血管内皮细胞生长抑制因子N端部分缺失对生物活性的影响

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年来发现的一类TNF家族新成员 ,具有抑制内皮细胞增殖与新血管生成的作用。为了探讨VEGI蛋白N端对其活性的影响 ,进行了VEGI与TNF家族成员基于结构知识的一级结构序列联配 ,在此基础上构建、表达了N端缺失 43与 5 1个氨基酸的VEGI突变体。N端缺失 43个氨基酸的VEGI(VEGI131)表达量占总菌体蛋白质的 2 5 .2 % ,N端缺失 5 1个氨基酸的VEGI(VE GI12 3)表达量为 2 7.8% ,纯化后纯度分别为 92 .5 % (VEGI131)和 91.6 % (VEGI12 3)。VEGI131可明显抑制人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖 ,IC50 约为 35mg/L ,而VEGI12 3在同样条件下几乎无抑制作用 ,野生型VEGI即N端缺失 2 3个氨基酸的VEGI(VEGI151,由作者实验室制备 )IC50 约为 2 7mg/L。鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验证明 ,VEGI151可使主血管数显著减少 ,VEGI131可使主血管变细 ,毛细血管数减少 ,而VEGI12 3 与对照组相比无明显变化。体内外研究显示VEGI活性从高到低依次为 :VEGI151>VEGI131>VEGI12 3。结果提示 :VEGI的N端前 43个氨基酸对活性无明显影响 ,而第 44～ 5 1位氨基酸对其生物活性的发挥具有重要作用。     

新型血管内皮细胞抑制因子VEGI_(151)的基因克隆表达及其活性

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ,并通过原核表达系统进行表达 (命名为VEGI151) ,表达量为 2 5 .5 % ,纯化后纯度达92 .5 %。通过生物学效应检测 ,发现VEGI151可明显抑制无血清培养基中内皮细胞的增殖 ,2 4h时VEGI151对内皮细胞的IC50 为 10mg/L ,0 .6 13mg/L时使内皮细胞在 36h内完全凋亡。通过检测体外培养肿瘤细胞 (A5 49、HepG2、Hela等 )的存活率 ,未发现明显的增殖或抑制效应。提示VEGI是一种主要作用于血管内皮细胞 ,在新生血管性疾病及肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。     

嵌合分子VEGI~+的构建、表达及其抗血管生成和抗肿瘤活性

血管内皮细胞生长抑制因子VEGI是肿瘤坏死因子超家族新成员,通过诱导内皮细胞凋亡而抑制肿瘤生长。通过PCR方法将CTTHWGFTLC与VEGI23-174氨基酸相连,构成嵌合分子VEGI+。原核表达的VEGI+经过纯化后,以非重折叠的沉淀形式进行活性实验,VEGI+能够抑制鸡胚尿囊膜血管新生,对于Lewis肺癌小鼠移植瘤,5mgL组抑瘤率99.7%,10mgL组抑瘤率96%,25mgL组抑瘤率83%。实验说明VEGI+通过抑制血管新生对移植瘤的早期发展起抑制作用。     

嵌合分子VEGI~+的构建、表达及其抗血管生成和抗肿瘤活性

血管内皮细胞生长抑制因子VEGI是肿瘤坏死因子超家族新成员,通过诱导内皮细胞凋亡而抑制肿瘤生长。通过PCR方法将CTTHWGFTLC与VEGI23-174氨基酸相连,构成嵌合分子VEGI+。原核表达的VEGI+经过纯化后,以非重折叠的沉淀形式进行活性实验,VEGI+能够抑制鸡胚尿囊膜血管新生,对于Lewis肺癌小鼠移植瘤,5mgL组抑瘤率99.7%,10mgL组抑瘤率96%,25mgL组抑瘤率83%。实验说明VEGI+通过抑制血管新生对移植瘤的早期发展起抑制作用。     

