改良高锰酸钾-草酸脱黑色素法在黑色素瘤苏木素-伊红染色和免疫组织化学检测中的应用

目的通过比较不同条件下高锰酸钾-草酸脱黑色素法在苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)和免疫组织化学检测中的应用,探讨最佳脱色条件。方法取富含黑色素的黑色素瘤组织切片,分别在40℃、45℃、50℃、55℃的0.5%高锰酸钾中脱色,每种温度下分别孵育2min、4min、6min、8min,然后1%草酸溶液处理30s×3次,水洗1min,比较HE染色效果,选取效果最好的高锰酸钾脱色条件(温度、时间)。基于HE最佳染色条件,将高锰酸钾处理时间减少2min,1%草酸溶液处理30s×3次,观察免疫组化染色效果。结果标本经0.5%高锰酸钾溶液,55℃水浴加热4min,1%草酸溶液处理30s×3次,HE染色效果最好;在此基础上,将处理时间减少到2min,免疫组织化学染色效果更好。结论改良后的高锰酸钾-草酸脱黑色素法既能彻底脱去组织内的色素颗粒,又能较完整的保留组织的抗原性,满足了临床病理对恶性黑色素瘤的诊断及鉴别诊断的需求。     

改良革兰染色法在显示石蜡切片真菌中的应用

目的建立真菌的病理切片改良革兰染色法。方法选取确诊真菌感染的组织蜡块,切若干空白片,通过苏木素-伊红染色（HE）、高碘酸-无色品红染色（PAS）、六胺银染色（GMS）、改良革兰染色后,比较改良革兰染色法的染色效果。结果改良革兰染色法的染色效果好,该法具有易操作、染色效果稳定等优点。结论改良革兰染色法能够清晰地显示出组织切片中的真菌,并且染色效果稳定,在检测组织中的真菌时可发挥重要的辅助诊断价值,具有广泛的应用前景。     

冰冻切片的H&E和LFB染色技术的优化及其在自身免疫疾病中的应用

该文旨在探讨基于冰冻切片样品进行苏木素–伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和快蓝(luxol fast blue,LFB)染色方法的优化及其在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)组织病理分析中的应用。取正常及EAE建模后的C57BL/6小鼠脊髓样品各5份,每份脊髓样品一分为二,分别制成冰冻切片和石蜡切片样品,通过设置不同优化条件对这两组切片进行HE和LFB染色,比较两组切片染色的结果。石蜡切片经过HE染色和LFB染色后细胞的形态结构和组织结构清晰,冰冻切片HE染色和LFB染色后细胞结构清晰度几乎和石蜡切片一致,进一步将该方法应用于分析β-arrestin2基因敲除对于小鼠EAE发生中的病理变化,发现能够很好地重复出基因敲除加重EAE疾病这一现象。冰冻切片染色优化后,基于冰冻切片进行HE染色和LFB染色可以达到石蜡切片类似的效果,并且实验过程简洁快速,大大缩短了实验时间,提高了效率,可以较好地应用于分析自身免疫疾病病理变化,该优化方法将在自身免疫疾病特别是多发性硬化动物模型的研究中有广泛的应用。     

利用微波固定组织的收缩率

目的探讨利用微波辐射固定、微波辐射与固定液结合固定组织的收缩程度。方法将组织分成40组,用一定强度的微波辐射或一定强度的微波辐射与不同固定液结合方法固定动物组织,并制做石蜡组织切片和HE染色,在此过程中测定各步骤前后的组织块体积,计算出收缩率。结果与结论一定强度的微波辐射和一些微波辐射与固定液结合方法固定的组织收缩率低,这些组织的切片具有细胞质均匀,染色鲜艳,细胞核大而清晰的良好效果。     

