忽地笑鳞片的组织培养和植株再生

忽地笑(Lycoris aurea)是一种多年生草本花卉。我们将径宽5cm的忽地笑鳞茎切去根系,洗净后剥去一层外围鳞片,经常规方法进行消毒后,将鳞茎切成宽0.4—0.6cm,长0.7cm,带有鳞茎盘或不带有鳞茎盘的鳞片切块,接种到MS基本培养基,附加不同浓度的6-BA、NAA,或IAA、IBA的固体培养基中。每天光照8—10小时,光强1000—1500lx,温度25±2℃。     

忽地笑二级侧脉凸起突变体相关基因表达差异分析与克隆

忽地笑Raised Secondary Lateral Veins (RSLV)突变体平行脉间横向二级侧脉显著凸起, 生长不良, 雄蕊完全退化。本研究利用表达型噬菌体载体ZAP构建了野生型和突变体忽地笑叶片cDNA文库, 分别随机挑取cDNA克隆进行5′端测序, 共得到3,122条有效ESTs。利用这些ESTs序列, 选择非冗余基因, 设计512条70 mer的特异性序列为寡核苷酸探针, 制作芯片, 对忽地笑野生型和突变体叶器官进行基因表达谱分析。进一步采用实时定量PCR技术验证芯片实验结果, 最终确定所检测的基因中, 有5个基因在突变型和野生型间表达差异显著, 分别是韧皮部蛋白2 (phloem protein 2, PP2)、铁蛋白(ferritin)、果胶甲酯酶(pectin methyl esterases, PMEs), 以及叶绿素a/b结合蛋白和丙酮酸脱羧酶等。克隆获得了其全长cDNA, 并探讨了这些差异基因与忽地笑突变型形成的可能关系。     

基于高通量测序的两种典型忽地笑栽培土壤根际真菌群落多样性

【背景】忽地笑为传统中药材,可用于治疗老年性痴呆症、重症肌无力等疾病,具有重要的药用价值。腐殖土(壤土)适宜忽地笑的生长与栽培,黄棕壤(粘性土)对其生长不利。根际微生物可促进或抑制植物生长,直接影响药用植物产量和有效成分含量的变化,因此近年来对药用植物与根际微生物关系的研究得到了高度重视。【目的】通过2种栽培土壤根际真菌的群落结构及多样性研究,旨在探讨根际真菌对忽地笑生长发育的影响。【方法】提取土壤总DNA,采用高通量测序及生物信息统计分析等方法进行研究。【结果】腐殖土和黄棕壤分别获得真菌ITS1序列42 130和30 176条;腐殖土和黄棕壤根际真菌类群分别划分为6门25纲61目123科208属和5门20纲48目85科138属,最优势门类均为子囊菌Ascomycota (相对丰度70%),但主要优势属及多样性指数等存在较大差异,其中腐殖土的主要优势类群有Ascomycota_unclassified、Fusarium、Zopfiella、Chaetomiaceae_unclassified、Ceratobasidium、Mortierella等,而黄棕壤的主要优势类群为Sordariomycetes_unclassified、 Fusarium、 Acremonium、 Rhizoctonia、Nectriaceae_unclassified、Hymenoscyphus等;通过SPSS统计软件分析表明,腐殖土的Ascomycota_unclassified、Zopfiella、Ceratobasidium、Mortierella等优势类群与忽地笑鳞茎中石蒜碱含量之间呈极显著正相关性。【结论】适宜栽培忽地笑的腐殖土根际真菌的遗传多样性比黄棕壤更丰富;腐殖土根际主要优势类群Ascomycota_unclassified、Zopfiella、Ceratobasidium等可能有利于忽地笑生长发育及其石蒜碱等生物碱积累。     

石蒜属植物多糖组成的分析比较研究

对五种石蒜属植物:安徽石蒜、中国石蒜、忽地笑、换锦花、石蒜多糖的结构组成进行了对比分析。结果表明,安徽石蒜多糖与其他四种植物多糖差异较大,而忽地笑多糖和石蒜多糖相似、中国石蒜多糖和换锦花多糖相似。该研究为探讨石蒜属种间亲缘关系提供实验依据。     

君子兰未成熟胚的试管培养

植物名称:垂笑君子兰(Clivia,nobilis Lindl)材料类别:本园栽培的6年生垂笑君子兰,盛花期人工授粉后15天的未成熟胚。培养条件:1.来成熟胚离体继代培养的基本培养基为MS,附加成份(毫克/升):①KT2,2.4—D0.5NAA0.25,ZT1;②NAA0.01,BA0.5;③NAA     

