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1.
目的:建立无线粒体DNA(mtDNA)的人肺腺癌ρ~0A549细胞系。方法:在含50 ng/mL溴化乙锭(EB)、100μg/mL丙酮酸钠和50μg/mL尿嘧啶核苷的RPMI1640细胞培养基中传代培养A549细胞;用低剂量EB连续诱导培养35 d后,采用光镜观察、TaqMan探针法实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹鉴定无mtDNA的ρ~0A549细胞系;采用MTT法测定ρ~0A549细胞增殖曲线。结果:倒置显微镜下野生型ρ~+A549细胞为多角形,ρ~0A549细胞形态呈拉长枝状;qPCR结果显示,低剂量EB诱导35 d的ρ~0A549细胞中无mtDNA的存在。Western印迹结果显示,ρ~+A549细胞中能表达核基因编码的线粒体蛋白SDHA和ATP5A,也能表达线粒体基因组编码的蛋白MT-COXI和MT-ATP6;ρ~0A549细胞中无MT-COXI和MT-ATP6蛋白表达,但核基因编码的SDHA和ATP5A蛋白能够正常表达。MTT结果显示,与ρ~+A549细胞相比,ρ~0A549细胞生长速度明显减慢,差异有统计学意义(P0.05)。结论:构建和鉴定了无mtDNA的人肺腺癌ρ~0A549细胞系,为后续探讨mtDNA缺失或突变与人肺腺癌发生之间的关系奠定了实验基础。  相似文献   
2.
鸡含锰超氧化物歧化酶cDNA克隆及序列分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
 为弄清鸡含锰超氧化物歧化酶 (manganese containingsuperoxidedismutase ,MnSOD)的cDNA序列 ,以开展动物锰营养学的深入研究 ,根据已知鸡MnSOD的N端氨基酸序列设计简并引物 ,应用 3′RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术 ,扩增克隆了鸡心肌MnSOD 990bp的 3′cDNA片段 .再根据 3′RACE片段测序结果设计引物进行 5′RACE ,结果获取了一个与 3′RACE片段相互重叠的鸡心肌MnSOD 52 1bp的 5′RACE片段 ,并对其进行了克隆测序 .最后根据 3′RACE片段和 5′RACE片段序列信息进行拼接 ,从而获取鸡MnSODcDNA的全序列信息 .研究结果表明 :鸡MnSODcDNA全长为 110 8个核苷酸 ,其中 5′非翻译区 2 5个核苷酸 ,编码区 675个核苷酸 ,3′非翻译区 4 0 8个核苷酸 ,编码一个长 2 2 4个氨基酸残基的蛋白质前体 .其中信号肽长 2 6个氨基酸残基 ,成熟肽长 198个氨基酸残基 ,分子量为 2 2kD .与人、大鼠、线虫、果蝇等真核生物MnSOD氨基酸序列的同源性分别为82 4 %、84 .7%、62 .4 %、59.3% .  相似文献   
3.
目的:线粒体转录终止因子2(MTERF2)是线粒体类核的重要组成成分,且参与线粒体基因的表达调控。本研究旨在阐明MTERF2基因在体外培养的人类正常子宫颈上皮细胞株和子宫颈癌细胞株中的表达情况,并进一步探讨MTERF2对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR和Western印迹检测正常子宫颈上皮细胞株(End1/E6E7)和子宫颈癌细胞株(HeLa、SiHa、C-33A、C4-1、CaSki)中MTERF2 mRNA及其蛋白质的表达情况;分别构建MTERF2稳定过表达或下调表达的子宫颈癌HeLa细胞株,通过XTT实验、细胞划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、克隆形成实验和流式细胞术等方法观察MTERF2基因过表达或表达下调对子宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。结果:MTERF2蛋白及mRNA在子宫颈癌细胞株中的表达水平均低于正常宫颈上皮细胞株。与对照组相比,稳定过表达MTERF2的子宫颈癌HeLa细胞增殖能力下降,同时子宫颈癌HeLa细胞的克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力均显著下降;细胞周期出现G1/S期阻滞,周期蛋白D1和pRb蛋白的表达水平明显下降。下调MTERF2表达的子宫颈癌HeLa细胞的增殖能力、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力均有所增强,且未出现细胞周期阻滞。此外,稳定过表达或下调MTERF2表达对子宫颈癌HeLa细胞凋亡均没有显著影响。结论:MTERF2基因在子宫颈癌细胞株中的表达水平低于正常子宫颈上皮细胞株,且负调控子宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,提示其可能在子宫颈癌发生发展中发挥类似抑癌基因的作用。  相似文献   
4.
