柿子多糖的分离纯化和结构分析

利用水提醇沉提取柿子多糖(WPP),经季铵盐沉淀法和凝胶柱层析对柿子粗多糖进行分离纯化,得到了水溶性的柿子粗多糖(WPP1)和盐溶性的柿子粗多糖(WPP2)两个柿子多糖组分。通过对理化性质、分子量和单糖组成测定结果分析,确定WPP1是含有α糖苷键的化合物,由L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖和D-半乳糖四种单糖组成,四种单糖的摩尔比为0.8831∶0.6862∶0.7022∶1,分子量为2.05×105Da。WPP2由L-阿拉伯糖和D-半乳糖两种单糖组成,其摩尔比为0.8466∶1,分子量为2.63×105Da。WPP1和WPP2均表现出吡喃糖的特征吸收。     

东北红豆杉多糖的化学研究

利用水提醇沉提取东北红豆杉多糖TP,经超滤得到超滤外液TP-1和内液TP-2。TP-2进行部分酸水解和凝胶柱层析分离纯化,得到TP-2-1a。通过对理化性质、分子量、单糖组成和甲基化测定结果分析,确定其分子量分布在7.0 kDa左右,糖组成由Rha、Man、Gal、Glu、GalA和GlcA构成,摩尔比为:16.9∶1.0∶15.5∶1.3∶9.9∶2.5,中性糖以Gal的1→3、1→4连接为主,在1→3连接的O-6位上有分支;Rha以1→2连接为主,在O-4位上有分支;Man以1→4、1→6连接为主;Glu以1→3、1→4连接为主;非还原末端主要是Gal及少量的Man、Glu和Rha。酸性糖以1→4连接GalA为主,无分支。该多糖为首次从东北红豆杉中分离得到。     

苦瓜多糖的提取、分离纯化及组成性质

正交实验确定提取工艺后,用热水提取法得到苦瓜多糖(MCP).对MCP进行DEAE-32离子交换层析分离,得到3个多糖组分MCP1、MCP2和MCP3. 进一步采用Sephacryl S-400凝胶层析进行分离,经凝胶层析和高效液相色谱检测表明,MCP1、MCP2为均一性多糖组分.通过高效液相凝胶色谱法测定了两者的相对分子质量分别为1.16×106和7.45×105.用PMP衍生化法测定其单糖,结果表明: MCP1系由Man、Rham、GlcUA、GalUA、Glu、Gal、Xyl、Ara等单糖组成的杂多糖,摩尔比为1.03:2.93:1.00:14.95:2.16:30.70:2.85:4.50.MCP2系由Rham、GalUA、Gal、Xyl、Ara等单糖组成的杂多糖,对应的摩尔比为1.63:21.88:4.66:1.00:1.29.紫外光谱表明该多糖不含蛋白质和核酸.     

高效液相色谱法测定金钱菇多糖的单糖组成

采用高效液相色谱法,测定金钱菇多糖的单糖组成.用超声辅助提取金钱菇多糖,通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮(PMP)衍生水解后的单糖,高效液相色谱法检测衍生物.结果表明：金钱菇多糖由甘露糖(Man)、核糖(Rib)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)组成,其摩尔为1．00∶0．90∶0．91∶28．03∶1．58∶0．11.该方法快速、简便、重现性好,可用于测定金钱菇多糖的单糖组成.     

雪灵芝多糖的分离纯化及免疫活性评价

为分离纯化雪灵芝(Arenaria kansuensis)多糖,并对纯化组分进行分子量测定、单糖组分分析及免疫活性评价。实验采用水提醇沉法提取雪灵芝粗多糖(Arenaria kansuensis crude polysaccharide, AKCP);以DEAE-52纤维素柱对AKCP进行分离纯化,获得5个雪灵芝多糖组分AKP-1～AKP-5,进一步采用葡聚糖凝胶G-75柱对AKP-2进行分离纯化获得AKP-2a多糖组分。苯酚-硫酸法测定AKCP、AKP-2及AKP-2a的总糖含量分别为52%、70%和79%;凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射(GPC-MALS)法检测AKP-2a的重均分子量Mw为2.07×10~5Da、数均分子量Mn为9.838×10~4Da;HPLC法检测AKP-2a是由半乳糖醛酸、甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖10种单糖组成,其摩尔比为1∶0.25∶0.01∶0.20∶0.11∶0.25∶0.61∶0.07∶0.21∶0.12;以MTT法检测体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖,AKCP、AKP-2及AKP-2a各浓度组SI水平,均明显高于对照组(P<0.05)。经NO释放实验及IFN-γELISA检测,AKP-2a各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中二者的水平,较对照组呈浓度依赖性增高(P<0.01)。综上结果,本研究通过分离纯化,获得了总糖含量较高的雪灵芝多糖AKP-2a组分,初步确定其分子量范围及单糖组成,并证实其具有激活淋巴细胞增殖、促进巨噬细胞功能的生物活性。     

