从少量培养细胞中同时提取微量蛋白和RNA的方法探讨

为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2～ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍 苯酚 氯仿一步抽提RNA法和分子克隆实验手册裂解液制备蛋白质的方法 ,作为对照 .自制试剂提取的总RNA ,18S、2 8S清晰可见 ,2 8S比 18S带亮度强 2～ 3倍 ,带与带之间无拖尾现象 ,5S隐约可见 ,而且成功地进行了Northern印迹、RT PCR分析 ,与经典方法差异不大 ;用此法所提蛋白质 ,经SDS PAGE检测 ,蛋白分离效果很好 ,无杂质 ,且Western印迹检测Giα蛋白 ,可见一条清晰的特异带 ,与常规提取蛋白质 ,结果相似 .从微量细胞中同时提取的RNA和蛋白质 ,得率高、纯度好 ,具有化学完整性和生物学性质     

脑肿瘤抑制因子的功能研究

本文证明了胎脑组织中存在一类可以抑制人白血病细胞系的生长的低分子天然抑癌物．这种抑瘤物抑制活性分布在小于１０ｋＤａ组分,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ２５凝胶过滤可分离为单一组分,且具有广谱的抗肿瘤效应．体外可抑制人白血病、肝癌、胃癌细胞系和小鼠粒、单核和淋巴系白血病细胞,而对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ和小鼠骨髓ＣＦＵ—ＧＭ的抑制作用较弱。     

实时荧光定量RT-PCR在小鼠及人G蛋白mRNA检测中的应用

用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10μmol/LGqαmRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作用ECV304细胞24h后,Gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×106±4.82×105拷贝),48h和72h下降更明显;Gsα和Gi2α的mRNA表达变化不显著.10μmol/LGsαmRNA反义寡核苷酸(GsαODN)作用ECV304细胞24h后,Gsα的mRNA表达显著下降(2.97×108±2.68×107拷贝下降到4.16×106±2.00×106拷贝),48h和72h下降更明显;Gqα、Gi2α表达变化不显著.小白鼠油酸致伤后6h,GqαmRNA表达显著下降(1.16×108±8.73×106拷贝下降到3.30×106±1.68×106拷贝),24h下降更显著(9.32×107±1.47×107拷贝下降到4.14×106±1.67×106拷贝);Gsα和Gi2α表达变化的趋势同GqαmRNA.结果准确可靠,重现性好.说明建立的实时荧光定量RT-PCR方法成功地实现了对ECV304细胞和小白鼠肺组织G蛋白不同亚型不同丰度基因表达的检测.     

衰老大鼠心脏与主动脉G蛋白α亚基的变化

随着年龄的增长,心血管系统鸟苷酸结合蛋白耦联受体介导的反应性也发生了改变。本文用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ和核酸杂交技术分别观察了６,２４月龄的Ｆｉｓｃｈｅｒ ３４４大鼠主动脉,心房,心室及脑组织中Ｇｓａ,Ｇｏａ,Ｇｉａ及相应的ｍＲＮＡ的变化。     

糖皮质激素对大鼠下丘脑组织G蛋白α亚基的调节作用

糖皮质激素影响下丘脑－垂体－肾上腺轴（ＨＰＡＡ）的神经内分泌功能,尤其对下丘脑的影响更为重要,下丘脑神经激素的合成和分泌与Ｇ蛋白偶联的信号传导系统有关。用蛋白印迹技术研究了糖皮质激素对大鼠下丘脑几种Ｇ蛋白α亚基表达的调节作用,结果表明,糖皮质激素对Ｇαｓ１,Ｇαｓ２,Ｇαｉ和Ｇαｑ的影响均为下调作用,但下降的幅度不同,分别为１４．３,１５．６６,１４．６１和１２．３７％糖皮质激素对Ｇαｏ表达无明显     

蛇毒中的NGF及其医学应用

本文综述了蛇毒ＮＧＦ的来源、结构、理化性质、纯化和生物活性鉴定，并简述了ＮＧＦ可能应用的范围以及目前已应用的一些疾病。