同源肿瘤克隆细胞蛋白表达和侵袭能力的异质性研究

摘要 目的：比较同源肿瘤细胞来源的不同单克隆表型差异。方法：采用极限稀释法,在悬浮培养条件下获取HCT116结肠癌细胞系的单个细胞,对每孔含单个的细胞进行扩增培养,获得子代单克隆,并以同样方法继续挑取单克隆,连续获得子三代克隆。根据单克隆形态特点,选取第三代的三株代表性的单克隆,采用Western blot和免疫荧光法比较其SOX2、EpCAM和Vimentin蛋白表达差异。采用放疗观察三株单克隆的Vimentin蛋白的动态变化,研究其放疗干预的时间异质性,Transwell体外侵袭实验比较克隆侵袭力的差异。结果：三株由单细胞扩增培养的同源第三代子克隆依然存在明显生物学差异。形态有明显区别的球形与不规则的克隆形态。不规则形态克隆更表现为SOX2低表达及Vimentin的高表达。并且在单个细胞水平上,同个单克隆群体内也存在个体细胞间蛋白的表达差异（Vimentin; EpCAM）。通过观察放疗前后Vimentin蛋白在不同时间点上的荧光强度,发现肿瘤单克隆细胞存在时间异质性。Transwell体外侵袭实验也显示三个同源克隆间存在明显的差异性。结论：同源的、连续单细胞扩增获得的第三代单克隆依然存在明显生物学差异,提示肿瘤内部异质性是其固有特征,并且在治疗干预下,也会引起肿瘤时间异质性的产生。     

热疗对SW1990胰腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制

目的：探讨热疗对化疗诱导的人胰腺癌细胞株SW1990细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其可能的作用机制。方法：分别用不同浓度吉西他滨（0,5,10,20,30wM）作用于SW1990细胞不同时间（24,48,72小时）及30μM吉西他滨作用24h联合热疗43℃1h,观察细胞的形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖情况。采用Westernblot方法检测细胞内E-cadherin蛋白和剪切的Notchl蛋白的表达。结果：①吉西他滨在一定浓度范围内可明显抑制SW1990细胞的增殖（P〈0．05）,并呈浓度和时间依赖性。吉西他滨作用前24h给予43℃1h热疗预处理可显著增强吉西他滨对SW1990细胞的抑制作用（P〈0．05）②吉西他滨作用SW1990细胞24小时后,细胞数目减少,细胞形态变大,细胞呈梭形,且细胞间连接减少;而热疗预处理的联合能够逆转此种形态学变化。③吉西他滨作用24小时后,细胞内E-cadherin蛋白的表达下调、CleavedNotchl的蛋白表达上调,热疗预处理可明显上调吉西他滨诱导的E-cadherin蛋白表达下调、并下调CleavedNotchl蛋白表达的上调。结论：热疗预处理显著逆转吉西他滨所诱导的人胰腺癌细胞株sW1990细胞的EMT现象,其机制可能与Notch信号通路有关。