针刺对胃黏膜损伤的修复与EGFR信号传导通路的相关性

目的:探讨针刺胃经穴后提取的血清对大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体(EGFR)后信使物质表达的影响.方法:60只大鼠随机分为模型血清组、胃经血清组、胆经血清组、胃经血清 PD153035组和胆经血清 PD153035组,采用水浸束缚法制作胃黏膜损伤大鼠模型,利用链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,分别用EGFR抑制剂PD153035和血清孵育胃黏膜细胞,应用酶联免疫吸附法检测PLCγ-1活性,同位素掺入法检测PKC活性,逆转录聚合酶链反应法检测c-mye的表达水平.结果:模型血清组大鼠胃黏膜细胞PLCγ-1,PKC和c-myc微弱表达;胃经血清组和胆经血清组大鼠胃黏膜细胞PLCγ-1,PKC和c-myc呈现较强表达,其中胃经血清组表达最高,两组相比较有显著性差异(P＜0.01):胃经血清 PD153035组和胆经血清 PD153035组大鼠胃黏膜细胞PLCγ-1,PKC和c-myc的表达较弱,胃经血清组与胃经血清 PD153035组比较有显著性差异(P＜0.01).结论:针刺胃经穴后提取的血清能诱导大鼠胃黏膜细胞EGFR后信使物质的活化,并且存在经脉-脏腑的特异性联系.     

利用蛋白质组学方法筛选及确定喉癌诊断的标志分子

采用蛋白质芯片和生物信息学方法从喉癌患者血清中筛选标志蛋白. 采用SELDI(surfaced enhanced laser desorption/ionization)蛋白质芯片技术对33例喉癌(12例声门癌, 18例声门上癌, 3例声门下癌)病人血清和31例正常人血清蛋白质谱图进行了检测. PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据, 获得的结果采用Ciphergen 公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattern软件分析. 结果显示与正常人血清蛋白质谱相比时, 喉癌病人血清中有16个差异蛋白, 其中8个标志分子在病人血清中高表达, 8个标志分子在病人血清中低表达. Biomarker Pattern软件在设定条件下自动选取上述标志分子中的两个蛋白质8153和2035 Da用于建立喉癌诊断的分类树模型. 此分类树具有两层3个叶结点, 可将96.9%的喉癌病人和96.7%正常人正确划分出来. 实验证明利用蛋白质组学和生物信息学方法可从血清中筛选出喉癌相关的标志蛋白, 而且蛋白质芯片技术对于发现和筛选血清中的喉癌标志蛋白是一种有效、快速的工具.     

SELDI-TOF-MS分析结直肠腺瘤血清蛋白质谱的变化

目的：分析结直肠腺瘤血清蛋白质谱的变化,寻找结直肠腺瘤的特异性生物标志物。方法：采用SELDI-TOF-MS技术（表面增强激光解析电离飞行时间质谱）对比分析31例结直肠腺瘤患者和11例正常人的血清蛋白质谱,用Biomarker Wizard软件对获得的蛋白质谱进行分析。结果：结直肠腺瘤组与正常对照组有24个蛋白峰有差异,其中有三个蛋白峰（8565.84D、8694.51D和5910.50D）的差异非常显著,8565.84D和8694.51D在结直肠腺瘤中高表达,在正常人中低表达,而5910.50D在两组人群中的表达相反。结论：这三个蛋白峰可能为结直肠腺瘤特异性的生物蛋白标志物。     

心力衰竭大鼠心肌线粒体蛋白质组学研究

通过差速离心分离大鼠心肌线粒体,利用蛋白质组学技术构建正常大鼠心肌线粒体蛋白质组表达图谱;选用心肌梗死诱导的心力衰竭大鼠模型,分析比较心力衰竭时心肌线粒体蛋白质表达谱的改变.与正常对照组相比,心力衰竭大鼠心肌线粒体共有188个蛋白点的表达量发生了变化,其中有120个蛋白点表达上调2倍以上,有68个蛋白点表达下调1/2以上（P〈0.05）.对差异表达的蛋白点行胶内酶解后质谱鉴定和数据库检索,对蛋白质进行功能注释、亚细胞定位和生物信息学分析,其中有27个蛋白质涉及能量代谢和氧化应激,其中参与糖酵解及三羧酸循环的蛋白质（酶）表达上调,而参与OXPHOS复合体和脂肪酸代谢的蛋白质（酶）表达下调.研究结果表明,心力衰竭时心肌能量代谢模式发生了改变,底物选择从倾向于脂肪酸转为葡萄糖利用增加,糖酵解增强而脂肪酸氧化能力减低;为心肌缺血性损伤时线粒体结构和功能改变提供了分子依据,在蛋白质水平上阐述了线粒体在心力衰竭发展中的可能机制.     

