大熊猫体外受精的初报

我们在大熊猫精子体外获能与异种穿卵成功的基础上,又进行了大熊猫体外受精的首次尝试。 大熊猫卵母细胞取自刚死的育龄雌性大熊猫的卵巢,经体外培养16小时后,加入在体外已获能的大熊猫精子,进行体外受精。发现精子头能穿入卵透明带并进卵膜,继续培养19小时后因污染不幸夭亡。这是大熊猫同种体外受精的第一次报道。这一新进展表明,对研究试管大熊猫又跨近了一步。人们将有可能利用这种生物高技术去主动地拯救大熊猫,为珍稀动物物种的繁殖和保存开劈了一条新途     

试管牛和试管羊胚胎性别的鉴定

奶牛和山羊的卵母细胞经过体外成熟、体外受精和体外发育至桑椹期,在显微操作下,吸取4～6个胚胎细胞,应用巢式PCR技术对其DNA进行SRY基因的测定以进行胚胎性别鉴定。共有27枚转有外源基因的试管牛胚胎和207枚转基因试管羊胚胎进行了SRY基因检测。选取10枚经过性别鉴定的牛胚胎移植于8头受体母牛和124枚已知性别的羊胚胎移植于44头受体母羊,移植后妊娠率分别为37．5％（牛,3/8）和61．4％（羊,27/44）。最后产生1头分娩牛犊和2头流产胎牛以及14头分娩羊羔和2头流产胎羊,它们的性别与胚胎性别鉴定的结果完全相符。 Abstract: The oocytes of bovines and goats were subjected to in vitro maturation,in vitro fertilization(IVF)and in vitro development upto morula stage．4～6 embryonic cells were aspirated with micro-manipulating and the embryo sexes were identified by detecting SRY gene with nested PCR procedure．A total of 27 transgenic IVF bovine and 207 transgenic IVF goat embryos were performed SRY gene detection．10 bovine and 124 goat sexed embryos were selected to be transferred into 8 bovine and 44 goat recipients,respectively,leading to the pregnant rates of 37．5％( in bovine,3/8)and 61．4％(in goat,27/44)．In the end,1 cattle and 14 goatlets were born at term but 2 fetal bovine and 2 fetal goats were miscarried．Their sexes were fully in accordance with the embryonic sex predetermination．     

牛睾丸支持细胞分离、纯化及体外生长行为的研究

了解牛睾丸支持细胞体外培养的生物学特性,试验采用组合酶消化和选择贴壁法,将5月龄、6月龄牛胎儿及新生牛睾丸支持细胞分离纯化后进行体外培养。试验结果显示,这一阶段牛睾丸适宜支持细胞分离纯化用;采用0.25 %胰蛋白酶+0.02 %EDTA二次消化法是一种经济有效的牛胎儿睾丸支持细胞分离方案;试验发现,牛胎儿睾丸支持细胞体外研究时间应控制在3天～20天内,处于对数生长期的牛胎儿睾丸支持细胞,对牛体外受精卵体外发育有明显的促进作用。     

“试管家畜”生产技术及其应用前景

本文简要地介绍了什么是“试管家畜”以及生产“试管家畜”的主要技术过程:卵子的回收及卵子的成熟培养;精子的采集及体外获能处理;卵子和精子的体外受精;受精卵的体外发育;“试管胚”的移植等,并对这项生产技术的科学价值和应用前景作了概述和展望。     

牛冷冻试管胚胎性别鉴定的应用

利用双引物PCR技术对优质良种牛体外受精的冷冻胚胎进行性别鉴定。并对分割后的半胚分别进行PCR扩增和染色体分析,两种方法的判定结果相吻合,在本实验条件下,利用减少PCR体系中细胞的数量来确定最低的模板DNA的检出量,2－细胞不能检测,4－细胞检出率为62．5％,8－细胞为90％,16－细胞以上为100％。对23牧经过性别鉴定后的胚胎进行移植,获得5头纯种试管牛,产犊率为21．7％,与正常的胚胎移植 结果27．3％（3／11）无显著差异,预测性比为100％符合。     

室温下保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

将ICR系雌性小鼠处死并在10℃、15℃、20℃和25℃下依次保存8、14、24和48 h后,采集其体内的卵巢GV期卵,采用常规方法进行体外成熟和体外受精,获得的2细胞期胚经体外培养或胚胎移植观察其发育能力.其结果,在10℃下保存24 h、15℃下保存14 h、20℃下保存8h和25℃下保存4 h后,其体内附有卵丘细胞的GV卵的体外成熟-体外受精后的2细胞率分别为14%、9%、10%和10%,随着保存温度的提高和保存时间的延长,带有颗粒细胞GV期卵的比率明显降低,同时其GV期卵经体外成熟及体外受精后的2细胞率明显降低.在20℃下保存24 h和25℃下保存14 h时,难以获得形态正常的GV期卵;体外受精获得的2细胞期胚经体外培养,总体上有64%的胚胎发育至扩张囊胚,未见有保存温度和保存时间的显著影响,且利用在15℃保存8 h后的GV卵获得2细胞期胚的移植获得正常新生小鼠.上述结果表明,雌性动物室温条件下死亡后,若能短时间及时采集其体内GV期卵并体外成熟、体外受精,体外培养及胚胎移植技术,就有可能获得新生后代.     