向日葵的幼胚培养

实验所用的基本培基中以B_5培养基对向日葵幼胚培养为最适。激素萘乙酸主要促进幼胚的胚性生长。吲哚乙酸(IAA)与激动素(KT)的配合使用,对幼胚的分化起明显的调节作用。天然提取物则明显地促进幼胚生长、其中荸荠汁的培养基可使向日葵球形胚进行正常发育。 用两种改良的B_5培养基做胚胎培养系统,使向日葵种间杂交胚生长发育。先将杂交后的心形胚培养在胚胎生长培养基上,进行充分的胚性生长。然后把胚转移到萌发培养基,使其萌发形成幼苗,最后移入土壤直至开花。     

忽地笑愈伤组织培养条件对加兰他敏合成的影响

研究了忽地笑次生代谢产物加兰他敏的合成以及各种理化因子对加兰他敏合成的影响。结果表明,蔗糖是忽地笑愈伤组织培养的最佳碳源,而且在90 g/L浓度培养下加兰他敏含量最高,达到0.068%;附加500 mg/L苯丙氨酸前体物也可提高加兰他敏产量。酪氨酸和水杨酸不利于加兰他敏的积累。此外,2,4-D和浓度高于0.5 mg/L的NAA、IBA抑制加兰他敏的合成,但高浓度的6-BA却对加兰他敏的合成起促进作用。     

忽地笑多糖分子量及单糖组成研究

研究忽地笑多糖PBL1、PBL2和PBL3的分子量和单糖组成。分别采用凝胶排阻色谱-多角度激光光散射-示差检测法(GPC-MALLS-RI)和高效液相法(HPLC)测定忽地笑多糖的分子量及单糖组成。PBL1的重均分子量(Mw)为3.642×10~3g/mol;PBL2的Mw为1.206×10~4g/mol;PBL3的Mw为3.992×10~5g/mol。多糖PBL1由D-Man、D-Glu和D-Gal组成,摩尔比为1∶0.34∶0.036;多糖PBL2由D-Man、Rha、D-Gal UA、D-Glu、D-Gal和Ara组成,摩尔比为1∶0.29∶0.78∶21.89∶2.69∶0.63;多糖PBL3由D-Man、Rha、D-Glu UA、D-Gal UA、D-Glu、D-Gal和Ara组成,摩尔比为1∶2.63∶0.47∶1.63∶0.83∶6.92∶1.34。忽地笑多糖PBL1、PBL2和PBL3均主要由D-Man、D-Glu和D-Gal组成,它们的分子量大小差异明显。     

西洋参的组织培养

植物名称:西洋参(Panax quinquefolium)。材料类别:生理裂口种子内的胚在培养基上长成无菌苗后,将无菌苗的子叶和胚轴切成3mm见方的小块作培养材料。培养条件:培养种胚无菌苗是用1/2 MS培养基(MS的大量元素减半,其它成份不变)。诱导子叶,胚轴出胚状体用MS作基本培养基,每升附加NAA     

忽地笑酌-生育酚甲基转移酶基因LaTMT的克隆与表达分析

采用RACE技术从忽地笑也Lycoris aurea ( L'Hér.) Herb.页叶片中克隆获得γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)基因,命名为LaTMT。序列分析结果显示：该基因cDNA全长1458 bp,其中开放阅读框( ORF)长1017 bp,编码338个氨基酸残基。 LaTMT基因编码蛋白质的理论相对分子质量37560,理论等电点pI 8.70,为亲水性蛋白,无跨膜结构但具有信号肽结构;并具有S-腺苷甲硫氨酸( SAM)甲基转移酶保守结构域,包含3个SAM结合位点;该蛋白的二级结构中包含44.08%的α-螺旋、32.84%的无规则卷曲、12.72%的延伸链和10.36%的β-转角。序列比对和系统进化树分析结果显示：LaTMT蛋白属于S-腺苷甲硫氨酸-依赖性γ-生育酚甲基转移酶家族,与其他植物γ-TMT蛋白的一致性为64%~75%;在 NJ系统树上, LaTMT蛋白与单子叶植物γ-TMT蛋白聚为同一大类,并与油棕( Elaeis guineensis Jacq.) EgTMT和美洲油棕也Elaeis oleifera ( Kunth) Cortés页EoTMT聚为同一类,亲缘关系最近。基因表达分析结果显示：LaTMT基因可在大肠杆菌中成功表达,且表达量随异丙基硫代半乳糖苷( IPTG)诱导时间的延长而增加;在忽地笑的根、叶片、花苞、子房、雄蕊、花瓣和鳞茎中LaTMT基因均可表达,其中在叶片中的相对表达量最高,在子房、雄蕊和鳞茎中的相对表达量相对较低,具有明显的组织特异性。研究结果表明：忽地笑LaTMT基因在进化过程中具有很高的保守性;该基因主要定位于叶绿体中,并与忽地笑对非生物逆境胁迫的抗性相关。     

