番茄红素对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧的保护作用以及其机制

目的:探讨番茄红素对心肌细胞缺氧复氧的保护作用以及其分子机制。方法:采用原代培养心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分8组:正常对照组,H/R组,H/R+番茄红素(1,2,4,8,16,32μmol/L)剂量组。观察各组细胞经H/R损伤后,细胞内天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化情况,选择正常对照组,H/R组,最佳番茄红素剂量组做MTT分析细胞凋亡,Western检测TRL 4以及NF-κB的表达。结果:番茄红素(16,8,4,2μmol/L)剂量组可显著降低缺氧/复氧损伤心肌细胞内AST、CK、LDH释放量及MDA的生成,并能提高SOD活性。此外番茄红素可减少心肌细胞缺氧/复氧损伤后的心肌凋亡,减少TRL 4受体以及NF-κB的表达。结论:番茄红素具有抗缺氧/复氧损伤,保护心肌细胞的作用,其机制可能是通过抑制TRL 4通路来实现的。     

三七皂苷对缺氧复氧心肌细胞损伤保护作用的研究

目的：研究三七皂苷对纯化培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法：采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,测定细胞凋亡率、caspase-3、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果：与正常组比较,模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率明显升高（P＆lt;0.01）,SOD活性明显降低（P＆lt;0.01）;三七皂苷组降低LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率,提高SOD活性,与缺氧/复氧组比较各实验指标差异均具有显著性（P＆lt;0.05）。结论：三七皂苷对缺氧/复氧心肌细胞损伤有保护作用,作用机制与清除氧自由基,抗脂质过氧化及降低细胞凋亡率有关。     

腺苷对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用

本研究旨在探讨腺苷 (adenosine ,ADO)对缺氧 /复氧 (hypoxia/reoxygenation ,H/R)心肌细胞的保护作用及其分子机制。将原代培养的新生大鼠心肌细胞分成H/R对照组和ADO (1 0 μmol/L)保护组。用倒置相差显微镜观察心肌细胞的生长状态。检测两组培养基质乳酸脱氢酶 (LDH)活性和心肌细胞Ca2 + 和丙二醛 (MDA)浓度。用ELISA法检测肿瘤坏死因子 (TNF α)的表达 ,并用凝胶电泳迁移率改变法 (EMSA)测定核因子 (NF κB)结合活性。所得结果如下 :(1)心肌细胞H/R培养后皱缩、变圆 ,伪足减少 ,ADO组心肌细胞的形态变化小于对照组 ;(2 )ADO减少缺氧和复氧期间心肌细胞LDH的漏出 (bothP <0 0 1) ;(3 )ADO降低缺氧和复氧期间心肌细胞内的Ca2 +浓度 (bothP <0 0 1) ;(4)ADO降低缺氧和复氧期间心肌细胞MDA浓度 (bothP <0 0 1) ;(5 )ADO抑制缺氧和复氧期间TNF α的表达 (bothP <0 0 1) ;(6)ADO抑制缺氧和复氧期间心肌细胞NF κB结合活性 (bothP <0 0 1)。以上结果提示 :(1)外源性ADO可减轻心肌细胞的H/R损伤 ;(2 )外源性ADO抑制H/R期间心肌细胞TNF α的表达 ;(3 )外源性ADO可能通过抑制心肌细胞NF κB结合活性下调TNF α的表达     

金属硫蛋白在心肌细胞保护中与抗氧化酶的关系

目的：探讨金属硫蛋白（MT）在心肌细胞缺氧／复氧损伤（H／R）和预缺氧（HRC）保护中与抗氧化酶的关系。方法：建立培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧模型,检测HPC、锌诱导、外源MT和MT抗体等处理下,心肌细胞MT含量变化及抗氧化酶（SOD,CAT,GSHpx）活力的相应变化。结果：HPC和锌诱导组MT含量及抗氧化酶的活力均显著高于H／R组P＜0. 05、P＜0.01）：外源MT处理后SOD活力显著高于对照组（P＜0.01）,CAT和GSHpx活力虽然显著低于对照组但显著高于H／R组（P＜0.01）;使用MT抗体后,酶活力最低。结论：MT参与HPC的心肌细胞保护作用,并通过保护抗氧化酶的活力的机制减轻H／R所致的心肌损伤。     

