大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin D和caspase．9表达的动态变化

目的：探讨大鼠缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶D（Cathepsin DCD）、caspase-9在不同时段蛋白质及mRNA表达变化。方法：将60只SD大鼠随机分为三组：正常组（10只）,假手术组（10只）,脑缺血再灌注组（40只）,线栓法制备大脑中动脉梗死模型（MCAO）,免疫组化及RT—PCR法分别检测CathepsinD、caspase-9的蛋白和mRNA表达。结果：与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注损伤后6h Cathepsin D的蛋白和mRNA表达明显增强（P〈0．05）,24h达高峰,48h仍保存高水平。caspase．9蛋白和mRNA6h开始明显升高,12h达高峰,此后缓慢下降,但48h组仍显著高于对照组（P〈0．05）,结论：Cathepsin D、caspase．9在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,溶酶体可能参与了脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的过程。     

大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin D和caspase-9表达的动态变化

目的:探讨大鼠缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶D(Cathepsin D CD)、caspase-9在不同时段蛋白质及mRNA表达变化。方法:将60只S D大鼠随机分为三组:正常组(10只),假手术组(10只),脑缺血再灌注组(40只),线栓法制备大脑中动脉梗死模型(MCAO),免疫组化及RT-PCR法分别检测Cathepsin D、caspase-9的蛋白和mRNA表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注损伤后6h Cathepsin D的蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.05),24h达高峰,48h仍保存高水平。caspase-9蛋白和mRNA6h开始明显升高,12h达高峰,此后缓慢下降,但48h组仍显著高于对照组(P<0.05),结论:Cathepsin D、caspase-9在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,溶酶体可能参与了脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的过程。     

大鼠脑缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶B表达的动态变化

目的:探讨大鼠脑缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶B(Cathepsin-B,CB)在不同时段表达变化.方法:将60只SD大鼠随机分为正常组(10只),假手术组(10只)和脑缺血再灌注组(40只),线栓法制备大脑中动脉梗死模型(MCAO),免疫组化和RT-PCR法分别检测Cathepsin-B的蛋白和mRNA表达.结果与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注后1hCathepsin-B的蛋白和mRNA表达明显增强,6h达高峰,48h仍保存高水平.结论:Cathepsin-B在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,可能在神经元凋亡中发挥着重要的作用.     

去铁敏干预蛛网膜下腔出血后溶酶体组织蛋白酶表达研究

目的:探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SAH,Subarachnoid Hemorrhage)早期脑损伤中溶酶体组织蛋白酶B(CathepsinB)、溶酶体组织蛋白酶D(Cathepsin D)的表达变化及去铁敏(DFO)对其的影响.方法:将24只SD大鼠随机分为四组:正常对照组(6只),SAH模型组(6只),安慰剂组(6只),DFO药物组(6只),视交叉前池注血法(APC)制作大鼠SAH模型,免疫组化分别检测CathepsinD、CathepsinB的蛋白表达,干湿法测定48 h脑含水量.结果:与正常组比较,SAH模型组大鼠48 h后CathepsinD、Cathepsin B的蛋白表达明显增强,水肿指数增高,DFO药物组大鼠48h后Cathepsin D、Cathepsin B的蛋白表达较SAH组明显减低,水肿指数减低.结论:Cathepsin D、Cathepsin B在大鼠蛛网膜下腔出血后表达增强,DFO能减少其表达并对早期脑损伤有保护作用,溶酶体可能参与了蛛网膜下腔出血早期脑损伤的过程,稳定溶酶体膜,减少Cathepsin B/D的释放可能为SAH后早期脑损伤提供新的治疗途径.     