阿魏蘑多糖理化性质及免疫活性研究*

以阿魏蘑Pleurotus ferulae Lanzi子实体和菌丝体为试验材料,采用水浸法提取阿魏蘑多糖,分别得到子实体粗多糖A和菌丝体粗多糖B。将A经Sevag法去蛋白、透析、CTAB络合、乙醇沉淀、NaCl溶液溶解、透析,得到多糖A1。紫外光谱分析鉴定多糖A1为均一组分。苯酚—硫酸法测得多糖A1糖含量为82.9%。凝胶渗透色谱法测得多糖A1数均分子量Mn=141088,重均分子量Mw=142897。气相色谱分析多糖A1单糖组成及其摩尔比为Xyl∶Gla∶Glc=1∶1.102∶2.899。巨噬细胞吞噬作用试验、迟发型变态反应试验、白细胞介素-2（IL-2）的诱生与检测试验测得粗多糖A、粗多糖B具有免疫活性。     

蜗牛黏液多糖的提取、表征及抗氧化性和免疫活性

利用高效凝胶色谱串联紫外、示差和多角度激光散射检测器(HPSEC-UV-RI-MALLS)对蜗牛黏液中的多糖进行分子量分布表征。利用气相色谱串联质谱(GC-MS)和红外光谱(FT-IR)对其化学结构进行表征;并对所获得的多糖进行抗氧化及免疫活性的评价。结果显示:蜗牛黏液中主要含有5个组分的多糖,是其重要的活性成分。对这5个多糖进行鉴定,其平均分子量为4.549×10~6、1.392×10~5、6.291×10~4、5.262×10~(4 )和4.153×10~(4 )。单糖由岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为1.69∶2.46∶0.12∶1。多糖主链为→2) Manp-(1→,→3) Fucp-(1→和→3) Manp-(1→。此外,蜗牛黏液多糖具有明显的抗氧化作用,能很好地清除ABTS·~+和·OH,IC_(50)值分别为2.35和4.70 mg/mL;且能明显增强巨噬细胞(RAW264.7)的吞噬能力,促进NO和白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等免疫细胞因子的释放。     

酶法联合闪式提取红叶李花多糖及单糖初步分析

采用酶法联合闪式提取红叶李花中多糖,对多糖进行纯化和分离,利用气相色谱-质谱(GC-MS)初步分析多糖的组成。以单因素实验为基础,以响应面设计优化确立最佳提取工艺,以DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-150分离多糖,乙酰化后分析单糖组成。最佳提取工艺为:酶解温度为45℃,酶解时间为2h,酶用量为0.17%,闪式提取时间为3 min,液料比35倍,转速为3000 rpm。多糖得率达到13.02%。多糖由PPCS-Ⅰ和PPCS-Ⅱ两部分构成,PPCS-Ⅰ的单糖组成和比例为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖和葡萄糖(摩尔比为12.11∶3.16∶7.06∶1∶4.92),PPCS-Ⅱ的单糖组成和比例为鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖(摩尔比为5.02∶1∶13.65∶11.76∶8.39)。     

超滤分离和鉴定三种香菇多糖

用热水从香菇子实体中浸提出香菇多糖,采用两种超滤陶瓷膜将粗多糖分级成三部分Le1,Le2和Le3。所有的这三种多糖都由两组分所组成,采用凝胶过滤色谱测定了多糖分子量,13CNMR和IR光谱测定显示多糖Le1为含α糖甙键的多糖,多糖Le3为含β糖甙键的多糖。采用气相色谱法测定了三种多糖的单糖组成,结果显示三种多糖都由葡糖糖,阿拉伯糖,木糖,甘露糖和半乳糖组成,Le1,Le2和Le3中阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖的摩尔比分别为0.15∶0.52∶1.00∶1.20∶7.20、0.21∶0.68∶1.00∶1.02∶11.56、0.29∶0.42∶1.00∶0.85∶16.20。三种多糖Le1,Le2和Le3的平均分子量分别为4.02×104、2.16×105和8.93×105。     