不同强度电针刺激对失眠大鼠下丘脑orexinA的影响研究

目的 探讨电针对失眠大鼠下丘脑食欲素A（orexinA）的影响及不同强度电针对orexinA的效应差异。方法将SD大鼠随机分为正常对照组（normalcontrol,NC）、失眠模型组（insomniamodel,IM）、强刺激电针组（strongstimulativeeleetroacupuncture,SSEA）、弱刺激电针组（weakstimulativeelectroacupuncture,WSEA）。除正常对照组外,其余各组大鼠均用对氯苯丙氨酸（PCPA）建立大鼠失眠模型,选穴“百会”、“足三里”、“三阴交”,并用不同强度电针治疗。5d后,用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测下丘脑orexinAmRNA表达,采用免疫组织化学技术观察下丘脑orexinA阳性神经元表达。结果与正常对照组比较,失眠模型组大鼠下丘脑orexinAmRNA表达显著升高（P〈0．01）,orexinA阳性神经元染色较深,且表达量较多;与失眠模型组相比,两电针组大鼠下丘脑orexinAmRNA表达明显下降（P〈0．01）,orexi—nA阳性神经元染色较浅,表达量较少,强刺激电针组作用更为明显。结论电针可以改善失眠大鼠下丘脑异常增多的orexinA,调节睡眠-觉醒周期,且强刺激电针组效果较好。     

β-细辛醚对AD大鼠海马神经元蛋白质组图谱的影响

目的：探讨β-细辛醚对痴呆大鼠海马神经元蛋白质表达谱的影响。方法：SD大鼠随机分为正常时照组、模型组和β-细辛醚治疗组。模型组和β-细辛醚治疗组大鼠行脑立体定位注射术,模型组从大鼠右侧海马注入β淀粉样蛋白（Aβ1-40）5μg;治疗组：将Aβ1-40和β-细辛醚（0.12%）混合后注入大鼠右侧海马。抽提各组大鼠海马神经元组织蛋白质,行双向电泳,采用PDQuest-7.1.1分析软件解析各组之间有明显差异表达的蛋白质。结果：β-细辛醚治疗组α-烯醇化酶（α-enolase）、钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶（Ca^2＋/Calmodulin-dependent protein kinase）的表达高于模型组,而尿激酶型纤溶酶原激活物（urokillasc plasminogen activator surface）、P53抑癌基因（P53 tumor suppressor）和未知蛋白（SSP6001）表达则低于模型组。结论：β-细辛醚可能通过上调或下调上述蛋白质的表达,参与促进大鼠海马受损神经元保护作用。     

模拟失重对大鼠血清胃泌素、胃动素和胃窦Cajal间质细胞的影响

目的：研究尾悬吊模拟失重环境对大鼠血清胃泌素（GAS）、胃动素（MTL）和胃窦Cajal间质细胞（ICC）的影响。方法：健康雄性Wistar大鼠64只随机分为8组（rt=8）,按模拟失重时相分别设为6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d和0h（地面对照组）组,采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型。应用放免法测定血清GAS、MTL浓度,免疫组化和RT—PCR技术检测各组大鼠胃窦组织中c—kit蛋白和mRNA表达情况。结果：尾悬吊6、12h阶段,血清GAS浓度明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;随尾悬吊时相延长,血清GAS含量呈逐渐下降趋势,与正常对照组水平相近。尾悬吊各组大鼠血清MTL浓度均升高,12h以后各组MTL浓度值与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化结果显示,c—kit蛋白阳性表达为棕褐色,主要分布在ICC胞体和突起,正常对照组大鼠胃窦肌层ICC（ICC—MY）呈连续性浓染,肌层内ICC（ICC—IM）亦明晰可见;6h-5d的尾悬吊过程中,大鼠胃窦ICC—MY连续性出现中断现象且逐渐明显,染色逐渐减弱,ICC—IM染色减弱的同时c—kit阳性ICC也明显减少;7d组胃窦组织中c—kit蛋白表达有所恢复。模拟失重各组及对照组大鼠胃窦组织中均有c—kitmRNA表达,尾悬吊6、12h组的c—kitmRNA表达明显下降,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,1～3d组逐渐恢复,5d组又出现明显下降（P〈0．05）,7d组c—kitmRNA表达值明显复升。结论：尾悬吊模拟失重对大鼠血清GAS、MTL和胃窦Cajal间质细胞c—kit蛋白及mRNA表达造成明显影响,可能导致胃动力障碍。     

