瑞舒伐他汀促进缺氧复氧间充质干细胞增殖的机制研究

目的:探讨瑞舒伐他汀对缺氧复氧损伤后脂肪来源间充质干细胞增殖的影响及机制。方法:酶消化法分离小鼠的脂肪间充质干细胞(AD-MSCs),流式细胞术检测CD90、CD44、CD34、CD45等细胞标志物。建立缺氧(H)6h/复氧(R)42h细胞模型,AD-MSCs分为3组:①对照组;②缺氧/复氧组(H/R);③H/R+瑞舒伐他汀干预组(浓度分别为10-8、10-7、10-6mol/L)。MTT法测定各组细胞增殖,免疫印迹法检测细胞内Akt、Erk及其磷酸化的表达水平。结果:流式细胞术结果显示脂肪间充质干细胞CD44及CD90阳性,CD34、CD45阴性。MTT实验显示在缺氧环境中,瑞舒伐他汀的干预可显著增加AD-MSCs的增殖(P<0.05)。Westernblot检测pAkt及pErk的表达在瑞舒伐他汀干预组明显高于对照组和H/R组。(P<0.05)。结论:瑞舒伐他汀可通过Akt、Erk信号途径促进H/R损伤后AD-MSCs的增殖。     

瑞舒伐他汀促进缺氧复氧间充质干细胞增殖的机制研究

目的：探讨瑞舒伐他汀对缺氧复氧损伤后脂肪来源间充质干细胞增殖的影响及机制。方法：酶消化法分离小鼠的脂肪间充质干细胞（AD-MSCs）,流式细胞术检测CD90、CD44、CD34、CD45等细胞标志物。建立缺氧（H）6h/复氧（R）42h细胞模型,AD-MSCs分为3组：①对照组;②缺氧/复氧组（H/R）;③H/R＋瑞舒伐他汀干预组（浓度分别为10-8、10-7、10-6mol/L）。MTT法测定各组细胞增殖,免疫印迹法检测细胞内Akt、Erk及其磷酸化的表达水平。结果：流式细胞术结果显示脂肪间充质干细胞CD44及CD90阳性,CD34、CD45阴性。MTT实验显示在缺氧环境中,瑞舒伐他汀的干预可显著增加AD-MSCs的增殖（P〈0.05）。Westernblot检测pAkt及pErk的表达在瑞舒伐他汀干预组明显高于对照组和H/R组。（P〈0.05）。结论：瑞舒伐他汀可通过Akt、Erk信号途径促进H/R损伤后AD-MSCs的增殖。     

Ghrelin 对缺氧复氧状态下脂肪间充质干细胞保护作用的研究

目的:探讨缺氧复氧损伤环境下Ghrelin对脂肪来源的间充质干细胞(AD-MSCs)的保护作用,以寻求AD-MSCs心肌内移植的有利因素。方法:采用胶原酶消化法分离小鼠AD-MSCs,流式细胞术鉴定其标志。建立缺氧/复氧细胞模型,分3组:①对照组;②缺氧/复氧组(H/R);③H/R+Ghrelin(浓度分别为10-9、10-8、10-7mol/L)干预组。MTT法测定各组细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:流式细胞术结果显示AD-MSCs CD44及CD90阳性,CD34、CD45阴性。AD-MSCs MTT分析显示在缺氧环境中,Ghrelin相比于单纯H/R组能够显著促进AD-MSCs的存活与增殖,并抑制其凋亡(P<0.05)。结论:Ghrelin可以明显提高缺氧复氧环境下AD-MSCs的生存与增殖,抑制缺氧诱导的凋亡发生,有望为心肌梗死的干细胞移植治疗创造新的有利因素。     

Ghrelin对缺氧复氧状态下脂肪间充质干细胞保护作用的研究

目的：探讨缺氧复氧损伤环境下Ghrelin对脂肪来源的间充质干细胞（AD-MSCs）的保护作用,以寻求AD-MSCs心肌内移植的有利因素。方法：采用胶原酶消化法分离小鼠AD-MSCs,流式细胞术鉴定其标志。建立缺氧/复氧细胞模型,分3组：①对照组;②缺氧/复氧组（H/R）;③H/R＋Ghrelin（浓度分别为10-9、10-8、10-7mol/L）干预组。MTT法测定各组细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果：流式细胞术结果显示AD-MSCs CD44及CD90阳性,CD34、CD45阴性。AD-MSCs MTT分析显示在缺氧环境中,Ghrelin相比于单纯H/R组能够显著促进AD-MSCs的存活与增殖,并抑制其凋亡（P〈0.05）。结论：Ghrelin可以明显提高缺氧复氧环境下AD-MSCs的生存与增殖,抑制缺氧诱导的凋亡发生,有望为心肌梗死的干细胞移植治疗创造新的有利因素。     