不同抗原修复方法在陈旧性石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化中的比较

目的探讨不同抗原修复方法在陈旧性石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化中的效果。方法选取2010年1月至2012年4月本实验室保存的陈旧组织石蜡切片样品76例,所有样品组织均取自乳腺癌患者,各取连续3张切片分别归入试验组、高压组和微波组。微波组和高压组按照常规加热修复法处理相应患者石蜡切片,试验组在pH为3.5±0.1的柠檬酸盐缓冲液中室温修复15min。比较三组切片的抗原修复效果。结果三组切片经过不同的处理方法修复后,肿瘤细胞染色结果显示,试验组染色强度及高阳性比例分布优于高压组和微波组,差异具有统计学意义(χ~2=11.122、14.468、12.859、13.267,P0.05)。综合阳性标记分数显示,试验组阳性分数多为++、+++,与高压组、微波组分布比较差异有统计学意义(χ~2=13.713、10.331,P0.01)。试验组阳性率明显高于后两组,差异具有统计学意义(χ~2=6.199、4.475,P0.05)。试验组经修复后的脱片率(χ~2=22.800、27.059,P0.01)及折损率(χ~2=64.083、40.827,P0.01)均明显低于高压组、微波组。结论常温下pH为3.5±0.1柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复,能减少组织脱片及折损的发生率,提高切片修复效果。     

室间质控中AB-PAS染色的异常着色原因分析

目的 分析室间质控工作中AB-PAS染色异常着色产生的原因。方法 选取有局部肠上皮化生的完整胃壁组织的连续切片,分别进行PAS和AB单一染色,以及以下3种不同顺序的AB、PAS和Mayer苏木精（Mayer）联合染色：ABPAS-Mayer、PAS-AB-Mayer或PAS-Mayer-AB联合染色。结果 单一PAS染色时,胃黏膜上皮内的中性黏液和化生肠上皮杯状细胞内的混合性黏液均显示玫瑰红色;单一AB染色时,仅化生肠上皮杯状细胞内的混合性黏液显示湖蓝色;AB-PASMayer联合染色时,胃小凹上皮呈玫瑰红色,化生肠上皮呈紫蓝色,差异明显且细胞核着色清晰;PAS-AB-Mayer联合染色时,胃小凹上皮和化生肠上皮内杯状细胞均呈蓝紫色,无法区别,但细胞核着色正常;PAS-Mayer-AB联合染色时,胃小凹上皮和化生肠上皮内杯状细胞均呈蓝紫色,无法区别,而且细胞核着色不佳。结论 行AB和PAS联合染色时必须严格按照先行AB染色后行PAS染色,最后行苏木素Mayer染色的染色步骤,不能将染色顺序随意打乱,否则会出现中性、酸性和混合性黏液物质混染,或者细胞核不着色等异常染色结果,进而干扰病理诊...     

加速苏木精染色液“成熟”的两种方法

海登汉氏(Heidenhain’s)苏木精染色法是一种经典的细胞核和染色体的染色法,广泛地用于动、植物制片和细胞学的压片中,而且对很多难于被其他染料着色的材料,用此法仍能取得比较良好的效果。但该法中的苏木精染色液配后不能马上使用,需放在空气中经一到二个月“成熟”后才能使用。“成熟”即苏木精氧化成苏木素(氧化苏木精)的过程:     

应用微波辐射促进组织块浸银染色

目的：探索微波辐射对组织块浸银染色各步骤的作用及微波在其中的应用方法。方法：在组织块浸银染色过程中,对组织块的固定,浸银,还原等步骤进行不同强度的微波辐射处理。结果：微波辐射明显促进了浸银,还原作用,应用适宜强度的微波辐射染色效果比常规染色有更多的优点。结论：恰当地应用微波辐射缩短组织块浸银染色时程,切实可行。     

HE染色程序的使用和维护

探讨和总结苏木素-伊红染色（HE染色）程序各步骤的使用以及维护更新方法,使用该方法不但延长了程序的使用周期,节约大量的试剂,而且经过染色后的切片质量稳定,具有广泛的应用推广价值。     