HOE642对减轻缺氧／复氧致未成熟兔心肌细胞内钙超载的作用

目的观察Na+/H+交换抑制剂HOE642（Cariporide）对缺氧／再复氧前后未成熟兔心肌细胞内游离钙离子浓度(［Ca2+］i）的影响,探讨HOE642对未成熟心肌保护机制。方法6枚新西兰幼兔心脏,用酶解法分离成单个未成熟兔心肌细胞悬液,每份细胞悬液均随机分为基础组、对照组和实验组,基础组未经缺氧直接测量细胞内Ca2+及心肌酶含量（CK、LDH）,而后两组均经受缺氧60min,再复氧30min后测量,其中实验组于缺氧时加入HOE642（1μmol／L）。用Flou-3／AM标记,激光扫描共聚焦显微镜测定单个未成熟免心肌细胞内游离钙浓度。另测定三组心肌细胞悬液中心肌酶含量（CK、LDH）。结果缺氧／再复氧后对照组未成熟兔心肌细胞内［Ca2+］i（2814±236/1375±102）及心肌酶漏出量明显高于缺氧前基础值(P＜0.01);再复氧后HOE642处理组心肌细胞内［Ca2+］i较缺氧前基础值增加不显著（1446±128/1375±102,P>0.05);而较未用药对照组明显减少（1446±128／2814±236,P<0.01）。而HOE642处理组细胞悬液心肌酶漏出量较基础值有所增加,但其相差不显著,而较对照组有心肌酶漏出量明显减少,两者相差非常显著（P＜0．01）。说明HOE642对缺氧／再复氧后未成熟兔心肌细胞内游离钙超载具有明显的抑制作用。结论HOE642对未成熟心肌的保护机制可能是抑制心肌细胞内游离钙超载引起的心肌缺血／再灌注损伤。     

δ-阿片受体在缺血后处理心肌保护中的作用

目的：探讨δ-阿片受体是否参与缺血后处理对抗心肌缺血/复灌（I/R）损伤和心肌细胞低氧/复氧（H/R）损伤作用及其机制。方法：采用离体大鼠心脏Langendorff灌流模型,全心停灌30 min、复灌120 min复制I/R模型。测定心室力学指标和复灌时冠脉流出液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性,实验结束测定心肌组织formazan含量。酶解分离的心肌细胞采用低氧60min、复氧60min复制H/R模型,测定心肌细胞存活率。结果：在离体心脏模型上,与I/R组相比,缺血后处理组（停灌后复灌即刻立即给予6次全心停灌/复灌循环）心肌组织的formazan含量明显增高,复灌期间冠脉流出液中LDH明显降低,同时缺血后处理明显改善心室力学指标,缓解冠脉流量的减少 在分离心肌细胞模型上,低氧后处理明显提高心肌细胞存活率。δ-阿片受体阻断剂naltrindole（NTI）和线粒体钙激活钾通道（KCa）阻断剂paxilline（Pax）在离体大鼠心脏模型和分离心肌细胞模型上均能明显减弱缺血后处理的作用。在心肌细胞模型上,与H/R组相比,δ-阿片受体激动剂DADLE明显提高心肌细胞存活率,其作用可被paxilline所阻断。结论：缺血后处理具有抗心肌缺血/复灌损伤的作用,这种保护作用可能与其激活δ-阿片受体和开放KCa有关。     

3,6-(二甲氨基)-二苯并碘杂六环葡萄糖酸盐对损伤心肌细胞的保护作用

目的：观察3,6-（二甲氨基）-二苯并碘杂六环葡萄糖酸盐（IHC-93）对培养心肌细胞损伤的影响。方法：在培养的心肌细胞建立低氧／复氧损伤模型和过氧化氢损伤模型,观察心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA含量,以研究IHC-93对培养心肌细胞损伤的影响。结果：10、20、40μmol／LIHC-93呈剂量依赖地提高损伤心肌细胞存活率和SOD的活性,减少LDH的释放,降低MDA含量。结论：IHC-93对损伤心肌细胞具有直接保护作用。     