枸杞多糖的提取纯化及组成分析

采用水提法从枸杞中提取分离枸杞多糖(LBP)用DEAE纤维素柱色谱和凝胶柱色谱进行分离纯化,采用GPC-LLS法、红外光谱和气相色谱等方法对其组成进行研究。结果表明LBP含有3个级分,LBP的分子质量约为1.497×105,由阿拉伯糖(Ara),鼠李糖(Rha),木糖(Xyl),甘露糖(Man),半乳糖(Gal)和葡萄糖(Glc)6种中性单糖组成。     

三株海南岛野生灵芝的鉴定、多糖组成及其抗氧化活性研究

为探究海南岛部分野生灵芝的功效活性以及对野生灵芝的合理利用,分别对采集于海南岛的三株野生灵芝进行了形态和分子鉴定,并对子实体多糖的单糖组分和抗氧化活性进行了分析。结果表明,HN-1为紫芝(Ganoderma sinense)、HN-2为南方灵芝(Ganoderma australe)、HN-3为无柄紫灵芝(Ganoderma mastoporum);三株灵芝多糖的单糖组成和摩尔比存在一定的差异,HN-1多糖主要由甘露糖、木糖、鼠李糖组成,其摩尔比为1∶0.29∶0.14,HN-2多糖主要由甘露糖、葡萄糖组成,其摩尔比为1∶1.7,HN-3多糖主要由甘露糖、木糖、葡萄糖组成,其摩尔比1∶1.98∶1.8;三株灵芝的多糖都具有较强的抗氧化能力,其抗氧化能力都随着多糖质量浓度的增加而提高,HN-1的抗氧化活性最强,其次是HN-3,HN-2的抗氧化活性最弱。该研究结果为更好的保护和利用海南岛野生灵芝资源提供了基础资料,具有一定的参考价值。     

欧李多糖的制备、结构表征及免疫调节活性研究CSCD

欧李富含钙素,营养丰富,且具有免疫功能,研究欧李多糖的制备、结构及免疫调节活性,可为欧李深加工提供基础。本文以欧李为原料,采用水提醇沉法提取欧李多糖(Cerasus humilis polysaccharide,CHP),利用响应面法优化提取工艺。对提取的欧李多糖用DEAE-52纤维素层析柱、G-100葡聚糖凝胶柱纯化。用高效液相色谱、凝胶渗透色谱和红外光谱对欧李多糖结构表征,并测定欧李多糖的免疫调节活性。结果表明,欧李多糖最佳提取工艺条件为提取温度79℃,提取时间2 h,液料比16∶1(mL/g)。在此条件下,欧李干粉多糖得率为(32.18±0.08)%。纯化后欧李多糖主要有CHPP-1和CHPP-2两个组分,CHPP-1、CHPP-2中多糖含量分别为99.16%和99.33%。CHPP-1的单糖组成及摩尔占比为阿拉伯糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖=51.4∶20.29∶17.36,分子量为47.26 kDa。CHPP-2的单糖组成及摩尔占比为阿拉伯糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖=41.81∶28.24∶11.68,分子量为22.94 kDa。两个组分均为吡喃环型多糖。CHPP-2可显著增强巨噬细胞增殖活性,有效刺激细胞释放NO和TNF-α、IL-6及IFN-β。欧李多糖含量丰富,且具有较强的免疫调节活性。     