线粒体大麻素受体1在大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中对线粒体分裂的影响

目的:探讨线粒体CB1受体(mitochondrial cannabinoid receptor1,mtCB1)在大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中对线粒体分裂的影响。方法:原代培养新生的Wistar大鼠海马神经元,将培养至第8天的海马神经元采用随机数字表分为5组(n=60):正常组(N组):正常培养,不做任何处理;缺氧复氧组(H/R组):采用氧糖剥夺法构建海马神经元缺氧复氧损伤模型,缺氧6h,复氧20 h;缺氧复氧组+ACEA+AM251组(H/R+ACEA+AM251组):缺氧6 h结束后立即加入ACEA和AM251,终浓度分别为1μmol/L、10μmol/L,复氧20 h;缺氧复氧+ACEA+Hemopressin(H/R+ACEA+Hemo组):缺氧6h结束后立即加入ACEA和Hemopressin,终浓度分别为1μmol/L、10μmol/L,复氧20 h;缺氧复氧+赋形剂组(H/R+V组):同样于缺氧6h结束后立即加入二甲基亚砜(DMSO),终浓度0.1%,复氧20 h。使用激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca~(2+)的浓度,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡诱导因子(AIF)、线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1,细胞凋亡相关蛋白细胞色素C(Cytc)和Rho相关的卷曲蛋白激酶1(ROCK1)的表达。结果:与N组相比,H/R组、H/R+ACEA+AM251组、H/R+ACEA+Hemo组和H/R+V组的细胞内Ca~(2+)浓度、细胞凋亡率、以及AIF、Drp1、Fis1、Cytc、ROCK1蛋白的表达水平均明显增加(P0.05);与H/R组相比,H/R+ACEA+Hem组上述各检测指标明显降低(P0.05),H/R+ACEA+AM251组和H/R+V组各指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:线粒体CB1受体(mtCB1受体)可能通过降低细胞内ROS的含量来减少细胞内Ca~(2+)浓度和ROCK1的表达,进而抑制线粒体分裂,并最终减轻海马神经元缺氧复氧损伤。     

内质网应激预处理对人正常肝细胞缺氧再复氧损伤的保护作用

目的:研究内质网应激预处理对人肝细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:将培养的人肝细胞分为4组:正常对照(C)组、细胞缺氧复氧损伤(H/R)组、内质网应激(ER)组、内质网应激预处理(ERP+H/R)组。收集各组细胞,以流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-bloting及RT-PCR检测内质网应激特异蛋白GRP78表达水平,并通过透射电镜观察各组细胞超微结构改变。结果:ERP+H/R组细胞凋亡率明显低于H/R组(P<0.05),ER及ERP+H/R组GRP78蛋白表达明显高于H/R组(P<0.05)。结论:内质网应激预处理对肝细胞缺氧复氧损伤具有明显的保护作用,内质网应激特异性蛋白GRP78可能在肝细胞缺氧复氧损伤中作为一种关键性的保护蛋白出现。     

缺氧/复氧大鼠心肌中IL-1β浓度的动态变化及意义

目的:探讨大鼠心肌中白细胞介素-1β(IL-1β)在心肌缺氧/复氧过程中的动态变化及其意义。方法:采用Langendorff方法制备离体大鼠心肌缺氧/复氧模型。40只雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)和缺氧/复氧组(H/R组)。H/R组按照复氧时间分为H/R 0.5 h、H/R 1 h、H/R 2 h组(B、C、D组)(n=10)。连续纪录各组左室发展压(LVDP)、左心室发展压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)的变化,ELISA检测各组心肌IL-1β和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的浓度,RT-PCR检测心肌IL-1βmRNA的表达水平,光镜观察心肌结构。结果:与对照组相比,H/R组大鼠LVDP、±dp/dtmax值均降低(P0.05),心肌中IL-1β的含量及IL-1βmRNA的表达明显升高(P0.05),CK-MB浓度上升(P0.05),随复氧时间的延长以上指标的变化更明显,B、C、D组间两两比较,差异均有统计学意义(P0.05),H/R 2 h组心肌中的IL-1β、CK-MB的浓度以及IL-1βmRNA的表达量与A、B、C组相比,达到最高(P0.05)。结论:大鼠心肌缺氧/复氧后IL-1β在心肌组织中的表达上升并引起心肌再灌注损伤。     

