过氧化物歧化酶对牛胚体外培养系统的功用

日本北里大学兽医畜产学部副教授福田芳诏在谈到对牛体外受精卵培养基中添加过氧化物歧化酶(SOD)的印象时说:“好象有些效果。”他已开始添加SOD的实验。虽还没有得出明确的数据,但看到似乎有效。在畜产领域,提高牛体外受精卵的体外培养技术的效率是个大课题。从屠宰牛的卵巢生产受精卵能达到多高的效率呢?各试验研究机构和企业对此正展开激烈竞争。福田等1987年通过同时培养卵丘细胞和受精卵,克服了八细胞阻断(牛大多数在八细胞期中     

无牛血清IgG细胞培养基（—GFCS培养基）的制备及其在杂交瘤细胞体外培养中的应用

为了制备不含牛血清IgG的细胞培养基（－GFCS培养基）,并研究其在杂交瘤细胞体外培养中的应用,采用蛋白G亲和层析的方法,将含有血清的细胞培养基中的牛血清IgG去除,以制备无IgG的培养基。使用该培养基体外培养杂交瘤细胞后,监测细胞生长和上清抗体浓度。对培养上清中的IgG类单克隆抗体可以采用蛋白G亲和层析进行纯化。与示去除牛血清IgG的培养基相比,－GFCS培养基培养的杂交瘤细胞的生长状况及上清抗体浓度均无明显变化;从－GFCS培养上清中成功纯化出不被血清IgG污染的IgG类单克隆抗体,本文结果表明,采用－GFCS培养基体外培养分泌IgG类单抗的杂交瘤细胞,可以简化上清抗体的纯化工艺。     

千叶县岭岗乳牛试验场移植爱丽多母牛的受精卵并成功着胎

千叶县岭岗乳牛试验场把2个从美国引进的爱丽多母牛的受精卵,移植到其他受卵牛体内,并已确认着胎。 用于授精的精液可能是直接由美国输入的,也可能是取自美国产雄牛的,采用这种组合方式进行受精卵的移植,在短期内就可得到许多良种牛。     

中部饲料公司的受精卵移植牛

中部饲料把在该公司试验农场下山试验场用受精卵移植(ET)生产的仔牛委托北海道牧场养育.委托的牧场有?牧场和幸福牧场.5年后的目标是饲育5000头,年销售头数1000头.中部饲料公司试验场现在保有供卵牛约100头,受卵牛约450头.这项事业是把从供卵牛采收的受精卵移植给受卵牛.中部饲料公司进行初期饲育,然后把肥     

正式销售体外受精牛

家畜改良事业团1990年7月9日已将利用体外受精卵移植而生产的5头和牛(日本种的牛)运往东京的食用肉加工厂.每头以70万～92万日元的价格成交.肉牛的肉质,也是遗传性决定的,所以担心体外受精卵牛的肉的价格等级低,但结果很好.这是从1987年事业团开始的肥育素牛生产事业生产的和牛,与赤城酪农业协同组合联合会共同进行体外受精卵移植的事业化的.在这以前事业团已输出三头体外受精牛,但是这次正式打入市     

开发和牛的个体识别用基因标记

(社)畜产技术协会动物遗传研究所研究部主任杉本喜憲等研究组利用和牛(日本牛)的小卫星DNA的多型开发了进行个体识别的DNA标记。一旦使用这种标记,和牛的亲犊鉴别和个体识别就容易了,也能用于体外受精和精液、肉的鉴定。杉本等在12月13～16日神户市召开的日本分子生物学会上发表了该项研究成果。 在日本,牛的人工受精(将精液注入雌牛)一年有50万头,受精卵移植(从过剩排卵人工授精的雌牛采取受精卵)不足7000头,体外受精卵移植(从屠杀的雌牛卵巢回收卵子后受精)约1000头和牛。但是,     

东方杯叶吸虫囊蚴的体外培养和发育的研究

本文用含小鸡血清的培养基将东方杯叶吸虫脱囊后尾蚴体外培养至怀卵成虫,但虫卵不正常。添加小鸡小肠粘膜浸出液能明显提高怀卵率和产卵量,但不影响怀卵量,41℃比37℃培养结果更好;后尾蚴的发育经历了精巢、阴茎囊、卵巢和卵黄腺的形成及怀卵和产卵的过程,体外培养中虫体发育延缓。     

绵羊卵母细胞的体外培养、受精与发育的观察

笔者等把屠宰母羊卵巢卵母细胞经体外培养成熟后用于体外受精,曾得到76.2—92.5％的受精率。本实验将体外成熟、受精后的羊卵在体外条件下继续培养或者在2—4细胞期移植给受体母羊之后,分别观察了培养卵的发育情况和移植羊的受胎率。     

加拿大Alta Genetics公司的核移植卵技术

协同饲料通过日本商社就加拿大Alta Genetics公司的克隆卵(核移植卵)培养技术和受精卵的性别鉴定技术引进,与加拿大公司开始谈判.协同饲料研究所所长草彅登夫说,“用自己公司研究积累的经验也能掌握这些技术.但是自己干还是引进,在公司内部还没有结论. 该公司1989年确立未受精卵的完全体外培养系,同年在北海道的带广与中札村役场、农协、十胜家畜共济、带广畜产大学合作进行体外冷冻受精卵移植的现场试验.该公司通过家畜改良事业团从而获得芝浦屠宰场家畜卵巢.     