银星秋海棠无性系通过离体两步培养的快速繁殖

银星秋海棠(Begonia argenteo-guttata)是一种多年生草本花卉,通常用扦插繁殖。秋海棠属(Begonia)植物的一些种的组织培养已有一些报道,但几乎都是在固体培养基上进行的试验。本文简要介绍银星秋海棠在离体培养中,用固体培养和液体旋转培养的两步培养法进行无性系的快速繁殖。     

银杏胚的培养及不定芽的产生

通过对银杏未成熟胚和近成熟胚的培养,研究其不定芽的发生情况.结果表明:(1)银杏的种胚存在生理后熟现象,10月上旬,胚未成熟,在360个种核中,小子叶胚数(1.0～3.0 mm)为26.1％,大子叶胚(3.0～5.0 mm)的种子数占总种核数的42.2％,种核的出胚率为71.1％;(2)大子叶胚和小子叶胚接种在不同的培...     

忽地笑LaABCG3转运蛋白基因的克隆与表达分析

石蒜科植物体内的生物碱具有重要的药用价值,尽管部分生物碱的生物合成途径已被发现,但与其相关的转运机制尚未报道。本研究在忽地笑(Lycoris aurea)经茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的差异转录组测序数据的基础上,发现了一个ABC转运蛋白基因,并命名为ABCG3。采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了该基因的编码区全长2157bp,编码719个氨基酸,包含6个跨膜结构域。LaABCG3的组织分布与生物碱积累组织相重合。此外,在MeJA处理下,LaABCG3的表达量和石蒜科生物碱,包括加兰他敏、石蒜碱、水仙环素的含量均受到显著诱导。本研究为探索忽地笑中石蒜科生物碱的转运和积累机制打下了基础。     

山杏种胚培养和快速繁殖

植物名称:山杏(Prunus sibirica) 材料类别:未经层积的山杏种胚。培养条件:生长培养基以MS为基本培养基,附加BA0.1～2.0mg/L(单位下同),NAA0.1～2.0或IBA0.1～2.0;生根培养基为1/2MS附加IBA0.1～2.0。培养温度为24±1℃, 每日光照10小时,光照度1000lx。生长与分化情况:将未经层积处理的成熟种子(优系Ⅰ)用冷水浸泡24小时,去掉种皮和子叶后按不同处理接种于具有不同激素浓度的培养基。 1.种胚的萌发:未打破休眠的种胚在生长培养     

棉属二倍体野生棉与四倍体栽培棉种间杂交的胚珠培养

用棉属二倍体野生种与四倍体栽培种陆地棉杂交及四倍体栽培种海岛棉、陆地棉与二倍体栽培种亚洲棉杂交,以陆地棉自交作对照。将杂交和自交授粉后2天(部分材料为1天)的胚珠在液体培养基上进行飘浮静置暗培养。培养50—70天,7个杂交组合及2个自交品种的胚珠均获得一定频率的胚(包括成熟和不成熟胚)及成熟胚萌发的苗。其中陆地棉与澳洲野生棉、阿拉伯棉、亚洲棉、海岛棉与亚洲棉等4个杂交组合已得到杂种一代植珠。试验结果表明,同一组合的胚珠,在不同的培养基上获得胚的频率和胚萌发率有明显差异;不同组合的胚珠,在同一培养基上培养的结果也不一致。陆地棉X亚洲棉、海岛棉×亚洲棉两个组合授粉后1天的胚珠培养也获得一定频率的胚发育。     

不同饲养层对鸡胚胎干细胞培养效果的影响

目的:为探索鸡胚胎干细胞培养的优化条件,比较不同饲养层对鸡胚胎干细胞离体培养的效果。方法:用传至第2代的鸡胚成纤维细胞与鸭胚成纤维细胞,经丝裂霉素处理后制作饲养层,比较这2种饲养层以及不用饲养层对鸡胚胎干细胞离体培养效果的影响。结果:在以鸡胚成纤维细胞和鸭胚成纤维细胞作为饲养层的培养体系中,鸡胚胎干细胞均可保持良好的生长状态,而且2种饲养层对鸡胚胎干细胞克隆形成的影响差异不显著(P0.05)。结论:鸡胚成纤维细胞和鸭胚成纤维细胞均可作为较好的饲养层细胞用于鸡胚胎干细胞的离体培养。     