血管生长异常与流产的关系研究进展

微血管密度异常、血管生长因子(VEGF、PDGF等)及其受体表达异常通过一系列级联反应导致血管异常生长的结果。众多因子均和血管形成有关,在妊娠过程中对胎盘的血管发育有着重要的作用,导致滋养细胞的表型转换障碍、血管结构发育不良、血管生成受阻、血管数目减少,引起胎盘血管重铸障碍,胎儿胎盘单位灌注不足发生流产。研究表明许多自然流产的发生与胎盘组织中血管增生平衡和胎儿血液供应不足有密切关系,从而认为血管生长异常是导致流产的又一重要因素。随着研究的深入进展血管的异常生长与流产的关系是有确定关系的,对于血管生长异常所致的流产,抑制血管各种血管因子的形成、阻止其与受体结合,从而抑制血管的异常生长最终达到克服流产的发展,无异于把幸福带给更多的家庭,不仅是妇产科发展的里程碑,更是人类医学发展史上光辉的一笔。     

肿瘤生长抑制因子—血管抑素和内皮抑素

血管生成是肿瘤生长转移过程中的一个关键环节,因此控制血管生成成为抑制肿瘤生长的重要途径之一。目前已发现了许多血管生成抑制因子,尤以血管抑素和内皮抑素最为引人瞩目。综述了两种肿瘤生长抑制因子的发现、分子结构、生物学活性等,尤其侧重于它们抗肿瘤作用的实验研究。血管抑素与内皮抑素的发现与研究为恶性肿瘤的治疗开辟了新的道路。     

兔后肢缺血诱导侧支血管生长过程中巨噬细胞浸润的变化

目的检测兔侧支血管生长过程中各时期巨噬细胞的浸润情况;方法单侧结扎兔后肢股动脉,随后将股动脉结扎的远侧端连到相邻的静脉上造成动静脉短路,另侧为对照组,分别存活2d,1周,2周,4周后处死,用特异性的巨噬细胞抗体(RAM11)免疫荧光组织化学结合共聚焦技术检测侧支血管壁内巨噬细胞的数目及其分布;结果在正常血管,其外膜有少量巨噬细胞的存在,股动脉结扎后2d,侧支血管外膜巨噬细胞的数目增加,并黏附至内皮细胞,结扎1周后,侧支血管外膜巨噬细胞的数目显著增加,中膜有巨噬细胞的浸润,结扎2周后,侧支血管外膜巨噬细胞的数目减少,但仍高于正常血管,结扎4周后,侧支血管巨噬细胞的数目明显减少,跟正常血管情况类似,统计学分析结果表明,在结扎后2d、一周、二周和四周不同的时间,巨噬细胞在侧支血管的分布差异具有显著性;结论侧支血管发育过程中巨噬细胞的浸润和侧支血管的形成密切相关,提示巨噬细胞参与了侧支血管的生长发育。     

EphrinB2/EphB4 在血管生长中的作用及中医药研究展望*

近年来,有关ephrin及其Eph受体的作用研究已从神经系统方面逐步向血管生长扩展。已有研究表明ephrinB2/EphB4及其独特的双向信号转导几乎参与血管生长的每个方面,涉及血管发育过程中的动静脉分化、胚胎后血管新生包括内皮细胞增殖、迁移、粘附和分化等过程,且与VEGF、Notch等血管新生调控因子关系密切。另外,实验表明活血化瘀名方血府逐瘀汤显著的促血管新生作用与ephrinB2/EphB4相关,说明中医药促血管新生中ephrinB2/EphB4具有重要作用。本文部分总结了ephrinB2/EphB4在血管生长中的作用,并提出中医药在这方面的展望。     

基质衍生的血管生成抑制剂研究进展

血管的生成与肿瘤密切相关,抑制肿瘤血管生成可以调节肿瘤的生长。体内存在着内源性的促血管生成因子和抑制因子的平衡,当促血管形成因子增强就会产生新生血管供肿瘤生长,而当抑制因子增强则会抑制肿瘤的生长。本文即对细胞外基质衍生的内源性血管生成抑制因子TSP、内皮他丁、Arresten;Canstatin、Endorepellin、Fibulin、Tumstatin等的特性、应用和作用机制等作一总结。     

基质衍生的血管生成抑制剂研究进展

血管的生成与肿瘤密切相关,抑制肿瘤血管生成可以调节肿瘤的生长。体内存在着内源性的促血管生成因子和抑制因子的平衡,当促血管形成因子增强就会产生新生血管供肿瘤生长,而当抑制因子增强则会抑制肿瘤的生长。本文即对细胞外基质衍生的内源性血管生成抑制因子TSP、内皮他丁、Arresten;Canstatin、Endorepellin、Fibulin、Tumstatin等的特性、应用和作用机制等作一总结。     