牛体内囊胚经体外共培养诱导子宫内膜上皮细胞整合素αv,β3基因差异的表达

目的利用牛体内胚胎与其子宫内膜上皮细胞体外共培养的方式,探究共培养前、后子宫内膜上皮细胞中整合素αv,β3基因差异表达的变化,为今后建立快捷有效的牛子宫容受态预判方法提供参考。方法将体内冲出的牛囊胚与原代培养并传代纯化至第5代的牛子宫内膜上皮细胞进行24 h体外共培养,利用RT-PCR技术对共培养前、后的子宫内膜上皮细胞进行αv,β3基因的表达检测。结果 RT-PCR检测结果显示,共培养前、后均有整合素αv,β3的表达;共培养I组(囊胚组),其共培养后诱导整合素αv,β3基因的表达与未共培养对照组二者之间差异无显著性(P0.05);共培养II组(孵化囊胚组),其共培养后整合素αv,β3基因的表达显著高于对照组和共培养I组(P0.05)。结论牛体内孵化囊胚经体外共培养诱导牛子宫内膜上皮细胞表达整合素αv,β3的效果,明显优于早期囊胚;整合素αv,β3基因具有作为牛子宫容受态体外检测标志的潜力。     

为了正式生产冷冻体外受精卵而扩大设施

家畜改良事业团的东京生物技术中心正式生产1月开始的农林水产省用于体外受精卵移植事业的冷冻体外受精卵,从2月20日开始扩大设施的改建工程。估计3月底完成,实际运行要5月上旬。之后调整机械需要1～2个月正式生产。随着设施的扩大,人员也将从8名增加到十几名。事业的正式名称为“体外受精卵活用肉用牛增殖紧急对策事业”。是91年指定赞助对象事业之一。农林水产省规定纲要,畜产振兴事业团进行实际赞助。预算为37100亿日元。支付给家畜改良事业团的部分     

牛体外受精的程序及超微结构研究

牛体外成熟卵母细胞体外受精后３小时精子入卵,８小时原核形成,２４小时的核多到卵中央。精子发生顶体反应的部位主要在透明表面,方式是顶体外膜自身囊经,发生顶体反应的粗子可斜向或垂直穿过透明带。卵丘细胞可吞噬大量精子,在阻多精受精中发挥重要作用。高尔基得合体,线料体、环状片层和滑面内质网等在原核周围形成细胞器集团。牛体外受精卵的雌雄原结合比体内受精的要延迟,胞吐到卵周隙中的皮质颗粒内容物扩散不完全。     

骨髓间充质干细胞无血清培养

为建立一种化学成分明确的、能用于体外扩增骨髓间充质干细胞的无血清培养基, 且骨髓间充质干细胞经无血清培养扩增后仍能保持其多向分化的潜能。采用密度梯度离心结合贴壁法从1月龄新西兰大白兔股骨中分离骨髓间充质干细胞, 比较在含10%胎牛血清的培养基(SCM)和自制的化学成分明确的无血清培养基(CDSFM)中骨髓间充质干细胞的形态、增殖能力, 以及扩增后的骨髓间充质干细胞的细胞周期、集落形成能力和成骨、成脂肪分化能力。经过10 d的培养, 骨髓间充质干细胞在自制的无血清培养基中扩增了50倍, 在含10%胎牛血清的培养基中扩增了40倍。在无血清和有血清培养基中扩增后的细胞中G0/G1期比例分别为(80.31%±0.6%)和(75.24%±4.0%), 两者无显著差异(P>0.05)。无血清培养扩增后的骨髓间充质干细胞集落形成率(12.7%±4.0%)低于有血清培养组(28.7%±4.2%), 两者比较差异显著(P<0.01)。经过无血清培养扩增的骨髓间充质干细胞在成骨、成脂肪诱导分化培养基中能够分化成成骨和脂肪细胞。自制的化学成分明确的无血清培养基能够在体外培养扩增骨髓间充质干细胞, 并且维持其干细胞特性, 可以用于细胞治疗以及生物医学研究。     

卵泡内环境对猪卵泡卵体外成熟和发育的影响

研究卵泡内环境对猪卵母细胞体外成熟、受精及受精卵体外发育的影响。主要结果如下：直径≥5mm、4－4.9mm、3－3.9mm和2－2.9mm的卵泡卵母细胞体外成熟率分别为90.5%、89.7%、85.4%和67.4%,体外受精后,卵母细胞的发育能力随卵泡直径的增大而增强,直径≥5mm和4－4.9mm卵泡卵的2－细胞、3－4－细胞发育率显著高于直径2－2.9mm的卵泡卵（P＜0.05或0.01）。体外成熟培养36h、42h和48h,直径2－2.9mm卵泡卵的体外成熟率,体外受精后的卵裂率差异不显著（P＞0.05）。在体外成熟培养液中添加5％或15％的不同直径卵泡的卵泡液,各组间卵母细胞的体外成熟率,受精卵的体外发育率均无显著差异,结果表明：卵泡大小对猪卵母细胞体外成熟、受精及受精卵体外发育有重要影响。     

