蜡螟在念珠菌属真菌动物模型中应用价值的探究

目的构建蜡螟的念珠菌属真菌动物模型并探究真菌对蜡螟的细胞、组织、器官的影响以及念珠菌属真菌蜡螟模型的应用价值。方法用注射器吸取一定量的菌液注入蜡螟体内,在30℃培养箱中培养一定时间后,取出其中的一小部分蜡螟进行解剖,观察真菌菌丝对蜡螟肠道组织的损伤情况,取另一小部分蜡螟做病理切片,同时记录不同时间段蜡螟的生存死亡情况;将空白蜡螟断头取血,分离淋巴细胞后用DMEM培养,用热灭活真菌处理蜡螟淋巴血细胞,37℃培养3 h后,分别用ROS(氧化应激水平)探针和溶酶体探针标记ROS、溶酶体,观察真菌刺激细胞时的自噬水平的变化。结果真菌菌丝对蜡螟的肠道组织产生损伤,病理切片显示大量菌丝生长,细胞吞噬真菌后,ROS升高,溶酶体与菌共定位。结论念珠菌属真菌的蜡螟模型中,真菌对蜡螟的细胞、组织、器官均有损伤,蜡螟的细胞自噬水平升高,并且此模型具有易操作,价格低廉,便于进行统计学分析等优势。     

不同形态的烟曲霉对巨噬细胞自噬水平的影响

目的探究烟曲霉静息孢子、膨胀孢子以及菌丝对巨噬细胞自噬水平的影响。方法培养烟曲霉并收获静息孢子,在沙保弱液体培养基中振荡不同时间获得膨胀孢子及菌丝。以3种形态的烟曲霉分组处理RAW264.7细胞,免疫印迹法检测LC3BⅡ蛋白的表达量,逆转录PCR检测自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12 mRNA的转录水平。观察不同形态的烟曲霉刺激GFP-LC3B-RAW264.7细胞后GFP-LC3B的表达与定位。结果膨胀的烟曲霉孢子及菌丝刺激巨噬细胞后LC3BⅡ表达水平升高;Atg5与Atg12 mRNA的转录均明显增高,Atg7转录水平无显著变化;膨胀孢子诱导LC3B呈斑点样聚集并与之共定位,烟曲霉菌丝刺激后自噬体增多。结论烟曲霉膨胀孢子与菌丝能显著提高巨噬细胞自噬水平,静息的分生孢子不能引起巨噬细胞自噬功能的应答。     

维生素D对烟曲霉感染的肺巨噬细胞 自噬机制的初步研究

目的探究维生素D在鼠肺细胞感染烟曲霉后对细胞自噬的影响。方法用一定量的烟曲霉活化孢子感染细胞后,一组细胞加入维生素D(维生素D组),一组细胞加入生理盐水,感染一定时间后用溶酶体探针检测自噬相关分子的表达;收集各组细胞并裂解细胞,离心取上清,用Western-blot法检测上清液中的LC3BII、Dectin-1及ROS的表达水平。结果活化的孢子感染肺巨噬细胞后,维生素D组自噬体与溶酶体共定位减少、吞噬孢子的速率在减少以及ROS水平降低,其对应的胞内Dectin-1、ROS、LC3BII减少且差异有统计学意义。结论烟曲霉感染肺巨噬细胞后,维生素D可通过减弱细胞自噬体与溶酶体的融合并下调自噬信号通路蛋白的表达以达到抵抗烟曲霉感染的作用。     

蜡螟抗白假丝酵母菌自噬机制的初步研究

目的探究白假丝酵母菌感染蜡螟时蜡螟的自噬相关通路蛋白的表达情况。方法用一定量的白假丝酵母菌的活化孢子感染蜡螟,经过12h,解剖蜡螟收集蜡螟细胞并裂解细胞,用真菌活性检测试剂盒检测孢子活性;解剖蜡螟取肠道组织并用PI染死细胞。取不同感染时间段的淋巴细胞,用裂解液裂解,离心取上清,用Western blot法检测上清液中的Dectin-1、ROS、LC3Ⅰ/Ⅱ的表达水平。结果活化的孢子注射至蜡螟体内后,其活性受到抑制;蜡螟的肠道细胞被定位在上面的菌丝损伤并且孢子活性受到抑制。随着蜡螟感染白假丝酵母菌时间的递增,其自身的Dectin-1、ROS、LC3Ⅰ/Ⅱ的表达水平在不断增高且在感染24h最高。结论白假丝酵母菌感染蜡螟后,蜡螟的淋巴细胞和肠道细胞通过升高Dectin-1、ROS、LC3Ⅰ/Ⅱ的表达水平发挥杀伤孢子的作用。     

改良革兰染色法在显示石蜡切片真菌中的应用

目的建立真菌的病理切片改良革兰染色法。方法选取确诊真菌感染的组织蜡块,切若干空白片,通过苏木素-伊红染色（HE）、高碘酸-无色品红染色（PAS）、六胺银染色（GMS）、改良革兰染色后,比较改良革兰染色法的染色效果。结果改良革兰染色法的染色效果好,该法具有易操作、染色效果稳定等优点。结论改良革兰染色法能够清晰地显示出组织切片中的真菌,并且染色效果稳定,在检测组织中的真菌时可发挥重要的辅助诊断价值,具有广泛的应用前景。     