血管发生和发展的分子机制

血管生长是胚胎发育的必然生理过程,也在损伤修复,缺血,肿瘤,炎症,类风湿和糖尿病视网膜病等情况中起重要作用。血管生长首先从内皮细胞增生开始,内皮细胞的增生受许多因素的影响,在不同条件下以不同的生长方式,不同来源生长。平滑肌细胞是血管壁的重要组成成分,影响其发生的因素也很多,维持血管正常生长是由促进和抑制两种机制相互协调而共同控制的,一旦此平衡被破坏,即引起一些病理变化。     

人血管内皮细胞生长抑制因子在巴斯德毕酵母中的分泌表达

血管内皮细胞生长抑制因子肿瘤部位新生血管的形成,切断肿瘤细胞营养供应及废物排泄通道,抑制肿瘤细胞恶性增殖。将编码成熟的人血管内皮细胞生长抑制因子基因克隆到表达载体pPICZα中,电转化P.pasto-ris GS115菌株,抗生素Zeocin^TM浓度梯度筛选高抗性转化子,PCR筛选阳性重组菌株。经表型鉴定后,用甲醇进行诱导表达,SDS－PAGE和Western^TM浓度筛选高抗性转化子,PCR筛选阳性重组菌株。经表表型鉴定后,用甲醇进行诱导表达,SDS－PAGE和Western印迹杂交结果证实了表达产物为重组人血管内皮细胞生长抑制因子-his6融合蛋白,表达量约为5mg/L。经细胞毒性试验测定,表达产物对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖具有较明显的抑制作用。     

源于Ⅳ型胶原的肿瘤血管生成抑制剂

新血管生成是各种生理和病理过程发生的基础。在胚胎形成和胎盘发育等正常生理过程中,新血管的生成是至关重要的;然而对于一些疾病的产生,特别是肿瘤的生长、进展和转移,同样离不开血管生成的作用。伴随着“抗肿瘤血管生成疗法”的提出,控制血管生成“开关”的血管生成刺激因子和抑制因子成为研究的热点。Arresten、Canstatin、Tumstatin和Hexastatin是近些年发现的内源性的血管生成抑制因子,它们同系Ⅳ型胶原α链的非胶原区NC1,具有相似的结构和分子量大小,现有研究表明,它们能与内皮细胞表面整合素受体相结合,有效地抑制内皮细胞的增殖和迁移,降低肿瘤组织的微血管密度,切断肿瘤的营养和氧气供给,从而抑制肿瘤的生长和转移。对其作用机制的研究,将有助于肿瘤血管生成抑制剂新药的研发。     

肿瘤血管生成抑制剂的作用机制研究进展

肿瘤血管生成抑制剂批能破坏或抑制血管生成,有效地阻止肿瘤生长和转移的药物,可分为特异性和非特异性两大类。其作用机制主要有：（１）调控血管形成生长因子;（２）抑制基底膜降解;（３）影响信号转导通路;（４）调控细胞生长周期;（５）调控肿瘤机关基因。本文对其作用机制的进展作一综述。     

氨离子浓度对重组毕赤酵母的生长和血管生长抑制素表达的影响

本研究采用流加补料培养方式培养重组巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）,表达血管生长抑制素（Angiostatin）。整个培养过程分为甘油为碳源的生长阶段和以甲醇为碳源的诱导阶段。全过程用氨水调节pH时,诱导阶段菌体生长受到抑制,蛋白的最大表达量为9.08mg/L。进行不同氨离子浓度的摇瓶培养,证实在以甲醇为碳源时,氨离子浓度对菌体的生长有明显的影响。高密度培养中改用2mol/L的KOH溶液调节pH,诱导阶段菌体有缓慢的生长,蛋白最大表达量增为20mg/L。     