藏药镰形棘豆对缺氧/复氧H_9C_2心肌细胞损伤的保护作用

探讨藏药镰形棘豆(OFB)提取物对缺氧/复氧(H/R)H_9C_2心肌细胞损伤的保护作用。方法:采用三气培养箱培养法建立H_9C_2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。实验分为3组:正常细胞对照组;缺氧/复氧损伤组(H/R);7个药物加缺氧/复氧损伤组(H/R+OFB);于缺氧/复氧开始时分别加入终浓度为0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L、300 mg/L、600 mg/L、1 000 mg/L的镰形棘豆提取物,以细胞活力为指标,利用MTS法测定药物对细胞活力的影响。检测镰形棘豆乙酸乙酯水甲醇压柱组分与氯仿萃取组分不同给药剂量对H_9C_2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。结果:与模型组相比药物处理组显著升高缺氧/复氧H_9C_2心肌细胞活力(p0.05)。结论:藏药镰形棘豆对H_9C_2心肌细胞的缺氧/复氧损伤有保护作用。     

丹参多酚酸盐通过调控肿瘤坏死因子促进大鼠心肌修复的机制研究

摘要 目的：探讨丹参多酚酸盐（Sal B）对大鼠损伤后心肌修复的机制。方法：构建新生大鼠心肌细胞H9c2体外缺氧/复氧（H/R）模型,并分组为空白对照组、缺氧/复氧组（模型组）、缺氧/复氧+TNF-α表达质粒组(TNF-α组)和缺氧/复氧+Sal B处理组(Sal B组)。为检测细胞迁移实验,分组为对照组、模型组、H/R+DMSO+Vector组、H/R+Sal B+Vector组、H/R+DMSO+TNF-α组和H/R+Sal B+TNF-α组。通过MTT实验检测各组H9c2细胞活力;免疫荧光检测H9c2心肌细胞中TNF-α细胞表面受体TNFR-1和TNFR-2的表达水平;Western-blot和RT-qPCR检测TNF-α的mRNA和蛋白表达水平以及血管生成蛋白表达水平的影响;Transwell实验检测Sal B对缺氧/复氧处理的H9c2细胞迁移的影响。结果：与对照组相比,模型组H9c2心肌细胞的活力显著下降（P<0.05）;与模型组相比,Sal B组中H9c2心肌细胞的活力显著升高（P<0.05）。免疫荧光检测结果显示,H9c2心肌细胞质膜上TNFR-1和TNFR2均有表达。Western-blot和RT-qPCR结果显示,与模型组相比,Sal B组中H9c2心肌细胞的TNF-α的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),TNF-α组H9c2心肌细胞的TNF-α、Ang-2和VEGF-1蛋白的表达水平均显著升高（P<0.01）,Ang-1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。细胞迁移结果显示,与对照组相比,模型组和H/R+DMSO+Vector组H9c2细胞迁移能力显著下降（P<0.01）;与H/R组和H/R+DMSO+Vector组相比,H/R+Sal B+Vector组、H/R+DMSO+TNF-α组和H/R+Sal B+TNF-α组H9c2细胞迁移能力显著升高（P<0.05）。结论：Sal B能够通过上调TNF-α调控血管生成蛋白表达和促进H/R H9c2心肌细胞迁移,从而促进血管生成。     

