基于肿瘤个体化治疗药物筛选的异种移植模型评价策略

肿瘤组织异种移植(PDX)模型在遗传学、病理学和生物学特性等方面与患者的原发肿瘤具有较好的相似性,药物临床反应一致性高,在肿瘤个体化治疗领域显示出良好的应用前景。利用PDX模型开展肿瘤靶向药物筛选可有效指导临床用药。本文针对用于化疗药物筛选的PDX模型评价策略进行综述,总结了建模标准和质量控制要求,提出组织形态学、测序分析、特异性标志物和STR检测四种模型溯源性评价方法,综合衡量药物毒性作用、肿瘤体积变化趋势和TGD数学模型结果进行疗效评价,为PDX模型指导肿瘤个体化治疗提供良好的应用策略。     

miR-451a促进胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性

目的:探究miR-451a在胰腺癌吉西他滨耐药中的功能。方法:通过低浓度梯度递增法建立胰腺癌吉西他滨耐药细胞株,microRNA(miRNA)测序筛选耐药相关miRNA;细胞存活曲线、克隆形成实验及流式凋亡实验分析miR-451a对胰腺癌细胞耐药的影响;裸鼠成瘤实验检测在动物体内模型中miR-451a对胰腺癌吉西他滨耐药的调控作用;调取TCGA数据分析miR-451a表达水平与胰腺癌病人预后的相关性。结果:胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中miR-451a表达水平明显下调;miR-451a过表达增加胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性,增强了吉西他滨抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;miR-451a诱导了裸鼠皮下肿瘤对吉西他滨敏感;miR-451a低表达与胰腺癌患者不良预后相关。结论:miR-451a增强了胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性。     

固本抑瘤Ⅲ号方联合吉西他滨对人胰腺癌裸鼠异位移植瘤的抑瘤作用

目的探讨固本抑瘤Ⅲ号方以及与吉西他滨联合治疗人胰腺癌裸鼠异位移植瘤的抑瘤作用。方法将40只荷瘤裸鼠随机分为对照组、吉西他滨组、固本抑瘤Ⅲ号联合吉西他滨组、固本抑瘤Ⅲ号组,每组10只。于接种后第8天开始给药,观察指标为瘤重、裸鼠体重、移植瘤体积。结果吉西他滨组、固本抑瘤Ⅲ号联合吉西他滨组、固本抑瘤Ⅲ号组的抑瘤率分别为49.2%、68.9%和28.0%。固本抑瘤Ⅲ号联合吉西他滨组较吉西他滨组抑瘤作用更强(P0.05)。吉西他滨组、固本抑瘤Ⅲ号联合吉西他滨组、固本抑瘤Ⅲ号组移植瘤体积均较对照组明显降低,差异有显著性。固本抑瘤Ⅲ号联合吉西他滨组体重下降明显,体重较对照组、吉西他滨组及固本抑瘤Ⅲ号组明显下降,差异有显著性。结论固本抑瘤Ⅲ号方具有增加吉西他滨化疗治疗人胰腺癌裸鼠腋下移植瘤疗效的作用。     

吉西他滨联合多西他赛化疗引起尿失禁,临床案例报告

本研究报告了吉西他滨联合多西他赛化疗引起尿失禁的一例临床案例。我们运用Naranjo's评估量表分析了吉西他滨联合多西他赛化疗与尿失禁不良反应之间的相关性及紧密程度。分析了关于吉西他滨联合多西他赛化疗药品不良反应,阐述了吉西他滨联合多西他赛化疗引起尿失禁的可能机制。根据Naranjo's评估量表评分总分值为7分,说明了吉西他滨联合多西他赛化疗引起尿失禁的可能性较高,但是吉西他滨联合多西他赛化疗引起尿失禁的机制尚不明确,我们推测可能与多西他赛的神经毒性有一定关系,药物神经毒性引起膀胱与尿道平滑肌功能失调,导致尿失禁。然而,尿失禁的发病机制与多种因素有关,因此在临床上尚需更多病例观察以明其机制,从而有效改善相关药物不良反应的发生,提高患者的生存质量。     