一个在肺癌血清中高表达的标志分子SAA的发现及鉴定

应用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)对175例肺癌病人和43例正常人血清进行了蛋白质谱检测. 通过Biomarker Wizard™ 和Biomarker Patterns™软件分析显示11.6 kD蛋白峰在肺癌病人血清中明显高于正常对照组, 同时该蛋白峰的表达水平与肺癌病人的临床分期密切相关, 随着病情的加重而逐渐升高. 进而采用Tricine-SDS-PAGE结合质谱分析鉴定出芯片上11.6 kD的蛋白峰为血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein, SAA). 使用抗SAA的特异性抗体通过免疫沉淀进一步证实了该蛋白峰为SAA. 同时还采用了ELISA方法对上述部分血清样本中SAA表达水平进行了测定, 结果显示其敏感性和特异性分别为84.1%和80%. 与蛋白质芯片使用单一差异蛋白质SAA划分结果基本一致. 上述实验结果表明, SAA能很好地划分肺癌病人和正常对照组, 很可能成为肺癌诊断和病情检测的一个标志分子.     

大鼠脑缺血再灌注后组织蛋白酶D蛋白质及mRNA的表达

目的：探讨大鼠缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶D（Cathepsin DCD）在不同时段蛋白质及mRNA表达变化。方法：将60只SD大鼠随机分为三组：正常组（10只）,假手术组（10只）,脑缺血再灌注组（模型组）（40只）,线栓法制备大脑中动脉梗死模型（MCAO）,免疫组化及RT-PCR法分别检测CathepsinD的蛋白和mRNA表达。结果：与正常组和假手术组比较,模型组在大鼠脑缺血再灌注损伤后6hCathepsin D的蛋白和mRNA表达明显增强（P＆lt;0.05）,24h达高峰,48h仍保存高水平。结论：Cathepsin D在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,溶酶体CathepsinD可能参与了脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡。     

大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin D和caspase．9表达的动态变化

目的：探讨大鼠缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶D（Cathepsin DCD）、caspase-9在不同时段蛋白质及mRNA表达变化。方法：将60只SD大鼠随机分为三组：正常组（10只）,假手术组（10只）,脑缺血再灌注组（40只）,线栓法制备大脑中动脉梗死模型（MCAO）,免疫组化及RT—PCR法分别检测CathepsinD、caspase-9的蛋白和mRNA表达。结果：与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注损伤后6h Cathepsin D的蛋白和mRNA表达明显增强（P〈0．05）,24h达高峰,48h仍保存高水平。caspase．9蛋白和mRNA6h开始明显升高,12h达高峰,此后缓慢下降,但48h组仍显著高于对照组（P〈0．05）,结论：Cathepsin D、caspase．9在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,溶酶体可能参与了脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的过程。     

失血性休克大鼠模型的改进及胃黏膜血流量的测定

目的探讨失血性休克大鼠模型的建立及胃黏膜血流量的测定。方法16只健康雄性SD大鼠随机分为两组：对照组（n=8）、失血性休克组（n=8）。失血性休克组使用颈动脉失血-颈静脉失血回输的方式制备失血性休克大鼠模型。维持平均动脉压40mmHg 1h后复苏,复苏后2h动物模型制作成功。使用激光多普勒血流仪测定大鼠胃黏膜血流量;采用光镜及透射电镜观察胃黏膜损伤情况。结果失血性休克组胃黏膜血流量较对照组明显降低,差异非常显著（P〈0．01）,胃黏膜细胞坏死、脱落、溶解,局部溃疡形成。结论失血性休克大鼠胃黏膜血流量明显降低,存在广泛的胃黏膜损伤。     

电针对海洛因成瘾大鼠PAG的NPY表达的影响

目的:观察韩氏穴位神经刺激器(HNAS)针刺对海洛因成瘾大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)的神经肽Y(NPY)表达的影响。方法:按给药剂量逐日递增的原则皮下注射海洛因建立成瘾模型,Morris水迷宫测大鼠空间学习记忆,免疫组化测大鼠PAG的NPY表达。结果:①成瘾组大鼠在定位航行实验中逃避潜伏期及搜索距离较正常组明显延长(P0.05),而针刺组较成瘾组明显缩短(P0.05);空间探索实验中,成瘾组原平台所在象限搜索时间及原平台所在象限的游泳距离占总距离的百分比较正常组明显缩短(P0.05),针刺组较成瘾组明显增加(P0.01)。②PAG的NPY表达成瘾组低于正常组(P0.05),针刺组高于成瘾组(P0.05)。结论:HANS针刺对海洛因成瘾引起的大鼠学习记忆减退有恢复作用,并上调其PAG的NPY表达。     

