全长cDNA的获得—RACE及其他方法进展

全长cDNA的获得是基因克隆的重要内容,也是基因组研究的重要内容之一。cDNA末端快速扩增技术（RACE）是获得全长cDNA的主要辅助手段之一,本文对RACE技术的原理、改进和近几年发展起来的新型RACE（包括RNA连接酶介导的RACE、oligo－capping等）作了综述。同时,对用干全长CDNA克隆的其他技术,如引物载体法、固相支持物法作了介绍。     

西伯利亚蓼多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的克隆及盐胁迫下的表达

根据西伯利亚蓼茎抑制消减文库(SSH)中获得的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase inhibiting proteins,PGIP) 的EST序列,采用RACE技术在西伯利亚蓼消减库(SSH)成功克隆了PGIP蛋白基因的cDNA序列．该基因开放读码框为1 020 bp,编码339个氨基酸, 具有1段24个残基的保守亮氨酸结构域．序列分析表明,该基因具有N端信号肽,具有PGIPs家族共有的典型保守区域,属PGIPs家族基因,命名为PsPGIP,GenBank登录号为ACD01043．荧光定量PCR分析表明,PsPGIP在西伯利亚蓼叶、茎、地下茎等器官中均有分布．在3% NaHCO₃诱导表达中,该基因在叶中表达明显受盐胁迫的诱导．推测该基因在抵御盐胁迫伤害中起到了重要的作用．     

基于PCR的cDNA基因克隆技术研究进展

RT-PCR、锚定PCR、cDNA末端快速扩增（RACE）、step out RACE、DDRT-PCR、cDNA代表性差异分析、抑制性削减杂交等都是建立在PCR基础之上的cDNA分子克隆技术。本介绍各种技术的优缺点、应用以及与同类技术进行比较,这些技术现在已经成功应用于大量EST的分离、cDNA库的构建、编码产物未知的差别表达基因的分离以及全长cDNA基因序列的克隆等方面。     

一步3’RACE快速构建鸡MnSOD全长cDNA克隆Rapid

本研究尝试将触减 PCR与3’ cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术进行结合,仅用一条特异性引物和一条通用引物,成功地实现了从3’末端cDNA库对鸡含锰超氧化物歧化酶（manganese-containing superoxide dismutase,MnSOD）全长cDNA的一步3’RACE快速构建。与常规使用的末端PCR或亚克隆方法相比,该法具有快速、省时、经济和特异性好的优点。Abstract: RACE(rapid amplification of cDNA ends) is a popular technique to rapidly obtain the full-length cDNA. After obtaining the 3’cDNA and 5’cDNA fragments with a overlapped region by 3’RACE and 5’RACE, the full-length cDNA could be generated by end-to-end PCR or subcloning. In this study, 3’RACE combined with touch-down PCR was successfully used for the rapid construction of full-length MnSOD cDNA of chickens. Compared with the conventional end-to-end PCR or subcloning, this method, called one-step 3’RACE, is fast, economical and highly specific. It especially fits the rapid construction of full-length cDNA by RACE method.     

cDNA末端快速扩增技术及其应用*

摘要：cDNA末端快速扩增（RACE）技术是一种快速获得cDNA的3′和5＇端的方法。本文从RACE的原理出发,指出其技术本身存在的优缺点,阐述了RACE操作中须注意和不容忽视的技术要点,并对前人对RACE技术所做的改进加以总结,最后对RACE技术的应用前景给予了展望。Abstract: Rapid amplification of cDNA end (RACE) technique is a method of which the 3’ and 5’ fragments of cDNA can be rapidly obtained. In this review, the advantages and shortcomings RACE manipulation were pointed out and some important technical points in RACE protocols in the previous literatures were summarized.     

一种高效获取基因5′末端的RACE方法

RACE技术是一种快速高效克隆基因5′末端和3′末端的方法,是获取基因全长的主要手段之一,但是RACE技术本身也存在一些缺点。我们在前人改良的RACE技术基础上进一步优化RACE技术,获得了一种操作简单、快速、高效、成本低廉的改良RACE方法,该方法适合于大量基因5′末端的获取,可以在普通实验室推广应用。     

差异显示和RACE技术的发展与应用

差异显示是一套快速有效克隆差异表达基因的新技术 ,综述了该技术的原理及其技术改进、应用与展望。“快速扩增cDNA末端”(RapidAmplificationcDNAEnd)技术即RACE技术 ,是获得全长cDNA的快速有效的方法 ,阐述了该技术的发展与应用。     

cDNA末端快速扩增技术研究进展

全长 cDNA 的获得是基因克隆的重要内容,也是基因组研究中的一个重要方面．cDNA 末端快速扩增技术(RACE)是获得全长 cDNA 的主要辅助手段之一,从 RACE 的原理出发,指出该技术本身存在的优缺点,阐述 RACE 操作中不容忽视的技术要点,对前人对 RACE 的改进加以总结．     

RACE技术研究进展与展望

近年来,RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,即cDNA末端快速扩增技术,是一种快速扩增cDNA的5′和3′末端的有效方法,在扩增全长cDNA方面得到了广泛的应用。综述了RACE技术的研究进展,总结了优化RACE技术几个关键环节。最后展望了RACE技术的发展。     

棉花类LRR抗病蛋白(GhLRR-RL)基因的克隆及表达分析

从棉花胚株的cDNA－AFLP片段中,选取一个与拟南芥类LRR抗病原因（LRR－RL）序列相似的片段,用RACE方法延伸其3′和5′未知序列,得到一个棉花类LRR抗病蛋白的全长cDNA序列（GenBank登录号：AY040532）。该cDNA长1259bp,包含一个987bp的开放阅读框,具有Poly（A）加尾信号。推测蛋白质包含329个氨基酸,其中大部分是LRR区,其序列符合膜外LRR的共有序列LXXLXXLXXLXLXXNXGXIPXX。序列和结构比例分析表明：该棉花LRR－RL蛋白与拟南芥的两个类LRR抗病蛋白高度同源,而与植物的其他LRR蛋白结构不同,推测LRR－RL蛋白属于一类新的LRR蛋白。斑点杂交和3′RACE扩增表明,棉花LRR－RL基因具有组成性表达的特点。