凋亡诱导因子介导缺氧/复氧致肥大心肌细胞凋亡的作用

心肌细胞凋亡导致心肌组织合胞体功能丧失,最终使代偿性心肌肥大向心力衰竭转化。过去的研究已经确认天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspartate-specificcysteinylproteinase,caspase)依赖机制在心肌细胞凋亡中的作用,但对caspase非依赖机制即凋亡诱导因子(apoptosis-inducingfactor,AIF)在心肌细胞凋亡中的作用尚不明确。本研究应用血管紧张素Ⅱ(0.1μmol/L培养12h)诱导培养的小鼠肥大心肌细胞,利用三气孵箱建立缺氧/复氧模型以模拟缺血再灌注。应用RT-PCR、Westernblot、siRNA基因转染、Hoechst33258染色法检测AIF在mRNA和蛋白质水平的表达及细胞凋亡的变化,分析AIF在缺氧/复氧致肥大心肌细胞凋亡中的意义。结果如下:(1)与对照组比较,缺氧8h组(H8h)和缺氧12h组(H12h)AIFmRNA及蛋白表达水平均显著升高(mRNA:0.52±0.04及0.85±0.10vs0.29±0.08,P<0.05;蛋白质:2.07±0.15和3.12±0.19vs0.29±0.04,P<0.05),即随缺血时间的延长,AIFmRNA及蛋白表达水平均显著增加。(2)与对应单纯缺氧组比较,缺氧后给予复氧刺激,H8h/R组和H12h/R组AIFmRNA及蛋白表达水平均显著升高(mRNA:1.09±0.12和1.41±0.23,P<0.05;蛋白质:4.57±0.25和5.71±0.27,P<0.05)。仅在H8h/R及H12h/R组,可见AIF核转位显著增加。(3)AIFsiRNA转染可显著抑制肥大心肌细胞AIF的表达,对缺氧时细胞凋亡无明显影响(P>0.05),但可显著降低缺氧/复氧诱导的肥大心肌细胞凋亡率(P<0.05)。同时抑制AIF及caspase-3活性,可显著加强单一抑制剂对缺氧/复氧诱导的肥大心肌细胞凋亡的抑制作用。(4)抑制caspase-3活性对缺氧/复氧诱导的AIF核转位无明显影响。上述结果提示,缺氧/复氧时AIFmRNA、蛋白表达和核转位均显著增加,且在缺氧/复氧诱导肥大心肌细胞凋亡中具有重要的作用。     

藏药镰形棘豆对缺氧/复氧H_9C_2心肌细胞损伤的保护作用

探讨藏药镰形棘豆(OFB)提取物对缺氧/复氧(H/R)H_9C_2心肌细胞损伤的保护作用。方法:采用三气培养箱培养法建立H_9C_2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。实验分为3组:正常细胞对照组;缺氧/复氧损伤组(H/R);7个药物加缺氧/复氧损伤组(H/R+OFB);于缺氧/复氧开始时分别加入终浓度为0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L、300 mg/L、600 mg/L、1 000 mg/L的镰形棘豆提取物,以细胞活力为指标,利用MTS法测定药物对细胞活力的影响。检测镰形棘豆乙酸乙酯水甲醇压柱组分与氯仿萃取组分不同给药剂量对H_9C_2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。结果:与模型组相比药物处理组显著升高缺氧/复氧H_9C_2心肌细胞活力(p0.05)。结论:藏药镰形棘豆对H_9C_2心肌细胞的缺氧/复氧损伤有保护作用。     

番茄红素对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧的保护作用以及其机制

目的:探讨番茄红素对心肌细胞缺氧复氧的保护作用以及其分子机制。方法:采用原代培养心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分8组:正常对照组,H/R组,H/R+番茄红素(1,2,4,8,16,32μmol/L)剂量组。观察各组细胞经H/R损伤后,细胞内天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化情况,选择正常对照组,H/R组,最佳番茄红素剂量组做MTT分析细胞凋亡,Western检测TRL 4以及NF-κB的表达。结果:番茄红素(16,8,4,2μmol/L)剂量组可显著降低缺氧/复氧损伤心肌细胞内AST、CK、LDH释放量及MDA的生成,并能提高SOD活性。此外番茄红素可减少心肌细胞缺氧/复氧损伤后的心肌凋亡,减少TRL 4受体以及NF-κB的表达。结论:番茄红素具有抗缺氧/复氧损伤,保护心肌细胞的作用,其机制可能是通过抑制TRL 4通路来实现的。     