Bevacizumab 联合吉西他滨对荷肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨抗血管生成药物Bevacizumab联合吉西他滨对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法:构建人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组、Bevacizumab组、吉西他滨组和联合用药组。观察用药前后肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;应用免疫组化检测肿瘤微血管密度(MVD);Western Blot检测Bcl-2蛋白的表达。结果:Bevacizumab和吉西他滨单药均能抑制肿瘤生长,两药联合疗效明显增强(P=0.000)。与对照组和吉西他滨组相比,Bevacizumab组和联合用药组能明显抑制肿瘤血管生成,MVD值均明显降低,以联合用药组最为明显(P均0.000)。Bevacizumab和吉西他滨单药均能下调Bcl-2的表达,两药联合下调作用明显增强。结论:Bevacizumab联合吉西他滨能增强对人肝癌裸鼠移植瘤的生长及微血管生成的抑制作用,其机制可能与调控Bcl-2的表达有关。     

非肌层浸润性膀胱癌患者TURBT术后吉西他滨与表柔比星膀胱灌注化疗的疗效比较及复发的危险因素分析

摘要 目的：对比非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）患者经尿道膀胱肿瘤电切术（TURBT）后吉西他滨与表柔比星膀胱灌注化疗的临床疗效,并分析复发的危险因素。方法：纳入徐州医科大学附属连云港医院2018年1月至2020年1月期间接收的NMIBC患者120例,均接受TURBT治疗。根据化疗用药方式的不同将120例NMIBC患者分为表柔比星组（n=58,表柔比星治疗）和吉西他滨组（n=62,吉西他滨治疗）,对比表柔比星组、吉西他滨组的免疫功能、肿瘤标志物变化,观察不良反应发生率及1年复发情况。采用多因素Logistic回归分析NMIBC患者行TURBT后复发的危险因素。结果：表柔比星组、吉西他滨组治疗后CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺升高,且吉西他滨组高于表柔比星组（P<0.05）;CD8⁺下降,且吉西他滨组低于表柔比星组（P<0.05）。表柔比星组、吉西他滨组治疗后癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19（CK19）和癌抗原199（CA199）均下降,且吉西他滨组低于表柔比星组（P<0.05）。表柔比星组、吉西他滨组不良反应发生率对比未见统计学差异（P>0.05）。表柔比星组、吉西他滨组1年复发率对比未见统计学差异（P>0.05）。将表柔比星组、吉西他滨组1年后复发的患者总和28例纳为复发组,其余未复发的92例纳为未复发组。单因素分析结果显示：NMIBC患者行TURBT后复发与肿瘤数目、最大肿瘤直径、肿瘤分化分级、临床分期有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：肿瘤数目为多发、最大肿瘤直径≧5 cm、肿瘤分化分级为低分化、临床分期为T1期为NMIBC患者行TURBT后复发的危险因素（P<0.05）。结论：与表柔比星化疗相比,吉西他滨化疗可更好的控制肿瘤疾病进展,有效保护机体免疫功能,两种化疗药物下安全性和复发率相接近。同时研究还观察到,复发受到多种因素影响,包括肿瘤数目、最大肿瘤直径、肿瘤分化分级、临床分期。     

吉西他滨联合顺铂序贯吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌

目的:观察吉西他滨联合顺铂序贯吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌的疗效与毒副反应。方法:71例经病理学诊断的晚期(Ⅲb-Ⅳ期)非小细胞肺癌患者,随机分成两组,观察组给予吉西他滨加顺铂化疗,序贯吉非替尼。对照组给予吉西他滨加顺铂化疗。结果:两组有效率(RR)为36.1%VS14.3%(P=0.0362);疾病控制率(DCR)比较x2=14.782,P<0.001;中位生存期(MST)为12.1月VS10.8月(P<0.05);有统计学差异;观察组除了皮疹、腹泻毒副反应较大外,其他与对照组相仿。结论:吉西他滨联合顺铂序贯吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌有较好的疗效和安全性,可以扩大样本继续观察。     

卡培他滨结合伊立替康治疗晚期结肠癌的临床研究

目的:卡培他滨结合伊立替康治疗晚期结肠癌的临床研究。方法:选取2014年5月-2015年5月在我院接受治疗的100例结肠癌患者作为本次的研究对象,随机将其分为观察组和对照组,n=50,观察组患者采用卡培他滨结合伊立替康治疗,对照组患者仅采用卡培他滨治疗,对比两组患者的临床治疗效果。结果:治疗后对比两组患者的总有效率,观察组为94.00%,对照组为68.00%;对比两组患者不良反应发生情况,观察组和对照组也存在差异,两组结果对比有统计学意义(P0.05)。结论:对晚期结肠癌患者采用卡培他滨结合伊立替康治疗临床效果显著,不良反应较少,值得在临床上推广应用。     