脂联素对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

本研究通过在大鼠乳鼠心室肌细胞上建立缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,模拟在体心肌缺血/再灌注损伤,观察脂联素(adiponectin,APN)对心肌细胞H/R损伤的影响,并探讨其作用机制。采用胰蛋白酶消化法原代培养乳鼠心室肌细胞,α-肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。选用培养72h的单层心肌细胞进行实验,随机分为5组:对照组、单纯H/R组、H/R+APN组、H/R+APN+腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)特异性抑制剂阿糖胞苷(AraA)组、H/R+AraA组。观察各组心肌细胞形态及自发搏动频率,用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡情况,并测定细胞丙二醛(MDA)含量及培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙荧光强度,Western blot检测各组心肌细胞AMPK磷酸化水平。结果显示,与对照组相比,单纯H/R组细胞生长状态较差,搏动频率减慢甚至消失,DNA电泳呈凋亡特征性的梯状条带,细胞凋亡率显著增加,胞浆MDA水平增高,上清液中SOD活性下降,胞内钙荧光强度明显增高,AMPK磷酸化水平升高(P0.05)。与H/R组细胞相比,APN预处理后再进行H/R的心肌细胞搏动频率较快,凋亡率明显减少,MDA水平明显下降,SOD活性明显升高,心肌细胞AMPK磷酸化水平明显增高(P0.05)。AraA可以阻断APN的上述保护作用。以上结果表明,APN可减轻H/R导致的心肌细胞凋亡,减轻脂质过氧化及细胞内钙超载,这一保护作用可能与AMPK途径激活有关。     

牛磺酸对肢体缺血／再灌注后肝损伤大鼠TNF-α、NF-κB表达的影响

目的：探讨给予牛磺酸预处理对肢体缺血／再灌注（limb ischemia-reperfusion,H／R）后大鼠肝脏损伤及,INn、NF—KB表达的影响及意义。方法：采用Wistar大鼠建立LI/R损伤模型,随机分为4组（n=10）：对照（C）组,缺血／再灌注（I／R）组,牛磺酸（T）组和牛磺酸＋缺血／再灌注（TR）组。比色法测定动物血浆ALT、AST、MDA,肝组织MDA、MPO、DNA裂解率和钙含量,放免法检测血浆及肝组织TNF-α水平;HE染色观察肝脏组织形态改变;免疫组化法观察NF-κB蛋白表达。结果：与C组比较,I／R和TR组各损伤性指标、TNF-α水平均升高,NF-κB蛋白表达增高（P〈0．01）;但TR组上述各项指标较I／R组显著降低。结论：牛磺酸预处理可减轻大鼠LI／R所致肝脏损伤,降低TNF-α、NF-κB表达。     

2类多巴胺受体对心肌缺血后处理保护作用的影响及机制

目的：观察2类多巴胺受体（DR2）在心肌缺血后处理保护中的作用,并探讨其机制。方法：复制原代培养乳鼠心肌细胞缺血后处理模型,细胞随机分为正常组（Control）、缺血/再灌注组（I/R）、缺血后处理组（PC）、缺血后处理＋DR2激动剂组（PC＋Bro）、缺血后处理＋DR2抑制剂组（PC＋Hal）、缺血后处理＋DR2抑制剂＋激动剂组（PC＋Hal＋Bro）。比色法检测细胞培养液乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;透射电镜观察细胞超微结构改变;流式细胞仪检测细胞凋亡变化;Western blot方法检测DR2蛋白表达、p-p38和p-JNK的活性。结果：与正常组相比,I/R能够增加DR2蛋白的表达,升高LDH活性和MDA含量,降低SOD活性,加重细胞损伤和细胞凋亡,上调p-p38和p-JNK的活性;与I/R组比较,PC进一步增加DR2蛋白的表达,降低LDH活性和MDA含量,增加SOD活性,减轻细胞损伤和细胞凋亡,下调p-p38和p-JNK的活性,Bro增强了PC的心肌保护作用,Hal则可取消Bro的这种作用。结论：DR2激活通过下调p-p38和p-JNK的活性参与缺血后处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。     