外源性H2S恢复缺氧后适应对衰老H9C2细胞的保护作用及机制

目的：探讨外源性硫化氢（H₂S）恢复缺氧后适应对衰老H9C2细胞的保护作用及相关机制。方法：H9C2细胞（心肌细胞系）用30 μmol/L过氧化氢（H₂O₂）处理2 h后再培养3 d,诱导生成衰老细胞。衰老H9C2细胞被随机分5组（n=8）：正常组（Control）、缺氧/复氧组（H/R）、H/R+NaHS组、缺氧后适应（PC）组、PC+NaHS组。缺氧/复氧（H/R）模型：衰老H9C2细胞用缺氧液（无血清、无糖培养基,pH=6.8）培养3 h,然后正常培养6 h;缺氧后适应（PC）模型：方法同H/R模型,缺氧结束复氧前连续进行3次5 min间隔的复氧/再缺氧处理,随后复氧6 h。ELISA试剂盒分别检测大鼠晚期糖基化终末产物（AGEs）含量和caspase-3活性;CCK-8试剂盒检测细胞活力;DCFH-DA染色检测活性氧（ROS）水平;Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率;Real-time PCR检测相关基因mRNA水平。结果：30 μmol/L H₂O₂可诱导H9C2细胞衰老但不会导致其凋亡;与Control组比较,H/R和PC均降低细胞活力,增加细胞凋亡率、ROS水平及caspase-3、caspase-9和Bcl-2 mRNA水平（P<0.01）;且PC组与H/R组比较,上述指标变化无明显差异;在H/R和PC组加入NaHS,可显著提高细胞活力,降低细胞凋亡率和氧化应激;PC+NaHS对上述指标的作用明显强于H/R+NaHS。结论：外源性H₂S能够恢复PC对衰老H9C2细胞的保护作用,其机制与抑制氧化应激和细胞凋亡有关。     

右美托咪定对缺氧/复氧诱导的A549细胞凋亡及caspase-12表达的影响

本研究旨在探讨右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的A549细胞凋亡以及caspase-12表达的影响。取对数生长期的A549细胞,随机分为对照组、DEX组、H/R组和DEX+H/R组。对照组和DEX组细胞常氧培养30 h,H/R组和DEX+H/R组细胞缺氧6 h、复氧24 h建立H/R模型,其中DEX组和DEX+H/R组给予1 nmol/L DEX干预。造模结束后用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;原位末端标记(TUNEL)法检测A549细胞的凋亡指数(apoptotic index,AI);CCK-8法检测A549细胞活力;caspase-3活性检测试剂盒检测各组caspase-3酶的活性;Western blot和RT-PCR分别检测A549细胞GRP78、caspase-12蛋白和mRNA的表达水平。结果显示,与对照组相比较,H/R组细胞发生融合现象,形态呈多边型改变,细胞活力明显降低(P0.01),凋亡细胞数增加,AI值升高(P0.01);caspase-3酶活性上升(P0.01);GRP78、caspase-12蛋白和m RNA表达显著上升(P0.01)。经DEX干预后,与H/R组相比较,DEX+H/R组细胞损伤减轻,细胞活力上调(P0.01);凋亡细胞数减少,AI值显著下降(P0.01),caspase-3酶活性显著下降(P0.01);caspase-12蛋白和mRNA表达下降(P0.01)。本研究结果表明,DEX对H/R损伤时的A549细胞具有一定的保护作用,其机制可能与其下调caspase-12的表达、抑制细胞凋亡有关。     

乳酸对培养大鼠大脑皮层神经元缺氧/复氧损伤的影响

目的:观察不同浓度乳酸对原代培养大鼠大脑皮层神经元缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及其机制。方法:原代培养大鼠大脑皮层神经元缺氧8、12、24h后在培养液中添加不同浓度乳酸(终浓度分别为0、0.5、1.0、2.0、5.0mmol/L),复氧24h,以细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)释放量为指标,观察不同浓度乳酸对神经元H/R损伤的影响,并以盐酸模拟乳酸解离的H 的作用,探讨乳酸对大脑皮层神经元H/R损伤影响的机制。结果:5.0mmol/L乳酸和盐酸引起常氧神经元损伤并加重神经元H/R损伤;1.0mmol/L乳酸对缺氧12h和24h神经元H/R损伤具有保护作用,相同浓度盐酸对神经元H/R损伤无影响。结论:较低浓度乳酸对神经元H/R损伤具有保护作用,其机制与H 的作用无关;较高浓度乳酸加重神经元H/R损伤,其机制可能包括H 的作用。     