水通道 AQP1 敲除小鼠肿瘤血管生成障碍及肿瘤生长减缓

血管生成是肿瘤生长、浸润和转移的必要步骤. 肿瘤血管生成涉及瘤旁组织血管内皮细胞增殖、向肿瘤细胞团内迁移以及管腔形成,目前机理尚不完全清楚. 水通道 AQP1 在多种肿瘤血管内皮高表达,提示其可能参与肿瘤血管的生成过程. 应用 AQP1 敲除小鼠荷瘤实验证实了 AQP1 在黑色素瘤生长和血管新生中的作用. 结果表明,皮下接种的黑色素瘤在 AQP1 敲除小鼠的生长较之在野生型小鼠延迟近 30％ (P<0.01). 免疫组化与肿 瘤病理形态学分析显示, AQP1 在野生型小鼠黑色素瘤血管内皮细胞上高表达,而在 AQP1 敲除小鼠黑色素瘤血管内皮细胞呈阴性表达. 在病理结构上,黑色素瘤细胞围绕血管分支呈岛状分布. 野生型小鼠黑色素瘤内血管管腔较细小,而 AQP1(－/－)小鼠黑色素瘤内血管床显著膨大. AQP1(－/－)小鼠肿瘤内平均微血管密度 (47/mm²) 较之 AQP1(＋/＋) 肿瘤 (142/mm²) 减少 67％ (P<0.01). 围绕 AQP1(－/－) 肿瘤血管的肿瘤细胞岛周边坏死区域明显大于 AQP1(＋/＋)肿瘤. 上述结果提出确切证据表明, AQP1 缺失使肿瘤血管生成发生障碍,从而影响了肿瘤血液供应和肿瘤生长. AQP1参与肿瘤血管生成的机理值得深入研究.     

抗血管生成疗法及糖类血管生成抑制剂的研究进展

血管生成抑制剂是目前抗肿瘤药物的研究热点,本文综述了新生血管形成的机制和调控,以及抗血管生成疗法在抗肿瘤领域的研究状况,并着重叙述了糖类化合物作为血管生成抑制剂的研究进展以及相关的构效关系.     

人血管内皮细胞生长抑制因子在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

血管内皮细胞生长抑制因子抑制肿瘤部位新生血管的形成,切断肿瘤细胞营养供应及废物排泄通道,抑制肿瘤细胞恶性增殖。将编码成熟的人血管内皮细胞生长抑制因子基因克隆到表达载体pPICZα中,电转化P.pastorisGS115菌株,抗生素ZeocinTM浓度梯度筛选高抗性转化子,PCR筛选阳性重组菌株。经表型鉴定后,用甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹杂交结果证实了表达产物为重组人血管内皮细胞生长抑制因子-his6融合蛋白,表达量约为5mg/L。经细胞毒性试验测定,表达产物对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖具有较明显的抑制作用。     

《癌细胞》：控制血管再生可抑制癌细胞生长

英国西英格兰大学布里斯托尔分校和布里斯托尔大学等机构联合发现。在一种特殊肿瘤的基因变异中。血管再生方式发生改变。调控血管再生的主开关被打开。为癌细胞建造运输营养的血管通道。而瞄准这一主开关就可能预防或阻止癌细胞再造血管，切断其营养供给途径。相关论文发表在最新的《癌细胞》期刊上，为研究癌症疗法开辟了新方向。     

内皮生长抑制蛋白

1971年 ,Ｆｏｌｋｍａｎ指出 ,肿瘤生长依赖于血管生成。人们由此想到可通过抑制肿瘤相关的血管生成以抑制肿瘤。 1 996年 ,Ｆｏｌｋｍａｎ和Ｏ′Ｒｅｉｌｌｙ发现了内皮生长抑制蛋白 (ｅｎｄｏ ｓｔａｔｉｎ)。内皮生长抑制蛋白最初偶然在血管内皮瘤 (ＥＯＭＡ)细胞中发现 ,可抑制内皮细胞的增殖 ,是天然而有效的血管生成抑制剂。它是胶原ＸⅧ的Ｃ 端球形结构域部分 ,活性形式为可溶性的单体 ,分布广泛。免疫化学分析表明 ,它在成体小鼠许多血管壁中和其它基膜区域有分布 ,主动脉和其它大动脉管壁最为丰富 ,静脉管壁其次 ,小动脉和毛细血管…