不同时辰电针对氯胺酮滥用大鼠腹侧苍白球酪氨酸羟化酶、c-fos表达的影响

目的 探讨不同时辰电针对氯胺酮滥用成瘾戒毒治疗的形态学基础.方法 将56只SD大鼠随机分为正常对照组,生理盐水(10ml/kg)组、氯胺酮(100mg/kg)组、氧胺酮加电针组(分23:00予时、05:00卯时、11:00午时、17:00西时电针组).接上述设定剂量,经腹腔注射给药,每天一次,连续7天,氯胺酮加电针组于给药一周后分别在四个时辰给予低频(2Hz)电针交替刺激“足三里”与“三阴交”穴,持续30min/次／日,连续一周,采用免疫组织化学染色方法显示腹侧苍白球酪氨酸羟化酶、c-fos的表达.结果 与正常组和生理盐水组相比较,氯胺酮组腹侧苍白球酪氨酸羟化酶、c-fos表达明显增强(P＜0.01).与氯胺酮组相比较,午时、酉时电针组可使酪氨酸羟化酶、C-fos表达明显减弱(P＜0.01),而子时、卯时电针组无明显变化(P＞0.0S).结论 氯胺酮滥用可以增强酪氨酸羟化酶、c-fos在腹侧苍白球的表达,午时、酉时电针具有逆转作用.     

非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏SOCS-3的表达与吡格列酮干预研究

目的：探讨SOCS-3在非酒精性脂肪肝病（NAFLD）发病中的作用以及吡格列酮的干预作用。方法：29只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（8只）,高脂饮食组（21只）。饲养8周后,从高质饮食组随机抽取5只大鼠证实造模成功后,将该组余下的16只大鼠继续以高脂饲料喂养,并随机分为NAFLD对照组（8只）;吡格酮干预组（8只）,予以吡格列酮3mg·kg^-1·d^-1灌胃。16周末,处死所有大鼠,检测血糖、血胰岛素、血脂、肝脏SOCS-3mRNA和SREBP-lcmRNA表达及肝脏病理学。结果：与正常对照组相比,NAFLD组血糖、血胰岛素、血脂、肝脏脂肪变水平及肝组织SOCS-3mRNA、SREBPlCmRNA表达显著上调。吡格列酮干预组sOCS．3mRNA、SREBP-1cmRNA表达较NAFLD组下调,且血糖、血胰岛素、血脂、肝脏脂肪变水平下降。SOCS-3mRNA表达水平与胰岛素抵抗指数、SREBP．1cmRNA表达水平、肝脂肪变成显著正相关。结论：SOCS-3可能通过胰岛素抵抗及上调肝组织SREBP-lcmRNA表达参与NAFLD发病,吡格列酮能抑制肝脏SOCS-3的表达,对NAFLD有一定治疗作用。     

异甘草酸镁对纤维化大鼠肝脏TGF-β 1及Smad蛋白表达的影响

目的：观察异甘草酸镁对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏组织TGF-β1及Smad蛋白表达的影响,以期揭示其抗纤维化的机制。方法：利用腹腔注射四氯化碳（CCl4）建立大鼠肝纤维化模型,然后应用不同剂量的异甘草酸镁和INF-γ处理,于实验第16周末检测大鼠血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、III型前胶原（PC-III）、IV型胶原（C-IV）的水平,采用RT-PCR法检测TGF-β1,Smad3,Smad7mRNA的表达。结果：与模型组比较,异甘草酸镁各剂量组血清HA,LN,PC-III,C-IV水平显著下降（P〈0.05）,肝脏TGF-β1、smad3的表达明显降低（P〈0.05）,smad7则有所上升。结论：异甘草酸镁可以改善肝纤维化大鼠肝组织纤维化程度,其作用机理与抑制TGF-β1、Smad3mRNA的表达,上调Smad7mRNA的表达有密切关系。     