陕甘花楸果实多糖的结构表征及抗氧化活性研究

陕甘花楸(Sorbus koehneana)是我国西北地区特有的灌木之一,主要被用于观赏和制作家具,但对其有效成分的研究却鲜见报道,从而限制了陕甘花楸产业的进一步开发和利用。该研究以陕甘花楸果实为原料,经石油醚脱脂后,采用超声辅助水提醇沉法提取、Sevag法脱蛋白,得到了较纯的花楸果实多糖(SSP),并对其进行结构表征和抗氧化活性研究。结果表明:(1)经苯酚-硫酸法测得多糖纯度为65.8%;FT-IR检测官能团,发现在3 420 cm~(-1)、2 929 cm~(-1)和1 733 cm~(-1)处存在多糖的典型吸收峰;用SEC-LLS测得重均分子量(Mw)为1.739×105,数均分子量(Mn)为5.052×104,多分散系数为3.443,表明分子量分布较为均一;经三氟乙酸酸解、糖腈衍生化等处理及气相-质谱联用法测定SSP的单糖组成,表明SSP由甘露糖、葡萄糖和未知单糖等3种单糖组成,摩尔比为2.2∶1.4∶6.4。(2)体外抗氧化活性实验表明:SSP具有很好的DPPH清除活性、超氧阴离子清除活性以及较强的还原力;当SSP浓度为2 mg·mL-1时,SSP对DPPH自由基的清除能力相当于BHT的96%,对超氧阴离子自由基清除能力为Vc的76.07%,还原能力等价于Vc的92%。以上表明该多糖可以用于抗衰老和抗炎等方面,是一种优良的天然抗氧化剂,为花楸资源的进一步开发利用提供了更为广阔的前景。     

极大螺旋藻胞内多糖分离纯化及其结构的初步分析

本文以原产于非洲乍得湖的极大螺旋藻 (Spirulinamaxima)为材料 ,热水提取胞内粗多糖 ,丙酮、乙醚脱水脱色 ,再经改良的Sevag等方法脱蛋白 ,获得胞内多糖半精品 (Intracellularpolysaccharide ,IPSⅠ ) ,经DE 5 2、SephadexG 10 0层析柱纯化 ,得到两种单一组分的多糖精品 :IPSⅡA和IPSⅡB。利用HPLC、IR等方法测定其初步结构。结果显示 :IPSⅡA的平均分子量为 2 38,0 0 0Dt,主要单糖组成为L 岩藻糖、L 鼠李糖、D 木糖、D 半乳糖 (摩尔比为 6 .0 9∶3.38∶0 .6 6∶0 .0 72 ) ,硫酸根含量为 2 6 .3± 3.7μg/mg ,糖醛酸含量约为 13.37± 0 .4 5 μg/mg ;IPSⅡB的平均分子量为 34,90 0Dt ,主要单糖组成包括D 木糖、L 鼠李糖、D 果糖、D 葡萄糖、L 岩藻糖、D 甘露糖 (摩尔比为 6 .6 6∶4 .6 3∶0 .2 8∶0 .12∶0 .0 87∶0 .0 2 2 ) ,糖苷键构型以α型为主 ,硫酸根含量为2 1.5± 1.2 μg/mg。     

刺五加果水溶性多糖的研究——AS-2的分离纯化与结构探讨

从刺五加果中抽提出水溶性粗多糖。经酸性乙醇分级及反复冻融得到多糖AS-2。AS-2经Sepharose CL-4B柱层析为单一对称峰,经醋酸纤维素膜电泳为一条带,冻融后高速离心无沉淀可证明其为均一级分。G.C分析表明,AS-2由Ara、Xyl、Rha、Gal、Glc组成,其单糖摩尔比为1.6:1.2:1.8:1.0:3.6。AS-2的分子量约为78kD,比旋光度[α]_D~(25)=+17°,特性粘度[η]=0.068。红外光谱分析含β型糖苷键。部分酸水解、酶解、高碘酸酸化、Smith降解、完全甲基化、G.C,G.C-M.S的分析结果表明,以β(1→3)Glc及β(1→4)Glc构成分子的主链。Glc的C_3上带有分支,约每4个己糖残基带有1个侧链。侧链上,Rha多以1→4苷键相连,部分残基C_2上有分支。Gal存在(1→6)及(1→3)连接方式,多数Glc以(1→6)苷键连结,少数Glc出现在分子非还原末端。位于分子末端的还有Ara与Xyl。     

刺芹侧耳下脚料多糖的纯化与结构解析

采用超滤分离结合乙醇沉淀的方法,从刺芹侧耳下脚料水提物中纯化获得一多糖组分PEP30。苯酚硫酸法检测其糖含量约为94.2%,HPSEC-MALLS-RI系统分析其重均分子量(Mw)为3.74×106Da,多分散系数为1.03,为窄分布样品。通过红外光谱、单糖组成分析、甲基化GC-MS分析和核磁共振技术对多糖的结构特征进行了研究。结果表明,PEP30为一种β-D-葡聚糖,其主链以β-(1→3)-糖苷键连接,支链以β-(1→6)-糖苷键连接,支链与主链上糖残基的摩尔比为1:3。     