微波技术在骨骼肌染色中的应用

均高于对照组;在形态学的实验教学中,骨骼肌纤维的铁苏木精染色是观察骨骼肌横纹的经典方法,传统的铁苏木精染色方法存在着耗时较长且染色不够均匀等不足。近几十年来,微波照射（Microwave irradiation,MWI）被成功地引用到组织固定、组织化学、免疫组织化学等研究中。MWI具有波长短、频率高,能使微波场内某些化学物质迅速地穿透物体,促进液体浸入标本等特点。本实验将微波辐射应用于骨骼肌纤维染色,并与常规室温下的染色进行对照,经反复探索得到较为满意的效果。     

EBER原位杂交结合CK免疫组织化学双染在诊断鼻咽癌中的应用价值

目的探讨全自动免疫组织化学仪行EB病毒早期RNA(Epstein-Barr virus early RNA,EBER)与细胞角蛋白(cytokeratin,CK)双染在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法收集我院2018年1月至2019年12月鼻咽活检组织60例,根据诊断结果进行分组,A组为鼻咽非角化型未分化性癌30例,B组为上皮性病变30例。在VENTANA全自动免疫组织化学仪平台上分别对这两组病变进行CK免疫组织化学染色、EBER原位杂交、EBER原位杂交结合CK免疫组织化学(EBERCK)双染标记,其中双染再分为是否复染苏木素,比较染色情况。结果免疫组织化学CK单染A、B组均可见阳性细胞;原位杂交EBER单染A组鼻咽癌细胞阳性,B组表达呈阴性;EBER-CK双染A组鼻咽癌细胞呈双阳性,B组病变细胞呈CK阳性、EBER呈阴性,未见双阳性表达;EBER-CK双染复染苏木素后的表达与未复染苏木素的表达相同,但对比差,不易观察。结论全自动免疫组织化学仪行EBER-CK双染有助于鼻咽癌组织学诊断,不复染苏木素效果更佳,值得推广。     

脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色的影响

目的:探讨脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色影响.方法:用不同脱钙液处理小鼠颅骨标本,组织切片后进行苏木素一伊红染色、甲苯胺蓝染色、醛品红染色以及免疫组织化学染色.结果:经过不同脱钙液处理后的颅骨组织切片组织结构保存完好,肥大细胞的组织化学染色(甲苯胺蓝和醛品红染色),及肥大细胞中胰蛋白酶的免疫组织化学染色清晰.结论:不同脱钙液(8%盐酸脱钙液、EDTA脱钙液、混合酸脱钙液)处理不影响鼻腔粘膜中肥大细胞的组织化学和免疫组织化学染色.     

人结肠切片三种特殊染色的比较

目的比较人结肠组织切片阿利辛蓝AB染色(Alcian Blue)、过碘酸雪夫氏PAS染色(Periodic Acid Schiff)及洋红三种染色方法及镜下特点。方法取人结肠,Carnoy氏固定液固定,对结肠组织进行阿利辛蓝AB染色、PAS染色及洋红染色,光学显微镜下观察染色效果。结果三种染色都能清晰显示结肠组织的结构,尤其对结肠的粘膜层进行了观察。阿利辛蓝染色使结肠上皮吸收细胞的细胞核染为红色,杯状细胞中的黏液染为蓝紫色;洋红染色使结肠上皮吸收细胞的细胞核染为蓝紫色,杯状细胞中的黏液染为红色。结论阿利辛蓝和洋红染色均能清楚显示杯状细胞中的黏液,且染色后的细胞质和细胞核成为互补色,结构清晰,对比明显。     

正交设计优选五味子果实中总木脂素提取工艺

目的:比较不同方法对北五味子总木脂素提取的影响,优选最佳提取工艺方法。研究五味子木脂素抗微波辐射损伤作用。方法:以干燥北五味子果实为原料,分别采用传统加热回流法、超声提取法、微波提取法、微波—超声提取法提取北五味子总木脂素,对这四种提取方法分别进行正交试验分析,以确定最佳提取工艺。结果:通过结果比较分析,以微波提取工艺结果最佳,在微波提取功率为200W,乙醇体积分数为80%,提取时间为40min,料液比为1:12的提取条件下,北五味子总木脂素的产量达到了16.44mg/g,使得木脂素的提取产量较传统加热回流法、超声提取法、微波—超声提取法得到了显著的提高。     