青蒿琥酯治疗肺烟曲霉感染自噬机制

目的探究青蒿琥酯在鼠肺感染烟曲霉后,对鼠肺自噬相关蛋白的表达影响。方法用一定量的烟曲霉的活化孢子感染鼠肺,建立肺烟曲霉病模型。同时用青蒿琥酯注射一组鼠肺,两性霉素B注射一组鼠肺,剩余的作为感染组。24h后,取各组鼠肺进行病理切片染色,观察各组病理情况;取各组鼠肺的组织并匀浆,收集各组的孢子,用真菌活性检测试剂盒检测孢子活性并将肺巨噬细胞进行分离、裂解,离心取上清,用Western-blot法检测上清液中的Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达水平。结果青蒿琥酯注射组的鼠肺病理切片中的孢子比感染组数量少且聚集在一起,未长出菌丝,而体外分离的真菌孢子,青蒿琥酯组的活性明显受到抑制。经Western-blot显示青蒿琥酯具有增强肺巨噬细胞Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达。结论青蒿琥酯可通过抑制烟曲霉的活性和增强鼠肺巨噬细胞的自噬水平,对抗鼠肺烟曲霉感染。     

某校大学生漱口杯卫生微生物状况的调查研究

目的了解大学生漱口杯卫生污染状况及其影响因素,为大学生疾病防控工作提供参考。方法随机抽取150名安徽理工大学大学生漱口杯样本并填写漱口杯使用习惯等相关调查表,采用倾注平板法和MPN法检测漱口杯菌落总数和大肠菌群。结果(1)调查人群中口腔牙龈经常出血者占26.00%,男女间差异无统计学意义(P0.05),牙龈出血与菌落总数超标之间存在着关联性(χ~2=4.528,r=0.174,P0.05);(2)150个漱口杯样本菌落总数超标率为60.00%,大肠菌群检出率为49.00%,大肠菌群严重超标率占大肠菌群检出的48.63%,菌落总数超标与大肠菌群检出率之间存在着关联性(χ~2=12.487,r=0.277,P0.01);(3)单因素分析显示:漱口杯材质、盛放物品样数、是否控干存放、牙刷头放置方向、刷牙水温度样本的菌落总数不合格率与大肠菌群检出率差异均分别具有统计学意义(Z=11.700、9.689、7.594、4.804、14.074;χ~2=3.870、4.120、4.410、6.387、8.100,P0.05);(4)Logistic回归分析表明漱口杯材质、刷牙水温度、使用次数/日是漱口杯菌落总数超标的影响因素。结论大学生口腔健康不容乐观,漱口杯污染状况严重且被忽视,造成其污染的因素是多方面的,应通过各种途径加强大学生关注漱口杯卫生的意识。     

青蒿琥酯抗蜡螟烟曲霉感染自噬机制初步研究

目的探究青蒿琥酯在蜡螟感染烟曲霉后,对蜡螟的自噬相关蛋白的表达影响。方法用一定量的烟曲霉的活化孢子感染蜡螟,经过1 h,用青蒿琥酯注射一组蜡螟,两性霉素B注射一组蜡螟,剩余的作为感染组。12 h后,取各组蜡螟进行病理切片染色,观察各组的病理情况;取各组的蜡螟的淋巴液,收集各组的孢子,用真菌活性检测试剂盒检测孢子活性并将淋巴细胞分离、裂解,离心取上清,用Western-blot法检测上清液中的Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达水平。结果青蒿琥酯注射组的蜡螟病理切片中的孢子比感染组数量少且聚集在一起,未长出菌丝,而体外分离的真菌孢子,青蒿琥酯组的活性明显受到抑制。经Western-blot显示青蒿琥酯能增强淋巴细胞Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达。结论青蒿琥酯可通过抑制烟曲霉的活性和增强蜡螟淋巴细胞的自噬水平,对抗蜡螟烟曲霉感染。     

不同生长阶段的烟曲霉对果蝇自噬水平的影响

目的探究不同生长阶段的烟曲霉对果蝇自噬水平的影响。方法用沙保弱平板培养烟曲霉,收获静息孢子;用沙保弱液体培养基震荡培养烟曲霉,在不同时间收获膨胀孢子、菌丝。以3种形态的烟曲霉分组处理转基因果蝇,组织切片观察烟曲霉形态,Rt-PCR(逆转录PCR)检测自噬相关蛋白LC3BⅡ、Beclin-1mRNA的转录水平,Western blot检测LC3BⅡ、Beclin-1的表达量。结果组织切片观察菌的形态与注入时的形态相符,Rt-PCR检测LC3BⅡ、Beclin-1mRNA的转录水平升高,同时,感染膨胀烟曲霉孢子及菌丝组的果蝇LC3BⅡ、Beclin-1蛋白的表达水平升高。结论烟曲霉膨胀孢子及菌丝能显著提高果蝇自噬水平,而静息孢子不能引起果蝇自噬应答。