酿酒酵母发酵降解灵芝胞外多糖组分分析及活性研究

本研究采用酿酒酵母发酵的方法对灵芝胞外多糖进行了降解,并对其产物在表观粘度、分子量、多糖得率和含量及单糖组成和生物活性等方面进行了系统比较和分析。结果表明,灵芝发酵胞外液经酿酒酵母培养后,所得胞外液的表观粘度明显降低,其中多糖的分子量也随酵母培养时间的延长出现下降趋势,大分子多糖的分子量从3.55×10 ⁶g/mol下降到1.93×10 ⁶g/mol,低分子多糖的分子量从6.18×10 ⁴g/mol下降到3.11×10 ⁴g/mol。多糖得率和含量测定结果显示,经酵母培养后,灵芝胞外液中20%乙醇沉淀所得20E组分得率明显降低,从2.43g/L下降到0.98g/L,但该组分多糖含量均较高,达到70%以上;而70%乙醇沉淀所得70E组分得率明显增加,达到1.87g/L。单糖组成分析表明,20E组分主要由葡萄糖组成,70E组分主要由甘露糖组成。各组分均表现出较好的与Dectin-1受体结合激活NF-κB增强免疫的活性,且经酿酒酵母发酵24h所得70E组分的活性最好。     

新疆雪莲水溶性多糖的分离纯化及组成分析

为合理利用雪莲提供一定依据,对新疆天然雪莲进行多糖提取分离纯化.新疆天然雪莲经热水浸提,乙醇沉淀得粗多糖.粗多糖经Sevage法和酶法联合脱蛋白,酸性乙醇分级,得初步纯化的多糖XL1,XL2,XL3.其中XL3经DEAE-SephdexA25分离纯化得纯化多糖XL31.XL31经检测为纯多糖.气相色谱分析表明新疆天然雪莲多糖XL1,XL2,XL3和XL31均为Ara、Rha、Xyl、Gal、Glc、GalA六种单糖组成的酸性杂多糖,但单糖的摩尔比不同.     

胶质芽孢杆菌胞外多糖的发酵生产及结构鉴定

以胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)SM-01作为出发菌株,通过研究5 L发酵罐中不同搅拌转速、通气量对菌株SM-01生产胞外多糖的影响,确定了最适的搅拌转速与通气量分别为600 r/min、2.0 VVM(每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值)。在最适条件下,发酵液中胶质芽孢杆菌胞外多糖(BMPS)的质量浓度可达29.8 g/L。进而经DEAE-52离子交换柱层析纯化得到纯多糖。凝胶渗透色谱法测定多糖的分子量为4.4×10~6。红外光谱分析其含有酸性糖成分,经间羟基联苯法测定,其酸性糖含量为24.6%。采用气相色谱检测BMPS单糖构成为葡萄糖、甘露糖及半乳糖,摩尔比为3.2∶2.2∶1。     

鸡腿菇子实体多糖分离纯化工艺及结构研究

以多糖得率为指标,用正交试验对鸡腿菇子实体多糖的提取纯化工艺进行优化。用离子色谱和凝胶渗透色谱对粗多糖进行分离纯化,利用化学和光谱学方法对均一多糖CC30w-1进行结构分析。结果表明鸡腿菇子实体多糖最佳提取工艺为:提取次数为3次,提取时间为1.5h,提取温度为95℃,料液比为1∶12;最佳脱蛋白条件:样品-氯仿 正丁醇为3∶1(V/V),氯仿-正丁醇为3∶1(V/V),反应时间为20min,脱蛋白次数为7;结构分析的结果表明:CC30w-1分子量为1.94×104Da,糖组成为Fuc∶Gal=1∶4.02;岩藻糖以端基方式连接,半乳糖主要以1,6-和1,2,6-两种方式连接,3个主要的连接方式的摩尔比为1.15∶2.88∶1;主要由(1,6)-α-D-Galp糖残基构成主链,在O-2位被α-Fucp糖残基取代的5个单糖残基组成的结构重复单元。