共培养对小鼠囊胚质量及其表观遗传修饰的影响

本研究探讨了共培养对小鼠囊胚质量及其表观遗传修饰的影响。将小鼠的受精卵体外随机分别置于含颗粒细胞(试验组I)、输卵管上皮细胞(试验组Ⅱ)、输卵管组织块(试验组Ⅲ)的KSOM培养液中作为试验组进行共培养,同时设立对照组A(体外培养,仅含KSOM)和对照组B(体内培养)。比较各组受精卵的卵裂率和囊胚发育率;并应用碘化丙啶和Hoechest333258对囊胚进行染色,利用ICM/TE值评价各组胚胎体外发育的质量;同时将囊胚进行免疫荧光染色,观察其基因组甲基化和组蛋白乙酰化的水平。结果表明,与对照组A相比,试验组的卵裂率和囊胚发育率均有显著提高(P<0.05);同时其囊胚细胞数目及内细胞团细胞数与滋养层细胞数比值(ICM/TE)值均显著高于对照组A(P<0.05);各试验组囊胚基因组甲基化水平与对照组A差异不显著(P>0.05),但各体外培养组均与对照组B差异显著(P<0.05);试验组组蛋白乙酰化水平与对照组A、B差异均不显著(P>0.05)。共培养能够有效促进小鼠胚胎的体外发育,提高囊胚的发育质量,但是仍不能克服由体外培养造成的基因组甲基化异常。     

美国Granada Genetics公司开始重组牛促滤泡素诱发排卵的野外试验

美国Granada Genetics公司(在得克萨斯州Bryan)使用通过基因重组制作的牛促滤泡素(bFSH),在1987年4月末开始第一次野外试验。Granada Genetics 公司得到了美国食物与药品管理局(FDA)进行6周试验的许可和赞助金。FSH 投予发情期的母牛,可诱起超数排卵。用这科,激素制剂在受精卵移植时,可从供卵牛回收两个至两个以上受精卵。Integrated Genetics 公司(在马萨诸塞州 Framingham)进行克隆化和生产 bFSH 基因是接受了 Granada Genetics 公司的委托。Granada Genetics 公司是设在得克萨斯州休斯敦的 Granada 公司移植受精卵部门的子公司。     

试管牛繁殖能力的观察

利用屠宰母牛卵巢卵母细胞经过体外培养成熟、体外受精和体外发育后,以非手术移卵技术移植给受体母牛,于1989年8月15日出生的我国第一胎试管牛(雄性),现已达到繁殖年龄。为检测试管牛的繁殖能力,我们根据其自然交配情况以及采精后进行体外受精结果对其繁殖能力进行了研究评价。经过与5头母牛的情     

昆明小鼠卵子的体外受精及发育的研究

为建立稳定有效的昆明小鼠卵子的体外受精和体外培养系统,研究中以成熟雄鼠附睾尾部精子与超排得到的卵子在TYH培养液中进行体外受精,并对精子的穿入情况以及受精卵中精子头部及卵细胞核的形态变化进行了连续观察。将小鼠输卵管上皮或卵丘细胞加至培养液中与受精卵共同培养,克服了“2细胞阻滞”现象,分别有72.3％和69.9％的胚胎发育为桑椹胚。将培养得到的桑椹胚和囊胚移植给受体雌鼠后,得到了产仔的结果。证明本研究建立的昆明小鼠卵子的体外受精和培养系统是可行的。     

营养因素对体外培养日本血吸虫成虫产卵影响的研究

应用体外培养方法,观察不同商品培养基、血清、营养物质和有关添加剂对体外培养日本血吸虫成虫产卵量和畸卵率的影响。结果表明,RPMI/1640培养基、兔血清和人血清对产卵的作用较好;ATP、5-HT、次黄嘌岭、水解酪蛋白及维生素C对产卵有促进作用。在841培养基的基础上加入有关促进产卵的成分,建立了比较适合成虫产卵的851培养基。     

哺乳动物卵母细胞生发泡移植

生发泡(GV)移植是指将GV期卵母细胞的GV移入到去核的受体细胞(GV期卵母细胞、MII期卵母细胞或受精卵)透明带下,经融合形成一个重组卵的过程。GV移植对研究卵母细胞的细胞周期调控、成熟及受精时细胞核与细胞质之间的相互作用非常重要,可用于研究卵母细胞减数分裂异常和与年龄相关变化之间的关系及细胞质衰老与卵母细胞非整倍性之间的关系。现简要介绍了GV移植的基本程序,GV核体与胞质体的融合,重组卵的培养条件,重组卵成熟后的受精、人工激活和胚胎发育能力以及GV移植的意义。