的抑制作用最强,且同浓度的正己烷提取物的抑菌活性优于95%乙醇提取物。根据不同材料提取物及几种纯物质溶液的抑菌特点,推测西柏三烯二醇可能是烟叶提取物中主要的抑菌活性物质。     

粘虫咽侧体静止激素的初步分离纯化

用放射化学的方法,检测粘虫Mythimna separata幼虫脑提取物中咽侧体静止激素(Allatostatin,AS)样的活性物质。发现粘虫幼虫脑中含有AS样的活性物质,可抑制离体咽侧体(Corporaallata,CA)的保幼激素(Juvenile hormone,JH)的生物合成。用1个脑当量的幼虫脑提取物,对CA的JH合成的抑制率达51%。幼虫脑提取物经胰蛋白酶水解后,AS活性显著降低,表明幼虫脑中的活性物质是肽类或蛋白质类物质。幼虫脑提取物用Sep-Pak柱初步纯化,有活性的组分经高压液相色谱(HPLC)分离,洗脱组分的AS活性测定表明,有AS活性的组分主要集中在组分1～20和组分30～60,其中对离体CA的JH合成的抑制大于50%的组分有3、5、11、40、54和60。     

血竭超临界提取物的降血糖作用及其机制研究

为了研究血竭超临界提取物的降血糖作用及其机制,用正常小鼠和四氧嘧啶糖尿病小鼠模型,以血糖、糖耐量为指标研究血竭超临界提取物的降糖作用。通过测定体外α-葡萄糖苷酶的活力,观察血竭超临界提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果发现血竭超临界提取物对正常小鼠空腹血糖无明显降低作用,能改善小鼠对蔗糖的耐受力,能降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的空腹血糖水平,能抑制α-葡萄糖苷酶的活性。表明血竭超临界提取物对糖尿病小鼠有较好的降糖作用,对α-葡萄糖苷酶的抑制作用可能是其降血糖的机制之一。     

一种紫菜多糖的制备及对淋巴细胞生长的影响

用DEAE－纤维素和SephadexG-200柱层析法分离纯化条斑紫菜的热水提取物,从中得到多糖PY2,并测出其分子量为2．0％10^4。用紫外和红外光谱对PY2的性质进行了鉴定。进一步测定了PY2对体外培养的小鼠骨髓细胞及淋巴细胞生长的影响。结果表明,PY2是一种少见的紫菜多糖,它不含有大多数紫菜侈糖具有的3,6－内醚－兰乳糖和硫酸基,它对小鼠脾脏淋巴细胞、胸腺淋巴细胞以及混合淋巴细胞的增殖有一定的抑制作用,而对骨髓细胞的增殖没有明显的影响。