PEP-1超氧化物歧化酶对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2的影响

目的：观察细胞穿透肽-铜,锌超氧化物歧化酶（PEP-1-SOD1）预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用及其脑保护机制。方法：线栓法建立大鼠局灶性脑缺血6h后再灌注损伤模型,进行神经行为评分,并通过HE染色在光镜下观察神经细胞损伤变化,免疫组化法检测B细胞淋巴瘤基因-2（B—celllymphoma-2,Bcl-2）蛋白的阳性表达。结果：盐水对照组（缺血再灌注组或模型组）神经障碍显著高于假手术组（P〈0．05）,与模型组相比,PEP-1-SOD1预处理组可降低神经障碍评分（P〈0．05）;光镜下,假手术组神经细胞结构正常,PEP-1-SDO1预处理组和缺血再灌注组均有不同程度的缺血再灌注损伤,PEP-1-SOD1预处理组较缺血再灌注组损伤轻;假手术组Bcl-2蛋白表达极弱,缺血再灌注组和PEP-1-SOD1预处理组在脑缺血再灌注后6h在缺血半暗带周围出现Bcl-2蛋白阳性表达,24h达到高峰,48h表达开始减少。与假手术组相比,PEP-1-SOD1预处理组和缺血再灌注组Bcl-2蛋白阳性细胞数显著增多（P〈0．05）;与缺血再灌注组相比,PEP-1-SOD1预处理组Bcl-2蛋白阳性细胞数显著增多（P〈0．05）。结论：PEP-1-SOD1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,PEP-1-SOD1可通过上调Bcl-2蛋白的表达发挥脑保护作用。     

缺血后适应对局灶性脑缺血/再灌注大鼠caspase-3表达的影响

目的：探讨缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后caspase-3表达的影响。方法：大脑中动脉线拴法复制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤动物模型。将30只雄性SD大鼠随机分为3组（n=10）：假手术组（sham组）、缺血/再灌注（I/R）组和缺血后适应（IP）组。利用原位缺口末端标记法观察神经细胞凋亡的变化。应用Western blot检测大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后caspase-3蛋白表达水平的变化。结果：大鼠脑缺血/再灌注后凋亡细胞数量和caspase-3蛋白表达水平均显著升高,而缺血后适应组凋亡细胞数量和caspase-3蛋白表达水平均显著低于缺血/再灌注组（P〈0.01）。结论：缺血后适应可抑制大鼠脑缺血/再灌注后细胞凋亡的发生,此作用可能与下调caspase-3蛋白表达有关。     

姜黄素对自发性高血压大鼠脑缺血/再灌注后海马神经元损伤及RANTES表达的影响

目的：探讨姜黄素对自发性高血压大鼠（SHR）脑缺血/再灌注后认知功能及海马神经元损伤和调解活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子（RANTES）表达的影响。方法：雄性Wistar-Kyoto大鼠（WKY）和SHR,随机分为5组：假手术组（W-Sham、S-Sham）、缺血/再灌注组（W-I/R、S-I/R）和姜黄素组（S-Cur）,各组按再灌注时间分为3h、12 h、1 d、3 d、7 d 5个亚组（n=6）。采用四血管阻断法制备全脑缺血/再灌注模型,HE染色观察海马CA1区神经细胞形态,Nissl染色计数海马CA1区平均锥体细胞密度,ELISA法检测海马RANTES表达,于再灌注后7 d观察行为学。结果：与假手术组大鼠比较,缺血/再灌注组大鼠学习和记忆能力下降,海马CA1区神经元损伤加重,海马RANTES蛋白表达上调（P〈0.05）;与W-I/R大鼠比较,S-I/R大鼠学习和记忆能力下降,海马CA1区神经元损伤加重,海马RANTES蛋白表达上调（P〈0.05）;姜黄素组大鼠学习和记忆能力明显改善,海马CA1区神经元损伤减轻,海马RANTES蛋白表达下调（P〈0.05）。结论：缺血/再灌注更易导致SHR海马神经元损伤。姜黄素减轻SHR脑缺血/再灌注海马神经元损伤,其机制可能与抑制RANTES蛋白的表达有关。     