胃癌人源性异种移植模型制备中的问题与策略

总结患者来源的胃癌异种移植模型(patient-derived xenograft model,PDX)制备中存在的主要问题,提出相应的解决方案。介绍胃癌PDX模型在靶向药物研究中的独特优势,提出在强调肿瘤个体化模型的同时,要善于运用共性研究思维,分析模型的基因型特征开展肿瘤靶向治疗研究。     

转基因小鼠源性胰腺癌原位移植瘤模型的构建与评价

目的 构建转基因LSL-Kras^G12D/+LSL-Trp53^R172H/+Pdx1-Cre(KPC)小鼠胰腺癌原位移植瘤模型,为研究胰腺癌的发展机制和治疗策略提供稳定、可靠的药物临床前研究动物模型。方法 将KPC转基因小鼠的自发胰腺癌的组织块进行C57BL/6J小鼠胰腺原位移植,利用超声进行肿瘤监测,对原发肿瘤和传代肿瘤进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫荧光染色评价模型的肿瘤病理学特征。结果 KPC小鼠的自发肿瘤能够在C57BL/6J小鼠的胰腺上稳定生长,肿瘤增殖指标Ki67、基质纤维化标志物α-SMA、免疫细胞标志物CD45和CD206均稳定表达,该模型能够稳定地保留原发胰腺癌病理学特征,并发生与临床胰腺癌患者相似的广泛转移。结论 成功建立转基因小鼠源性胰腺癌原位移植瘤模型,该模型能够模拟出胰腺癌的基质环境和免疫细胞浸润情况,具有较好的稳定性和均一性,可以作为研究胰腺癌进展和治疗策略的有效药物临床前研究模型。     

人乳腺癌PDX模型的研究进展

乳腺癌病人来源的异种移植物(patient derived xenografts,PDX)不仅能忠实地保留患者肿瘤的分子表型和基因型变化,而且能够再现原发肿瘤的异质性,因此被应用于肿瘤耐药机制和抗肿瘤药物筛选的研究.该模型保持了患者肿瘤基因表达模式、突变状态、药物反应和肿瘤结构等生物学特性,在临床肿瘤治疗转化医学研究中具有不可替代的作用.PDX作为一个新的临床前评价肿瘤药物敏感性的工具越来越受关注.本文总结了乳腺癌PDX模型的发展历史,阐述了异种移植过程中病人细胞和动物的准备,以及该模型在抗肿瘤药物研发中的优点和局限性.总之,乳腺癌PDX模型研究已初见成效,但在其成功率、时效性和成本控制等方面还有待进一步优化.     

吉西他滨联合奥沙利铂对晚期胰腺癌合并肝转移的临床疗效观察

目的:探讨吉西他滨联合奥沙利铂对晚期胰腺癌合并肝转移的临床疗效及其安全性。方法:回顾性研究84例晚期胰腺癌伴有肝转移的患者,根据化疗方案分为实验组和对照组,每组42例,实验组给予吉西他滨联合奥沙利铂化疗(GEMOX方案),对照组给予5-FU化疗,治疗4周后,比较两组临床受益率、治疗有效率、无疾病进展生存期、1年生存率和不良反应的发生情况。结果:当转移癌体积小于肝体积75%时,对照组的临床受益率为6.06%,有效率为12.12%,而实验组的临床受益率为32.26%,有效率为58.06%,与对照组的患者相比均显著升高(P<0.05)。实验组中位无疾病进展生存期为18个周,21%的患者2年内达到无疾病进展,患者的平均生存期为37个周,在1年生存率为35%;而对照组中,中位无疾病进展生存期为9个周,1年生存率为0,实验组1年生存率显著高于对照组者(P<0.05)。两组不良反应发生情况无明显差别。结论:吉西他滨联合奥沙利铂治疗晚期胰腺癌合并肝转移的疗效优于以5-FU为主的化疗,且二组相比不良反应无明显差别,值得临床进一步研究。     