不需要血清共培养的受精卵培养系统的确立

机能性肽研究所确立了用无血清而且不需要体细胞的共培养的体外受精卵培养系统。目前与家畜改良事业团等正在利用牛未成熟卵体外成熟培养和体外受精后受精卵培养的无血清培养基进行评价试验及商品化探讨。开发血清和不需要共培养的无血清培养基为用于优良品种增产的牛受精卵移植技术的提高和普及做出了贡献。还期待着应用于人受精卵移植。 用于牛未成熟卵、受精卵培养的培养基目前需要添加牛胎儿血清并与卵丘/颗粒膜细胞共培养。但是,     

正式销售体外受精牛

家畜改良事业团1990年7月9日已将利用体外受精卵移植而生产的5头和牛(日本种的牛)运往东京的食用肉加工厂.每头以70万～92万日元的价格成交.肉牛的肉质,也是遗传性决定的,所以担心体外受精卵牛的肉的价格等级低,但结果很好.这是从1987年事业团开始的肥育素牛生产事业生产的和牛,与赤城酪农业协同组合联合会共同进行体外受精卵移植的事业化的.在这以前事业团已输出三头体外受精牛,但是这次正式打入市     

我国水牛胚胎研究创4项世界第一

由中国农业科学院水牛所研究员黄右军主持的“水牛胚胎体外生产与胚胎移植技术研究”日前通过专家鉴定。据悉 ,该研究成果创 4项世界第一 :世界最大的试管水牛群 (生产 2 2头全部成活 ) ;世界首例完全体外化冻胚试管水牛 ;世界第一例试管水牛双犊 ;世界首列利用先人工授精后胚胎移植生产的不同品种的水牛双犊。其卵母细胞成熟率、受精分裂率和囊胚率分别为71.6%、5 2 .8%和 2 7.2 %。鉴定委员会专家一致认为 ,该研究成果建立的水牛体外受精胚胎生产技术安全、重复性好 ,达到国际领先水平。据了解 ,此项技术的研究成功 ,为开展水牛活体采卵—…     

4℃保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

为了探明雌性动物死亡后GV期卵的可利用性,本研究将ICR系雌性小鼠处死,尸体在4～6℃下分别保存16h、24h和48h,取其卵巢GV期卵,体外成熟后,应用常规法进行体外受精或透明带切割法体外受精,获得2细胞期胚,通过体外培养或胚胎移植观察其发育能力。结果显示,4～6℃下保存16h和24h处理组的体外受精率(分别为31%、33%和21%、24%)与来自新鲜的带有颗粒细胞卵的体外受精率(33%)相比无显著差异。与其相比,保存48h处理组的GV卵已丧失发育能力。此外,体外受精中获得的2细胞胚经体外培养,16h处理组和24h处理组的囊胚率(60%、61%和72%、83%)与新鲜GV期卵处理组的囊胚率(72%)相比差异不显著。获得的2细胞胚经胚胎移植可得到正常幼鼠。上述结果表明,如果雌性小鼠死亡后立即在冷藏温度下(4～6℃)保存,其体内的GV卵在24h以内仍保持发育能力。     

关于小鼠裸卵体外成熟培养系统的研究

获取高质量的体外成熟卵母细胞是成功进行人类体外受精、动物胚胎生产和克隆的关键。尽管大多数哺乳动物卵母细胞能够在体外自发完成细胞核成熟,但卵母细胞成熟质量远不如体内成熟卵母细胞,其受精后胚胎发育能力较差。目前认为,这可能是由于体外成熟的卵母细胞的胞质成熟不充分造成的。研究表明,卵母细胞体外成熟培养系统与受精率和囊胚发育率有强相关性。     

IVF-20培养液用于大鼠体外受精的实验研究

目的探讨人用体外受精液用于实验大鼠体外受精的可行性,为实验大鼠的胚胎保种提供参考。方法选用人体外受精IVF-20培养液作为大鼠精子获能和受精培养液,对SD、Wistar、GK、F344等四种不同品系的实验大鼠进行体外受精;用mR1ECM培养液对体外受精所得胚胎进行体外培养实验。同时,将所得2-细胞胚胎移植给经假孕处理的受体鼠。结果四个品系大鼠体外受精后的卵裂率分别可达83.2%、72.6%、87.8%和71.6%。体外受精卵裂胚能够在体外进一步发育,SD大鼠囊胚发育率为16.7%,与体内受精胚胎在体外培养的囊胚发育率(24.5%)差异不显著。80枚2-细胞胚胎移植给2只受体鼠后均妊娠成功,产下正常仔鼠10只,产仔率12.5%。结论用于人体外受精的IVF-20培养液同样适合于实验大鼠精子的体外获能和受精,可以在多种品系获得较高的卵裂率,所得卵裂胚能够在体外发育到囊胚,并且所得卵裂胚在移植给受体鼠后能够产下正常仔鼠。     