缺血后适应对局灶性脑缺血/再灌注大鼠p38表达的影响

目的：探讨缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后p38表达的影响。方法：将30只雄性SD大鼠随机分为3组（n=10）：假手术组（sham组）、缺血/再灌注（I/R）组和缺血后适应（IP）组。利用TUNEL法观察神经细胞凋亡的变化,应用Westernblot检测大鼠局灶性脑I/R损伤后p38蛋白表达水平的变化。结果：大鼠脑缺血/再灌注后凋亡细胞数量和p38蛋白表达水平均显著升高,而IP组凋亡细胞数量和p38蛋白表达水平均显著低于IR组（P〈0.01）。结论：缺血后适应可抑制大鼠脑缺血/再灌注后细胞凋亡的发生,此作用可能与下调p38蛋白表达有关。     

PPARβ mRNA在全脑缺血/再灌注大鼠海马表达变化

目的探讨PPARβ mRNA在大鼠全脑缺血/再灌注损伤后的表达变化。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血/再灌注模型。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,HE染色观察海马神经元形态变化,RT-PCR检测大鼠海马PPARβ mRNA的表达变化。结果全脑缺血/再灌注大鼠空间学习记忆能力明显下降,海马神经元核固缩;与假手术组相比,全脑缺血/再灌注后2h时PPARβ mRNA的表达明显增加,48h时达表达高峰,15d时表达下降但仍明显高于假手术组,而在30d时其表达略高于假手术组,但差异无统计学意义。结论全脑缺血/再灌注诱导大鼠海马PPARβ mRNA表达明显增加,此升高可能对全脑缺血/再灌注损伤具有保护作用。     

Ucf-101对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察Ucf—101对大鼠脑缺血再灌注后神经元caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的影响,研究其对缺血性脑损伤是否具有保护作用。方法将36只雄性WiStar大鼠随机分为3组：假手术组、缺血组及Ucf—101组,采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）2h再灌注模型,于再灌注后6h和24h断头取脑,采用TTC法测梗死体积,TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化,免疫组化法观察脑皮质神经元caspase-3的表达。结果脑缺血再灌注后不同时间点（6h、24h）,Ucf-101组与缺血组相比梗死体积明显缩小,有显著性差异（P〈0．05）;假手术组未见梗死现象。缺血组TUNEL阳性细胞数较假手术组明显增多（P〈0．05）,脑皮质caspase-3的表达较假手术组亦显著增强（P〈0．05）,给予Ucf-101处理后,TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少（P〈0．05）,caspase-3的表达较缺血组亦明显减弱（P〈0．05）。结论Ucf-101能有效地抑制脑缺血再灌注损伤,下调脑皮质神经元Caspase-3蛋白的表达,抑制神经元的凋亡,发挥神经保护作用。     

脑缺血再灌注损伤大鼠血浆蛋白C活性变化的研究

目的探讨脑缺血再灌注损伤大鼠血浆蛋白C活性的变化及其检测意义。方法取SD大鼠30只,随机分为正常对照组(NC组)、假手术组(SH组)及脑缺血再灌注模型组(IR组),每组10只。线栓法制备左侧局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h,神经功能缺损评分后,右侧颈总动脉取血,离心后取血浆50μl,于-20℃冰冻保存,发色底物法检测蛋白C活性;余血浆2 h内检测凝血功能各指标。结果 IR组大鼠蛋白C活性较NC组及SH组明显降低(P0.01),SH组PC活性较NC组也降低(P0.05);IR组较NC组及SH组PT、APTT明显降低(P0.01),FIB显著增高(P0.01)。结论脑缺血再灌注损伤后PC活性明显改变,检测血浆PC活性的变化对缺血再灌注脑损伤的早期诊断与治疗监测具有重要意义。     