肝细胞癌原位与皮下PDX模型的方法学比较分析研究

目的构建肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)原位与皮下人源肿瘤异种移植(patient-derived xenografts,PDX)模型,并比较分析两者生长和病理学特点。方法收集肝癌患者的新鲜肿瘤组织,接种肝和皮下组织,比较分析两者生长特性、病理特征、成瘤率和成瘤时间。结果本次研究成功构建肝癌原位和皮下PDX模型,两者与患者原发肿瘤病理特征一致,其中原位和皮下综合成瘤率分别为50%(3/6)和20%(3/15),平均成瘤时间为30 d和68 d。结论肝癌原位PDX模型成瘤率高,对于难生长肿瘤提供了一个新的建模方法,皮下成瘤操作和观察较为简单,在具体科研实践中应根据情况使用合适方法。它们为深入探索HCC的发病机制,及药物筛选提供有效的动物模型。     

前列腺癌人源性异种移植模型的建立及治疗药物的筛选

建立高保真的前列腺癌PDX模型是研究前列腺癌生物学和药物治疗的基础。但由于大部分前列腺癌的发生与激素密切相关,造成原发性前列腺癌移植小鼠后成功率较低,其发展及应用受到阻碍。高保真的前列腺癌PDX模型,能够准确概括疾病的组织结构特征及生物和分子异质性,且其疾病的进展过程和对药物的反应性也与临床结果高度相似。本文重点综述了建立前列腺癌PDX模型的改进方法,包括外源性雄激素的补充、原始肿瘤组织的质量和基质环境等,以及常用治疗药物的应用,为前列腺癌的临床研究提供理论依据。这些尝试对前列腺癌新药研发和作用机制研究具有重要意义,推进前列腺癌个体化肿瘤治疗的进程。     

88例卵巢上皮性癌行ATP-TCA体外药敏试验结果分析

该研究是探讨三磷酸腺苷生物荧光肿瘤抗癌药物药敏性分析实验（ATP-TCA）在卵巢癌患者化疗中的应用。研究选取88例卵巢上皮性癌新鲜组织行ATP-TCA体外药敏试验,分析结果、计算各种化疗药物敏感性,并与48例对照组患者进行临床近期有效率的比较。结果显示,在体外药敏试验敏感性最强的单药为紫杉醇（51.9%）,敏感性强弱依次为：紫杉醇〉卡铂〉顺铂〉吉西他滨〉拓泊替康〉多西他赛〉依托泊苷〉环磷酰胺〉博来霉素,联合用药方案敏感性较单药增加。药敏组患者临床近期有效率（85.23%）高于对照（68.75%）。ATP-TCA是一种有效的抗癌药物敏感性分析实验,可为卵巢癌患者临床化疗提供个体化的指导方案。     

热疗对SW1990 胰腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制

目的：探讨热疗对化疗诱导的人胰腺癌细胞株SW1990 细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其可能的作用机制。方法：分别 用不同浓度吉西他滨(0, 5, 10, 20,30 滋M)作用于SW1990 细胞不同时间(24, 48, 72 小时)及30 滋M 吉西他滨作用24h 联合热疗 43℃ 1h,观察细胞的形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT) 法检测细胞的增殖情况。采用Western blot 方法检测细胞内 E-cadherin 蛋白和剪切的Notch1 蛋白的表达。结果：①吉西他滨在一定浓度范围内可明显抑制SW1990细胞的增殖（P<0.05）,并 呈浓度和时间依赖性。吉西他滨作用前24 h 给予43℃ 1h热疗预处理可显著增强吉西他滨对SW1990细胞的抑制作用（P<0.05） ②吉西他滨作用SW1990 细胞24 小时后,细胞数目减少,细胞形态变大,细胞呈梭形,且细胞间连接减少;而热疗预处理的联合 能够逆转此种形态学变化。③吉西他滨作用24 小时后,细胞内E-cadherin蛋白的表达下调、Cleaved Notch1 的蛋白表达上调,热 疗预处理可明显上调吉西他滨诱导的E-cadherin 蛋白表达下调、并下调Cleaved Notch1 蛋白表达的上调。结论：热疗预处理显著 逆转吉西他滨所诱导的人胰腺癌细胞株SW1990 细胞的EMT 现象,其机制可能与Notch 信号通路有关。     