介绍一种陈旧苏木精染液复苏的方法

苏木精是组织切片制作常用细胞核染料 ,以Harris苏木精染液最为常用。Harris苏木精染液在使用一段时间后 ,染色能力逐渐减弱 ,造成细胞核着色困难 ,染色时间延长 ,虽能着色 ,但依然着色浅淡 (图 1,2 )。为此 ,我们采用在陈旧Harris苏木精染液中加入苏木精酒精液 ,经煮沸冷却后加冰醋酸的方法 ,使Harris苏木精染液恢复染色能力 ,收到了较好的效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1 1材料 (1) 5 %苏木精酒精液苏木精(E·Merck进口分装 ) 5 g溶于无水乙醇 10 0ml,放置 4～ 5周后使用。 (2 )陈旧Harris苏木精染液80 0ml。1 2方法在 80 0ml陈旧Ha…     

虫草素对786-O和ACHN肾癌细胞系增殖、迁移和凋亡机制探究

探究肾癌细胞系经虫草素给药刺激后,细胞凋亡及迁移的机制。体外培养肾癌786-O细胞系和肾癌ACHN细胞系,采用MTT法、细胞迁移实验、HE染色、免疫荧光染色及蛋白免疫印记法;检验不同浓度虫草素处理肾癌细胞系增殖抑制率、细胞迁移情况、细胞形态变化和细胞核形态差异,检验凋亡相关基因蛋白表达情况,探究虫草素诱导肾癌细胞的凋亡机制。随着浓度剂量提高,虫草素能够显著促进肾癌细胞系凋亡,抑制迁移。形态学研究表明,HE染色观察发现癌细胞数量明显降低,并且细胞核明显变大。免疫荧光染色发现MMP-2、MMP-9和BCL-2蛋白表达显著降低,Bax、Casepase-3和Casepase-7蛋白表达显著增加,肾癌细胞可通过AKT/mTOR信号通路诱导肾癌细胞凋亡。     

光波/微波组合-EDTA修复COX-2抗原及其在乳腺癌的表达及意义

目的观察不同抗原修复方法及修复液对COX-2抗原表达的影响及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法用光波/微波、高压锅结合枸椽酸缓冲液、EDTA作抗原修复处理,分别用即用型和浓缩型COX-2单克隆抗体对70例乳腺癌石蜡切片进行免疫组织化学染色。结果①光波/微波组合-EDTA、CA修复浓缩型COX-2的阳性率均比即用型COX-2的阳性率高(P0.01)。②高压锅抗原修复处理切片的免疫组化染色阳性率略比光波/微波的免疫组化染色阳性率高,但无统计学意义(P0.05);高压锅抗原修复处理的切片组织结构破坏程度和掉片情况均比光波/微波处理的重;③EDTA修复处理切片的免疫组化染色阳性率明显比用CA修复处理切片的免疫组化染色阳性率高(P0.01)。④COX-2表达水平与淋巴结转移有显著关系(χ2=5.24,P0.05);与年龄、肿瘤大小、组织学类型和分级之间无明显关系(P0.05)。结论用光波/微波-EDTA修复COX-2抗原,浓缩型COX-2抗体标记可明显提高免疫组织化学染色的敏感性,具有定位准确、阳性率高、操作简单、安全、组织结构保存好、不易掉片等优点;COX-2的表达与淋巴结转移显著相关,可作为乳腺癌的预后指标。     