体外缺血缺氧条件下大鼠骨髓间充质干细胞凋亡发生的机制研究

目的:研究体外大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在缺血缺氧条件下发生凋亡的作用机制。方法:采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞(MNCs),于体外培养并由牛垂体提取物(PEX)诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞(MSCs)。经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧条件下培养,通过Annexin V/PI双染细胞凋亡检测比较不同组别细胞的凋亡率和蛋白印迹法(western blot)来观察细胞中蛋白的变化。结果:①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞培养成功。②对照组(无缺血缺氧)与缺血缺氧组比较,缺血缺氧组的凋亡率显著性增加,而通过磷酸化Akt的表达量显著性增加提示PI3K(Phosphoinosi-tide-3kinase)/Akt(ProteinkinaseB,PKB)信号通路被激活(P<0.05);同时缺血缺氧组与缺血缺氧+PI3K/Akt抑制剂(LY294002)组比较,缺血缺氧+PI3K/Akt抑制剂(LY294002)组的凋亡率显著降低,而通过磷酸化Akt的表达量显著减少提示PI3K/Akt信号通路被抑制(P<0.05)。结论:PI3K/Akt信号通路对体外缺血缺氧条件下培养的骨髓间充质干细胞凋亡发生有关键性作用。     

番茄红素对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧的保护作用以及其机制

目的：探讨番茄红素对心肌细胞缺氧复氧的保护作用以及其分子机制。方法：采用原代培养心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分8组：正常对照组,H/R组,H/R＋番茄红素（1,2,4,8,16,32μmol/L）剂量组。观察各组细胞经H/R损伤后,细胞内天冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的变化情况,选择正常对照组,H/R组,最佳番茄红素剂量组做MTT分析细胞凋亡,Western检测TRL 4以及NF-κB的表达。结果：番茄红素（16,8,4,2μmol/L）剂量组可显著降低缺氧/复氧损伤心肌细胞内AST、CK、LDH释放量及MDA的生成,并能提高SOD活性。此外番茄红素可减少心肌细胞缺氧/复氧损伤后的心肌凋亡,减少TRL 4受体以及NF-κB的表达。结论：番茄红素具有抗缺氧/复氧损伤,保护心肌细胞的作用,其机制可能是通过抑制TRL 4通路来实现的。     

丹参多酚酸盐通过调控肿瘤坏死因子促进大鼠心肌修复的机制研究

摘要 目的：探讨丹参多酚酸盐（Sal B）对大鼠损伤后心肌修复的机制。方法：构建新生大鼠心肌细胞H9c2体外缺氧/复氧（H/R）模型,并分组为空白对照组、缺氧/复氧组（模型组）、缺氧/复氧+TNF-α表达质粒组(TNF-α组)和缺氧/复氧+Sal B处理组(Sal B组)。为检测细胞迁移实验,分组为对照组、模型组、H/R+DMSO+Vector组、H/R+Sal B+Vector组、H/R+DMSO+TNF-α组和H/R+Sal B+TNF-α组。通过MTT实验检测各组H9c2细胞活力;免疫荧光检测H9c2心肌细胞中TNF-α细胞表面受体TNFR-1和TNFR-2的表达水平;Western-blot和RT-qPCR检测TNF-α的mRNA和蛋白表达水平以及血管生成蛋白表达水平的影响;Transwell实验检测Sal B对缺氧/复氧处理的H9c2细胞迁移的影响。结果：与对照组相比,模型组H9c2心肌细胞的活力显著下降（P<0.05）;与模型组相比,Sal B组中H9c2心肌细胞的活力显著升高（P<0.05）。免疫荧光检测结果显示,H9c2心肌细胞质膜上TNFR-1和TNFR2均有表达。Western-blot和RT-qPCR结果显示,与模型组相比,Sal B组中H9c2心肌细胞的TNF-α的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),TNF-α组H9c2心肌细胞的TNF-α、Ang-2和VEGF-1蛋白的表达水平均显著升高（P<0.01）,Ang-1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。细胞迁移结果显示,与对照组相比,模型组和H/R+DMSO+Vector组H9c2细胞迁移能力显著下降（P<0.01）;与H/R组和H/R+DMSO+Vector组相比,H/R+Sal B+Vector组、H/R+DMSO+TNF-α组和H/R+Sal B+TNF-α组H9c2细胞迁移能力显著升高（P<0.05）。结论：Sal B能够通过上调TNF-α调控血管生成蛋白表达和促进H/R H9c2心肌细胞迁移,从而促进血管生成。     