小鼠卵子体外受精的研究——精子浓度及不同来源BSA对受精率的影响

本研究着重观察了精子浓度对受精效果的影响以及体外受精卵的发育情况,同时比较了进口和国产两种不同来源的牛血清蛋白(BSA)对小鼠体外受精的效果,期望国产BSA能够用于哺乳类体外受精的研究。 实验方法为以改进的KRB溶液加BSA(上海生化所或     

碳水化合物对牛体外受精胚胎体外发育的影响

目的　在SOF +PVA(合成输卵管液 +聚乙烯醇 )这一化学成分明确培养系统条件下 ,观察了葡萄糖、丙酮酸和乳酸三种碳水化合物对牛体外受精胚胎体外发育的影响 ,以便为今后进一步探讨影响牛早期胚胎体外发育的因素提供实验依据。方法　牛卵母细胞体外成熟和体外受精后 ,在化学成分明确培养系统内进行体外发育培养。结果　实验 1将牛体外受精卵培养于不含有葡萄糖的SOF +PVA培养系统中 ,培养 12 0h后分别移入含有 0、1 5 0、3 30、5 0 0mmol L的SOF +PVA培养系统中 ,对照组胚胎一直在含有 1 5 0mmol L葡萄糖的SOF +PVA中培养 ,结果囊胚的发育率分别为 9 2 % a、12 1%、19 2 % b、18 9%和 11 7% (a 相似文献   

屠宰母牛卵巢卵母细胞的体外受精与发育的研究

为了开发良种母牛早期胚的人工生产技术,笔者等从当地屠宰场共采集了2526个卵巢,回收11420枚牛卵母细胞用于体外受精。方法是把从屠宰场采集的卵巢在1—16小时内带回实验室,用装有18号针头的注射器抽取2—5mm小卵泡中的卵母细胞,并选取卵     

用CTC荧光染色法检测添加肝素对牛精子体外获能的影响

本试验在TALP液中添加不同浓度(0、20、40、80μg.ml-1)的肝素对牛精子进行获能,用CTC染色检测精子获能状况,探讨肝素浓度及诱导时间(1、3、6、9h)对牛精子体外获能的影响。结果显示:随着肝素浓度的提高,精子获能效果增强,3 h达到最高,但添加80μg.ml-1的肝素精子的顶体反应率低于其他组。结果表明:在TALP液中增加高浓度的肝素对精子体外获能有促进作用,用高浓度的肝素获能处理3h后的精子进行体外受精可能会得到较好的效果。     

长爪沙鼠体外受精与早期胚胎体外培养体系的初步建立

目的探讨自配的获能液和受精液用于长爪沙鼠体外受精的可行性,为长爪沙鼠的胚胎保种提供参考。方法用自配的获能液和受精液对长爪沙鼠进行体外受精,并用改良后的KSOM培养液对长爪沙鼠的2细胞胚胎进行体外培养试验。结果长爪沙鼠体外受精率在60%以上,沙鼠2细胞胚胎能够在体外进一步发育。结论初步建立了长爪沙鼠体外受精和胚胎发育体系,但需要进一步优化。     

牛体外受精的程序及超微结构研究

牛体外成熟卵母细胞体外受精后３小时精子入卵,８小时原核形成,２４小时的核多到卵中央。精子发生顶体反应的部位主要在透明表面,方式是顶体外膜自身囊经,发生顶体反应的粗子可斜向或垂直穿过透明带。卵丘细胞可吞噬大量精子,在阻多精受精中发挥重要作用。高尔基得合体,线料体、环状片层和滑面内质网等在原核周围形成细胞器集团。牛体外受精卵的雌雄原结合比体内受精的要延迟,胞吐到卵周隙中的皮质颗粒内容物扩散不完全。     

开发和牛的个体识别用基因标记

(社)畜产技术协会动物遗传研究所研究部主任杉本喜憲等研究组利用和牛(日本牛)的小卫星DNA的多型开发了进行个体识别的DNA标记。一旦使用这种标记,和牛的亲犊鉴别和个体识别就容易了,也能用于体外受精和精液、肉的鉴定。杉本等在12月13～16日神户市召开的日本分子生物学会上发表了该项研究成果。 在日本,牛的人工受精(将精液注入雌牛)一年有50万头,受精卵移植(从过剩排卵人工授精的雌牛采取受精卵)不足7000头,体外受精卵移植(从屠杀的雌牛卵巢回收卵子后受精)约1000头和牛。但是,     

蕨组织培养与快繁技术研究

以蕨的根状茎顶芽、幼嫩带节根状茎为外植体,接种于诱导培养基上,培养30d后,顶芽分化形成绿色小球（GGB）,继续生长30d后分割,用于继代增殖或转换培养基诱导形成试管苗;根状茎段由茎节处萌发新枝,20—30d后,形成丛生苗,分割后培养长成具有不定根的丛生试管苗。通过诱导形成绿色小球（GGB）和丛生苗两条途径均可快速繁殖蕨的试管苗。试管苗经过“炼苗”后移入温棚,生长良好．