cAMP/PKA-pCREB信号通路介导康复训练促进脑缺血大鼠运动功能恢复的探讨

目的探讨cAMP/PKA-pCREB信号通路是否在康复训练促进的缺血性脑卒中大鼠运动功能的恢复方面发挥作用。方法采用Longa改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型(middle cerebral artery ischemia-reperfusion model,MCAO),造模成功的大鼠随机分为自然恢复组(n=24)、自然恢复+Rp-cAMP组(n=24)、康复训练组(n=18)和康复训练+Rp-cAMP组(n=18)。同时设立假手术组(n=12)。于侧脑室注射RpcAMP后立即进行MCAO模型的制备。训练组大鼠于术后48 h开始每天给予平衡木、转棒及滚筒训练。采用平衡木试验评定大鼠的运动功能。酶联免疫法(ELISA)检测缺血灶周围的脑组织内PKA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测pCREB蛋白表达,同时采用免疫组化法对pCREB进行定位检测。结果 (1)运动功能评分结果揭示,自然恢复+Rp-cAMP组大鼠的运动功能低于自然恢复组,提示Rp-cAMP可抑制脑缺血大鼠运动神经功能的恢复;康复训练组大鼠的运动功能明显高于自然恢复组,也高于康复训练+Rp-cAMP组,提示Rp-cAMP明显减弱康复训练促进脑缺血大鼠运动神经功能的恢复;(2)于术后2 d、7 d、14 d、21 d检测缺血灶周围的脑组织PKA、pCREB的蛋白表达结果显示:康复训练组明显高于自然恢复组,同时高于康复训练+Rp-cAMP组,提示康复训练促进脑缺血大鼠的PKA、pCREB蛋白的表达,且Rp-cAMP明显抑制了康复训练促进脑缺血大鼠的PKA、pCREB蛋白的表达。结论 cAMP/PKA-pCREB信号通路可能介导康复训练促进的脑缺血大鼠运动功能的恢复。     

人参皂甙Rd抑制大鼠局灶性脑缺血后趋化因子CXCL1和γ-干扰素的蛋白表达

目的：研究人参皂甙Rd（Ginsenoside-Rd,GS-Rd）在大鼠局灶性脑缺血后对炎症趋化因子CXCL1和γ-干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）的影响。方法：将SD大鼠随机分为5组：正常组（n=5）,假手术组（n=5）,GS-Rd对照组（n=5）,大脑中动脉栓塞模型（MCAO）组（n=20）,MCAO＋GS-Rd组（n=20）。正常组不做任何处理;假手术组进行大脑中动脉栓塞手术,但不插入栓线;GS-Rd对照组给予腹腔注射10 mg/Kg GS-Rd,不进行手术;MCAO组（n=20）和MCAO＋GS-Rd组（n=20）进行大脑中动脉栓塞手术,术后2小时拔出栓线,MCAO＋GS-Rd组在术前15分钟腹腔注射10 mg/Kg GS-Rd。在12小时、1天、3天、7天四个时间点分别提取脑组织蛋白,通过液相芯片技术检测CXCL1,IFN-γ含量。结果：正常组,假手术组和GS-Rd对照组组间CXCL1,IFN-γ含量无统计学差异;与三个对照组相比,MCAO组和MCAO＋GS-Rd组中CXCL1,IFN-γ蛋白含量均有明显增加（P〈0.05）;而与MCAO组相比,MCAO＋GS-Rd组CXCL1,IFN-γ的生成明显减少（P〈0.05）。结论：10 mg/Kg GS-Rd预处理可有效抑制大鼠短暂性脑缺血后CXCL1,IFN-γ的生成;通过抑制炎症反应,GS-Rd可能在神经保护中发挥重要的作用。     

含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白对腹膜透析大鼠

目的：探讨含蛋白转导域的SARA融合蛋白（PTD-SAR／SBD）对腹膜透析大鼠腹膜纤维化的抑制作用。方法：每日腹腔注射4．25％葡萄糖腹膜透析液（PDF）制备腹膜透析大鼠模型。28只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组（n=8）;腹膜透析模型组（n=10）;PTD-SARA／SBD蛋白干预组（n=10）。4周后行腹膜平衡试验,检测超滤量、葡萄糖吸收率;留取壁层腹膜组织行HE染色;免疫组织化学方法检测大鼠壁层腹膜间皮细胞转分化指标E-cadherin和Twist的表达;Westemblotting测定E-cadherin、twist,以及CollagenⅠ、TGF-β1、P-Smad3、t-Smad3的表达。结果：①与正常对照组比较,模型组大鼠壁层腹膜增厚,糖转运率增加,超滤量降低（P〈0．01）;免疫组织化学与westernblotting检测结果显示E-cadherin表达下调,Twist表达上调;CollagenⅠ、P-Smad3、TGF-β1表达增加。②与模型组比较,PTD-SARA／SBD蛋白干预组大鼠壁层腹膜糖转运率降低,超滤量增加（P〈0．05）;E-cadherin表达上调,Twist表达下调;CollagenⅠ、TGF-β1、P-Smad3表达减少,各组t-Smad3无明显变化。结论：PTD-SARA／SBD融合蛋白通过抑制TGF-WSmads信号通路部分逆转腹膜间皮细胞转分化从而改善腹膜结构和功能,为防治腹膜透析所致腹膜纤维化奠定基础。     