人脐带间充质干细胞来源的外泌体减轻肝脏缺血再灌注损伤及机制的初步研究

目的探讨人脐带间充质干细胞来源的外泌体(huc MSCs-exo)对肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)是否具有保护作用及可能的作用机制。方法利用贴壁法提取原代人脐带间充质干细胞(huc MSCs),超速离心方法提取细胞培养上清中的外泌体,分别进行鉴定;在体外实验中利用L02细胞缺氧复氧损伤模型探究huc MSCs-exo对细胞凋亡蛋白表达水平的影响;在体内实验中建立C57BL/6小鼠70﹪HIRI模型,72只小鼠随机分成四组,分别为Sham组(n=18)、IRI组(n=18)、PBS组(n=18)和exo组(n=18)。术后第6 h(n=6)、12 h(n=6)及24 h(n=6)通过检测血清AST及ALT水平、进行肝脏HE染色及CASPASE-3免疫组化实验,进一步探究huc MSCs-exo对HIRI的作用,多组组间比较采用方差分析。结果首先成功分离提取原代huc MSCs及huc MSCs-exo并进行鉴定;在体外,通过Western Blot实验证明huc MSCs-exo可降低L02细胞缺氧复氧(1﹪O2缺氧6 h,复氧2 h)损伤后细胞凋亡蛋白cleaved-CASPASE-3及cleaved-PARP表达水平;在体内,huc MSCs-exo处理后血清转氨酶水平较IRI组有所降低,这种差异在再灌注12 h的AST[(2895.0±998.6)U/L vs(971.8±797.8)U/L,t=4.010,P=0.004]及再灌注24 h的AST[(1926.0±377.2)U/L vs(597.2±524.8)U/L,t=5.231,P=0.000]、ALT[(2074.0±750.3)U/L vs(555.3±493.8)U/L,t=4.379,P=0.002]中具有统计学意义,肝脏HE染色及肝组织CASPASE-3免疫组化结果同样提示huc MSCs-exo可减轻C57BL/6小鼠70﹪HIRI。结论 Huc MSCs-exo可通过抗凋亡机制减轻HIRI,这为临床缓解HIRI提供新的治疗方向,其具机制有待进行更深入的研究。     

3种间充质干细胞成软骨分化潜能比较

目的:比较骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细胞3种间充质干细胞的成软骨分化潜能,为软骨组织工程中种子细胞的选择提供实验依据。方法:采用贴壁法分别分离提取兔骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细胞3种间充质干细胞,并进行传代培养,绘制3种间充质干细胞的生长曲线并比较其倍增时间。将3种间充质干细胞成软骨诱导14 d后,行甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组化染色以观测3种细胞成软骨分化能力。结果:脂肪间充质干细胞的倍增时间短于骨髓间充质干细胞,滑膜间充质干细胞的倍增时间最短;3种细胞成软骨诱导14 d后均产生糖胺聚糖和II型胶原,且组与组之间II型胶原表达水平的差异有统计学意义,骨髓间充质干细胞组高于脂肪间充质干细胞组(P0.01),滑膜间充质干细胞组高于骨髓间充质干细胞组(P0.01)。结论:在一定的培养条件下,3种间充质干细胞均有一定的成软骨细胞分化潜能,滑膜间充质干细胞最快的增殖速度及最强的成软骨分化潜能。     

恒磁场抑制缺血缺氧条件下大鼠骨髓间充质干细胞凋亡

目的:研究恒磁场对体外缺血缺氧培养条件下大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs) 凋亡的影响并探讨其作用机制.方法:采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞(MNCs),于体外培养并由牛垂体提取物(PEX)诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞(MSCs).经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,将骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧条件下培养,通过TUNEL检测比较不同组别细胞的凋亡率和蛋白印迹法(western blot)来观察细胞中特定蛋白质的变化.结果:①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞培养成功.②缺血/缺氧组与缺血/缺氧+磁场组比较,缺血缺氧组的凋亡率显著性增加,Akt磷酸化水平显著上升(P＜0.05).提示恒磁场可以使PI3K(Phosphoinositide-3kinase)/Akt(ProteinkinaseB,PKB)信号通路被激活而抑制凋亡的发生.结论:恒磁场通过激活PI3K/Akt信号通路抑制体外缺血缺氧条件下培养的骨髓间充质干细胞的凋亡.