异丙酚对大鼠心肌缺血/再灌注损伤时NF-κB活化和细胞凋亡的影响

目的:观察异丙酚对大鼠心肌缺血/再灌注时核因子-κB(NF-κB)的活化和细胞凋亡的影响,以探讨异丙酚的心肌保护作用机制。方法:采用阻断大鼠左冠状动脉前降支30min,再灌注2h心肌缺血/再灌注损伤模型。60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)和异丙酚3、6、12mg/(kg.h)组。光、电镜观察心肌组织的形态学变化。免疫组化染色分析心肌组织中NF-κB的核移位,Western blot检测心肌组织NF-κB和caspase-3的表达。原位末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡。结果:I/R组心肌纤维排列紊乱,心肌细胞水肿;线粒体膜肿胀,嵴排列紊乱甚至溶解消失。与I/R组相比,6,12mg/(kg·h)组异丙酚组心肌损伤明显减轻。与Sham组相比,I/R组NF-κB活化,明显从细胞浆移位于细胞核,表达量也显著增加(P0.05);心肌caspase-3表达增强(P0.01),心肌细胞凋亡指数升高(P0.05)。而异丙酚6mg/(kg·h)、12mg/(kg·h)组,NF-κB从细胞浆向细胞核的移位被明显限制,NF-κB的表达量也明显低于I/R组(P均0.05);心肌caspase-3表达减弱,心肌细胞凋亡指数减少(与I/R组相比,P0.05)。结论:异丙酚的心肌保护作用可能与其抑制NF-κB的活化,下调caspase-3的表达,从而抑制心肌细胞凋亡有关。     

Exploration on Mechanism of a New Type of Melatonin Receptor Agonist Neu-p11 in Hypoxia–Reoxygenation Injury of Myocardial Cells

To explore the mechanism of a new type of melatonin receptor agonist Neu-p11 in hypoxia–reoxygenation injury of myocardial cells. Hypoxia/reoxygenation (H/R) model of H9c2 myocardial cells was established, and the cells were divided into control group, H/R group, and Neu-p11 group. Apoptosis rates of myocardial cells in different groups, the contents of creatinine kinase (CK), lactic dehydrogenase (LDH), superoxide dismutase (SOD), and malondialdehyde (MDA) in cell culture media were compared. Myocardial cells in control group showed diverse shape, and the refractivity of cells were high and the pulse was strong with synchronous rhythm of 60–80/min; The refractivity of myocardial cells in H/R group decreased, the pseudopodium was thinner, and the rhythm was reduced to 30–40/min; The morphology and refractivity of myocardial cells in Neu-p11 group were significantly improved with rhythm of 50–60/min. The apoptosis rates in the control group, the H/R group, and the Neu-p11 group were 2.48, 39.66, and 17.94 %, respectively. Levels of CK, LDH, and MDA were significantly decreased in Neu-p11 compared with H/R group, yet, both of which were significantly higher than that in control group. The SOD level was significantly lower in H/R group compared to that in control group, and Neu-p11 group with no statistical difference between the Neu-p11 group and the control group. Neu-p11 has protective effects on hypoxia–reoxygenation injury of myocardial cells. It inhibits cell apoptosis and improves the morphology and rhythm of myocardial cells; It alleviates injury of cell membrane by reducing its permeability, which can stabilize myocardial cell membrane; It also alleviates lipid peroxidation and protects mitochondria from myocardial ischemia/reperfusion injury.     

雌激素对去卵巢大鼠离体心脏缺血／再灌注损伤的保护作用

目的：探讨雌激素对去卵巢大鼠离体心脏缺血／再灌注损伤的保护作用。方法：成年SD雌鼠,随机分为假手术组（Sham）,双侧卵巢切除组（Ovx）和双侧卵巢切除后补充17β-雌二醇组（Ovx＋E2）。各组离体心脏再随机分为不同时间的缺血再灌注亚组。测量的指标包括冠脉流出液中LDH及CK含量、心室肌细胞存活率及产率、基础状态和异丙肾上腺素（ISO）刺激状态下收缩幅度。结果：30min缺血及其各复灌纽均显著增加冠脉流出液中LDH、CK的释放量。Ovx组LDH、CK漏出在30min缺血及再灌注条件下,显著高于正常灌注组,而Ovx＋E2组可减轻心肌损伤,减少LDH、CK的释放。10min和20min缺血对心肌细胞存活率、产率及冠脉流出液中LDH、CK含量影响均不明显。Sham、Ovx、Ovx＋E2各组心肌细胞基础收缩幅度在正常和10minⅠ＋30minR灌注条件下无显著差异。Ovx显著增加其他各组心肌细胞基础收缩和ISO刺激收缩幅度,Ovx＋E2可使其降至Sham水平。结论：雌激素对去卵巢大鼠心肌缺血／再灌注损伤具有保护作用。     