热疗对SW1990胰腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制

目的：探讨热疗对化疗诱导的人胰腺癌细胞株SW1990细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其可能的作用机制。方法：分别用不同浓度吉西他滨（0,5,10,20,30wM）作用于SW1990细胞不同时间（24,48,72小时）及30μM吉西他滨作用24h联合热疗43℃1h,观察细胞的形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖情况。采用Westernblot方法检测细胞内E-cadherin蛋白和剪切的Notchl蛋白的表达。结果：①吉西他滨在一定浓度范围内可明显抑制SW1990细胞的增殖（P〈0．05）,并呈浓度和时间依赖性。吉西他滨作用前24h给予43℃1h热疗预处理可显著增强吉西他滨对SW1990细胞的抑制作用（P〈0．05）②吉西他滨作用SW1990细胞24小时后,细胞数目减少,细胞形态变大,细胞呈梭形,且细胞间连接减少;而热疗预处理的联合能够逆转此种形态学变化。③吉西他滨作用24小时后,细胞内E-cadherin蛋白的表达下调、CleavedNotchl的蛋白表达上调,热疗预处理可明显上调吉西他滨诱导的E-cadherin蛋白表达下调、并下调CleavedNotchl蛋白表达的上调。结论：热疗预处理显著逆转吉西他滨所诱导的人胰腺癌细胞株sW1990细胞的EMT现象,其机制可能与Notch信号通路有关。     

基于临床肿瘤标本的胃癌转移模型建立

目的建立基于临床肿瘤标本的胃癌转移模型,为胃癌的转移研究提供个体化动物模型。方法将胃癌新鲜的手术标本移植到裸鼠皮下,建立胃癌患者异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型。进一步通过手术将皮下瘤组织原位移植到裸鼠胃部肌层,连续观察裸鼠的体征状态,通过近红外荧光活体成像技术检测肿瘤转移的发生。解剖荷瘤小鼠,将肺部转移灶进一步移植裸鼠皮下获得实体瘤。HE染色观察原发瘤与转移瘤的结构特征,(short tandem repeat) STR分析原发瘤和转移瘤的遗传特性。PCR-Array分析转移瘤和原发瘤中转移相关基因的表达。结果成功建立胃癌PDX模型,移植瘤组织结构与患者保持基本一致;通过胃部原位移植发现编号C19751的小鼠发生肺和肝的转移。其中肺转移灶皮下移植后获得了实体瘤,STR分析显示原发瘤保持了与肺转移瘤一致的遗传特征。PCR-Array结果显示,与原发瘤相比,转移瘤中CXCL12,IGF1和MMP2基因表达均显著上调。结论利用临床肿瘤标本成功建立胃癌转移模型,为胃癌转移研究提供了良好的个体化模型。     

PDTX模型的研究进展

细胞源性异种移植(cell line-derived xenografts,CDX)与原发肿瘤相比失去了肿瘤的异质性和基因的多样性,在临床前的实验中不能有效评估肿瘤药物的疗效和安全性,致使临床药物高消耗而没有达到治疗疾病的目的,严重阻碍了临床药物的发展;人源性肿瘤组织异种移植(patient-derived tumor xenografts,PDTX)保持了原发肿瘤的分子学、基因学和病理学特征,而且经过在小鼠体内传代它仍保持了原发肿瘤的这些特性,为肿瘤的个体化治疗提供了更好的模型。PDTX模型的这些特性与CDX模型相比在肿瘤的个体化治疗方面更具有指导意义。本文将就PDTX模型的特征及其在肿瘤研究领域中的应用作系统阐述。     

SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较

目的建立稳定表达红色荧光蛋白基因的人胰腺癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种新的肿瘤动物模型。方法以Lipofectamine 2000介导chickenβ-actin-RFP-NEO转染人胰腺癌细胞SW1990和Capan-2,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养。BALB/cA-nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像系统观察肿瘤的生长情况。结果获得了稳定表达RFP的两种不同的人胰腺癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长动态过程,并且SW1990肿瘤细胞的生长速度较Capan-2细胞快。结论用红色荧光蛋白标记的人胰腺癌细胞建立的裸鼠肿瘤模型为胰腺癌的研究和相关药物筛选提供了可进行荧光影像活体、动态分析的动物模型。