C型钠尿肽及其受体在急性肺损伤大鼠肺组织的表达变化及其意义

目的了解C型钠尿肽及其受体NPRB在急性肺损伤大鼠肺组织中的表达变化规律。方法采用LPS注射建立ALI大鼠动物模型。将动物分为生理盐水组(N组),LPS干预1 h组(LPS 1 h组),LPS干预3 h组(LPS 3 h组),LPS干预6 h组(LPS 6 h组),通过RT-PCR检测各组大鼠肺组织CNP及NPRB mRNA的表达情况,以及免疫组化检测各组大鼠NPRB的表达变化,以生理盐水组作为阴性对照。结果正常大鼠肺组织可表达CNP及NPRB,LPS干预后,CNP显著升高,LPS 6 h达到高峰,与对照组比较有显著性差异(P0.05);相反,NPRB在LPS干预后出现表达降低,与对照组比较有显著性差异(P0.05)。结论CNP与NPRB的表达变化可能是导致肺损伤加重的重要原因之一。     

不同强度电针刺激对失眠大鼠下丘脑orexinA的影响研究

目的 探讨电针对失眠大鼠下丘脑食欲素A（orexinA）的影响及不同强度电针对orexinA的效应差异。方法将SD大鼠随机分为正常对照组（normalcontrol,NC）、失眠模型组（insomniamodel,IM）、强刺激电针组（strongstimulativeeleetroacupuncture,SSEA）、弱刺激电针组（weakstimulativeelectroacupuncture,WSEA）。除正常对照组外,其余各组大鼠均用对氯苯丙氨酸（PCPA）建立大鼠失眠模型,选穴“百会”、“足三里”、“三阴交”,并用不同强度电针治疗。5d后,用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测下丘脑orexinAmRNA表达,采用免疫组织化学技术观察下丘脑orexinA阳性神经元表达。结果与正常对照组比较,失眠模型组大鼠下丘脑orexinAmRNA表达显著升高（P〈0．01）,orexinA阳性神经元染色较深,且表达量较多;与失眠模型组相比,两电针组大鼠下丘脑orexinAmRNA表达明显下降（P〈0．01）,orexi—nA阳性神经元染色较浅,表达量较少,强刺激电针组作用更为明显。结论电针可以改善失眠大鼠下丘脑异常增多的orexinA,调节睡眠-觉醒周期,且强刺激电针组效果较好。     

甘珀酸对大鼠大脑中动脉缺血再灌注后星形胶质细胞增殖及活化的影响

目的探讨缝隙连接阻断剂甘珀酸对大鼠大脑中动脉(Middle Cerebral Artery,MCA)缺血再灌注模型半暗带区星形胶质细胞增殖及活化的影响。方法成年雄性SD大鼠80只,随机分为生理盐水组(n=35)、CBX干预组(n=35)和假手术组(n=10)。CBX干预组术前1h右侧侧脑室注射CBX,生理盐水组右侧侧脑室注射生理盐水,建立标准大脑中动脉梗死模型,缺血1h后再灌注6h、1d、3d、7d,免疫荧光及免疫印迹的方法观察GFAP,Ki67,PCNA的表达情况。结果与对照组比较,CBX干预组大鼠术后半暗带区GFAP的表达量减少,Ki67与GFAP双阳性细胞减少(P0.05),PCNA的表达量没有明显的变化。结论甘珀酸可以抑制缺血引起的星形胶质细胞的活化增殖。