一步3’RACE快速构建鸡MnSOD全长cDNA克隆Rapid   总被引:1,自引:0,他引:1  
卜友泉  罗绪刚  刘彬  李素芬 《遗传》2004,26(4):519-521
本研究尝试将触减 PCR与3’ cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术进行结合,仅用一条特异性引物和一条通用引物,成功地实现了从3’末端cDNA库对鸡含锰超氧化物歧化酶(manganese-containing superoxide dismutase,MnSOD)全长cDNA的一步3’RACE快速构建。与常规使用的末端PCR或亚克隆方法相比,该法具有快速、省时、经济和特异性好的优点。Abstract: RACE(rapid amplification of cDNA ends) is a popular technique to rapidly obtain the full-length cDNA. After obtaining the 3’cDNA and 5’cDNA fragments with a overlapped region by 3’RACE and 5’RACE, the full-length cDNA could be generated by end-to-end PCR or subcloning. In this study, 3’RACE combined with touch-down PCR was successfully used for the rapid construction of full-length MnSOD cDNA of chickens. Compared with the conventional end-to-end PCR or subcloning, this method, called one-step 3’RACE, is fast, economical and highly specific. It especially fits the rapid construction of full-length cDNA by RACE method.  相似文献   
5.
近几十年以来,随着生命科学的发展,已被生理学家们对肿瘤及治疗肿瘤的认识不断加深,从化学药物到天然植物药(如紫杉醇),再到当前的免疫靶向治疗药物(如以肿瘤细胞膜为靶点和以肿瘤血管生成为靶点的抗体药物)。科学家们通过对抗体分子的人源化改造,新型抗体分子的研究,药物可分解性无毒性等多方面的研究,使得抗肿瘤药物进入了一个全新的新时期,寄望研究出对癌症患者更友好更有效的药物。  相似文献   
6.
目的:研究金刚藤联合妇科千金片对慢性盆腔炎(CPID)患者血液流变学和炎症因子的影响。方法:选择从2016年2月到2019年5月在我院接受治疗的CPID患者204例进行研究。依照随机数字表法将患者划分为观察组以及对照组各102例,对照组患者予以妇科千金片治疗,观察组患者在此基础上另予以金刚藤治疗,两组均治疗6周,对比两组的疗效、临床指标、血液流变学指标以及炎症因子的水平。结果:观察组的痊愈率、总有效率均分别高于对照组,观察组的无效率低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。观察组体温恢复时间、腹痛消失时间、抗生素应用时间以及住院时间均短于对照组(P0.05)。治疗后两组的低切全血黏度、高切全血黏度、血浆黏度(PV)、纤维蛋白原(FIB)水平均明显低于治疗前,且观察组较对照组降低(P0.05)。治疗后两组的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及C反应蛋白(CRP)水平均明显低于治疗前,且观察组较对照组降低(P0.05)。结论:CPID患者给予金刚藤及妇科千金片联合治疗可明显改善临床指标,且有助于其机体内血液流变学及炎症症状的改善,值得临床推广应用。  相似文献   
7.
EGFR单克隆抗体重链可变区(VH)和轻链全长(L)经连接肽连接而成的单链抗体(L-L-VH)进行生物信息学的分析。预测其的蛋白结构及特征。通过分析,从而在功能与结构方面获得有价值的信息,为设计EGFR ScFv的抗肿瘤药物的下一步研究方案的制定提供依据。  相似文献   
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