解淀粉芽孢杆菌B15抑菌物质对葡萄灰霉病灰葡萄孢的抑菌机理

【目的】利用荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜技术初步探讨解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloquefaciens)B15菌株发酵液中的抑菌混合物质伊枯草菌素A(iturin A)和芬芥素(fengycin)对葡萄灰霉病病原菌灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的抑菌机理。【方法】采用琼脂稀释法讨论解淀粉芽孢杆菌B15发酵液对灰葡萄孢的抑菌活性。利用台盼蓝(trypan blue)染色、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)、双氢罗丹明123(DHR123)、钙离子探针fluo-3/am和Annexin V-PI探针染色来观察解淀粉芽孢杆菌B15发酵液对灰葡萄孢细胞膜和菌丝形态、细胞核、活性氧、钙离子和磷脂酰丝氨酸层的影响。【结果】抑菌活性实验发现解淀粉芽孢杆菌B15发酵液对灰葡萄孢具有良好抑菌效果。荧光显微镜台盼蓝染色观察发现,经B15发酵液处理过的灰葡萄孢出现菌丝畸形、菌丝体粗大、尖端肿胀并被染成蓝色和明显的液泡化现象。同时未在处理组中观察到细胞内容物泄漏,说明处理组菌丝细胞膜未发生破损。该结果表明在此次试验中,B15发酵液中的抑菌有效物质不以破损细胞膜的方式直接导致灰葡萄孢的死亡。激光共聚焦显微镜观察结果发现,处理组的灰葡萄孢菌丝出现典型的细胞凋亡现象、染色质固缩、细胞核裂解、磷脂酰丝氨酸层外翻、活性氧和钙离子积累。【结论】该实验表明解淀粉芽孢杆菌B15发酵液以诱导细胞凋亡的形式来抑制灰葡萄孢菌丝的生长。     

快速褪黑色素方法在免疫组织化学染色中的应用

目的探讨在恶性黑色素瘤组织中如何快速褪除黑色素,便于进行免疫组织化学检测和观察。方法选取20例恶性黑色素瘤组织石蜡切片,分别应用0.5%高锰酸钾水浴法、0.25%高锰酸钾溶液滴入法、15%过氧化氢浸泡法和传统过氧化氢脱色法进行褪黑色素处理,处理过的切片分别进行免疫组织化学和HE染色,比较染色结果。结果以0.25%高锰酸钾溶液滴入法处理后的效果较为理想:HE染色显示切片完整,色素颗粒完全去除,组织形态和细胞形态清晰;免疫组织化学染色结果清晰易判读,具有较强的敏感性和特异性。结论 0.25%高锰酸钾溶液滴入法可作为恶性黑色素瘤去除色素颗粒的有效方法。     

HistoGel预包埋法在微小组织石蜡切片中的应用

目的：探讨微小组织HistoGel预包埋的石蜡切片制作方法和优势。方法：选择拟胚体(embryoid body, EB)为微小组织,将人 类胚胎干细胞(human Embryonic Stem Cell, hESC)切割成小块,用拟胚体培养基在低贴附培养皿中悬浮培养形成拟胚体。收集拟 胚体,4 %的多聚甲醛固定。将HistoGel 加热到60 ℃熔解,离心去除拟胚体中的固定液,把液态的HistoGel 加到拟胚体上,调整拟 胚体的相对位置使其相对集中,待胶冷却凝固,将含有拟胚体的胶块取出,进行常规的石蜡切片操作,包括脱水、透明、浸蜡、包 埋、切片和苏木素- 伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色。显微镜下观察拟胚体的形态,并用拟胚体的形态完好度来评判这种方法。结 果：HistoGel 仅在60 ℃便可熔解,室温可以冷却凝固,含有拟胚体的胶块在整个操作过程中很方便。展片过程中,石蜡和HistoGel 能够保持平整。HE 染色的结果可以看出,拟胚体内部结构完好,细胞核和细胞质清晰可辨。结论：HistoGel可以作为一种微量细 胞组织的预包埋胶制作石蜡切片,而且相比琼脂预包埋,HistoGel 因其操作更加方便和特有的物理特性显示出更多的优点。