ERK1／2信号通路对黄芪苷Ⅳ抗H2O2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用

目的：研究黄芪苷Ⅳ（AST）是否通过细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。方法：用200μmoL／L的H2O2处理细胞6h,采用MTT法检测细胞存活率,建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型;比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、总超氧化物歧化酶（T—SOD）和锰超氧化物歧化酶（Mn—SOD）活力以及丙二醛（MDA）含量;Western blot检测H9c2细胞ERK1／2蛋白的磷酸化水平。结果：在H2O2浓度为200μmol／L作用6h条件下,细胞存活率降低程度适中,实验结果重复性好,确定后续实验采用200μmol／L H2O2作用6h建立模型。与H2O2组比较,10mg／L及20mg／L AST均显著提高细胞存活率（P〈0．01）,使细胞培养液中LDH活性显著降低（P〈0．01）,T—SOD及Mn—SOD活力显著提高（P〈0．01）,MDA含量显著降低（P〈0．01）。10mg/L及20mg/L AST均显著增加H2O2损伤的H9c2细胞p—ERK1／2蛋白的表达（P〈0．01）,当用PD98059（ERK1／2的抑制剂）预处理后,AST的作用则被取消。结论：黄芪苷Ⅳ可以通过ERK1／2通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。     

Adiponectin up-regulates the expression of T-cadherin in cardiomyocytes injured by hypoxia/reoxygenation

The aim of the present study was to investigate the effects of adiponectin (APN) on the expression of T-cadherin in cultured Sprague-Dawley (SD) rat cardiomyocytes injured by hypoxia/reoxygenation (H/R). Primary myocardial cells from neonatal rats were obtained by enzymatic digestion. The cells were divided into control group, H/R group and H/R+APN (3, 10, 20 and 30 μg/mL) groups. The H/R group was incubated in anoxic environment (anoxic solution saturated with high concentration N2) for 3 h, and then in the reoxygenation environment (the reoxygenation solution saturated with pure oxygen) for 1 h. The H/R+APN group was pretreated with different concentrations of APN for 24 h prior to the initiation of H/R. The content of lactate dehydrogenase (LDH) was measured by chemistry chromatometry. Cellular apoptosis was analyzed by flow cytometry and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). The expression of T-cadherin was detected by RT-PCR and Western blotting. The results showed that, compared with control group, the apoptotic rate and release of LDH were significantly increased in the H/R group, whereas the expressions of T-cad mRNA and protein were decreased. Pretreating with APN significantly and dose-dependently decreased apoptotic rate and LDH release, and up-regulated T-cad mRNA and protein level in rat neonatal cardiomyocytes under H/R conditions. These results suggest that APN may protect cardiomyocytes against H/R-induced injury by up-regulating H/R-decreased T-cad expression.     

黄芪甲苷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的作用研究

目的:观察黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AsⅣ)后处理对缺氧复氧损伤(simulated ischemia reperfusion injury,SI/RI)的SD乳鼠心肌细胞是否具有保护作用。方法:将乳鼠原代心肌细胞平均分为五组,即空白对照组(Control)、缺氧复氧处理组(SI/RI)、黄芪甲苷预处理(5,10、20μM)+SI/RI组(AsIV+SI/RI)。各组细胞经处理后,四氮唑溴盐比色法(MTT)检测各组细胞存活率;TUNEL染色法测定各组细胞凋亡率;SOD测试盒检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)含量,总嘌呤氧化酶(XOD)测试盒检测丙二醛(MDA)含量。Western blot法检测各组细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果:与空白组相比,缺氧复氧损伤组细胞活力显著下降(P0.05),凋亡率显著上升(P0.05),其培养液中SOD水平显著降低(P0.05),MDA水平显著升高。而不同浓度AsⅣ后处理组的心肌细胞存活率显著上升,凋亡率显著下降,培养液中SOD水平显著上升,MDA水平显著下降(P0.05),且呈浓度呈依赖性。Western blot结果显示AsⅣ后处理组细胞中的Bcl-2表达明显上升,Caspase-3明显下降。结论:黄芪甲苷后处理对缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤具有显著的保护作用,能够显著上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,下调促凋亡蛋白Caspase-3的表达。