脾切除对肝纤维化大鼠肝脏TGFβ 1的表达和血清TGFβ 1水平的影响

目的：研究脾切除对肝纤维化大鼠肝脏TGFβ1的表达和血清TGFβ1水平的影响,探讨脾切除在肝纤维化中的意义。方法：用CCL4建立50例肝纤维化大鼠模型。于建模第3周,6周,及8周分别取大鼠肝脏和脾脏标本。用免疫组化SP方法测定其TGFβ1的表达,HE和姬姆萨染色检测肝纤维化。应用双抗体夹心ELISA方法测定15例模型大鼠行脾脏切除前后的血清TGFβ1水平,以及15例对照组大鼠的血清TGFβ1水平,并于术后4周取两组大鼠的肝脏标本,用免疫组化SP方法测定其TGFβ1的表达。应用CMIAS8彩色图像系统对阳性目标进行分析和处理。结果：随着肝纤维化程度的进展,大鼠肝脏和脾脏TGFβ1的表达也随之增加（P〈0.01）。脾切除组大鼠其血清TGF-β1的水平显著低于对照组大鼠（P〈0.05）,且脾切除组大鼠肝脏TGFβ1的表达低于对照组大鼠（P〈0.05）。结论：脾切除术在一定程度上可延缓肝纤维化的发展。     

FXR在胃粘膜肠化生及胃癌中的表达及其意义研究

目的:研究FXR在胃炎,胃粘膜肠化生及胃癌组织中的表达,分析其在胃癌发生中的意义。方法:采用免疫组化方法检测FXR在55例胃炎组织,61例胃黏膜肠化生组织及61例胃癌组织中的表达,利用统计学方法 SPSS17.0软件分析其在三种组织中的表达变化,结合文献回顾,分析FXR在胃癌发生中的意义。结果:FXR在胃黏膜肠化生中的表达明显高于胃炎组织(P0.05),而在胃癌组织中,FXR的表达显著低于胃粘膜肠化生组织(P0.05)。结论:FXR是一个潜在的胃癌发生生物标记物,其具体机制有待于进一步探索。     

电针对糖尿病大鼠学习记忆障碍及海马NT-3表达的影响

目的观察电针对糖尿病性认知功能障碍大鼠学习记忆的改善作用,及其对海马神经营养因子-3（NT-3）mRNA和免疫反应阳性细胞表达的影响。方法采用2％链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）构建糖尿病大鼠模型,将模型大鼠随机分为电针组（EA）、对照组（DM）与正常组（CN）进行比较。电针4周后糖尿病测定血糖水平,并用Morris水迷宫法观察电针对糖尿病大鼠学习记忆的影响,应用RT-PCR和免疫组化方法检测海马NT-3mRNA和免疫反应阳性细胞的表达水平。结果对照组血糖、上台潜伏期高于正常组和电针组（P〈0．01）,对照组NT-3mRNA和免疫反应阳性细胞的表达明显低于正常组和电针组（P〈0．01）;电针组NT-3表达明显高于对照组（P〈0．01）。结论电针能在一定程度上降低血糖,促进海马NT-3mRNA和免疫反应阳性细胞的表达,改善糖尿病认知功能障碍者的学习和认知功能。     

来氟米特联合依那西普对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响

目的：研究来氟米特和依那西普联合使用对佐剂性关节炎（AA）大鼠的治疗作用及其可能的作用机制。方法：建立AA大鼠关节炎模型,分为正常对照组、模型组、来氟米特组、依那西普组、来氟米特联合依那西普配伍组;采用关节炎指数评分法评价大鼠关节炎症程度,半定量RT-PCR和放射免疫法检测滑膜组织及血清中IL-1β、TNF-α表达水平,免疫组化方法检测滑膜组织中MMP－3含量。结果：①相较于AA模型组,来氟米特组、依那西普组和配伍组中大鼠的AI评分均显著下降（P〈0．01）,其中以配伍组关节炎指数为最低（P〈0．05）。②模型组大鼠血清及滑膜组织的IL-1β和TNF-α水平明显高于正常对照组（P〈0．01）,用药后各组的IL-1β和TNF-α水平均有所下降,并以配伍组降低最为明显（P〈0．01或P〈0．05）;③模型组大鼠滑膜组织MMP-3表达阳性密度显著高于正常对照组（P〈0．01）,用药后备组的MMP-3阳性密度降低（P〈0．01）,其中配伍组下降程度明显高于来氟米特组和依那西普组（P〈0．01）。结论：来氟米特和依那西普联合使用可明显减轻AA大鼠的关节炎症,降低血清和滑膜组织中IL-1β和TNF-α平,减少滑膜中MMP-3的表达,疗效优于单独使用来氟米特或依那西普。