石蒜属植物分支系统学分析

基于37个形态学、解剖学、孢粉学和细胞学性状及解剖学性状之外的28个形态学、孢粉学和细胞学性状,分别对石蒜属进行分支系统学分析,试图建立石蒜属种间的系统发育关系。利用PAUP^*软件分别构建了最大简约树(MP),所得树的拓扑结构是一致的。同时,基于解剖学9个性状,对石蒜、换锦花、忽地笑、江苏石蒜、长筒石蒜、乳白石蒜、夏水仙、红兰石蒜、安徽石蒜、短蕊石蒜、中国石蒜11个种进行系统发育树构建,其结果也是支持上述系统发育树的。系统发育树结构结果表明,石蒜属16种明显聚为两大类:石蒜、玫瑰石蒜、稻草石蒜和江苏石蒜;广西石蒜、红兰石蒜、换锦花、香石蒜、夏水仙、长筒石蒜、安徽石蒜、中国石蒜、忽地笑、乳白石蒜、短蕊石蒜和陕西石蒜。除换锦花、红兰石蒜及江苏石蒜系统发育位置不同之外,大类群的划分与RAPD指纹图谱基本一致。类群一均属于石蒜亚属(Lycoris亚属)。类群二又可以聚为两小类:广西石蒜、红兰石蒜、换锦花、香石蒜、夏水仙归为一类;长筒石蒜、安徽石蒜、中国石蒜、忽地笑、乳白石蒜、短蕊石蒜和陕西石蒜归为一类。前一子类群除广西石蒜外,都属于整齐花亚属(Symman thus亚属)。后一子类群除长筒石蒜与安徽石蒜外,均属于石蒜亚属(Lycoris亚属)。因此,花冠整齐与否是一个重要的分类特征,但作为石蒜属植物亚属的划分依据,没有得到本研究支持。而在本文中,雄蕊与花被片的位置关系可以作为大分类群划分依据,能否依此来对石蒜属植物亚属进行划分,仍需探讨。另外研究表明叶微形态特征在研究种间亲缘关系时,具有一定的作用。而在种间亲缘关系鉴定时,出叶期不应成为重要的依据。同时研究还表明中国石蒜与忽地笑具有非常近的亲缘关系,与形态学研究一致。     

利用微束激光穿刺法将抗真菌基因导入棉花的研究初报

以棉花感受态萌动种胚作为外源基因转化的受体,用激光微束穿刺法将β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶双价基因导入棉花,所构建的植物表达载体pB IBGC携带有筛选标记npt-Ⅱ(新霉素磷酸转移酶)基因。激光转化处理的种胚经卡那霉素筛选,已经获得抗性小植株。研究了微束激光转化法用于棉花感受态萌动胚转化预培养的时间、高渗液对材料的处理等。研究表明:用微束激光转化处理种胚是一种操作简便、重复性好的转化方法,用该法可将外源基因导入植物感受态萌动胚,避开植株离体再生的困难。     

黄花石蒜的组织培养和植株再生

1植物名称黄花石蒜(LycorisaureaHerb.),又名忽地笑。2材料类别鳞茎。3培养条件(1)不定芽诱导培养基:MS+6-BA10mg·L-1(单位下同)+NAA0.5;(2)不定芽增殖培养基:MS+6-BA5+NAA0.5;(3)生根培养基:MS+IBA2。上述培养基均加入3%蔗糖和0.8%琼脂,培养基灭菌前pH5.8。培养温度为19￣21℃,光照时间为12h·d-1,光强为24￣30μmol·m-2·s-1。4生长与分化情况4.1不定芽的诱导将鳞茎用自来水洗净,剥去外层黑色鳞片,切去石蒜的根部和鳞茎的上半部分。将切留的鳞茎放进烧杯置于超净工作台中,先用70%酒精灭菌40￣50s,无菌水冲洗2遍,再用0.15%升汞…     

山植幼胚胚状体的诱导

胚胎培养的研究从本世纪(1904,Hanning)开始以来,取得了很大进展。特别是自二十年代Laibach 用胚胎培养技术得到了亚麻杂种胚之后,已开创了植物胚胎培养应用于实际的新时期。但是已有的工作表明,成熟胚离体培养较容易;未成熟的幼胚,特别是发育早期的幼