细胞周期、限制点、关卡

１细胞周期、限制点、关卡的概念细胞周期（ｃｅｌｌｃｙｃｌｅ）是指亲代细胞分裂结束到子细胞分裂结束之间的间隔时期。人们一般将细胞周期分为Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期等四个分期。还有一种所谓的静止期细胞（Ｇ０期细胞）暂时不增殖,在某种情况下可离开Ｇ０期而重新进入增殖周期。在细胞周期时相转变过程中有两个限制点（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｐｏｉｎｔｓ）决定细胞是继续增殖还是进入静止状态。当在不合适条件下,如营养匮乏、缺乏血清生长因子和抑素（ｃｈａｌｏｈｅ）等等,可以使细胞不能通过限制点而阻滞在细胞增殖周期中。一个主…     

细胞松弛素B促微丝解聚对DNA合成的作用

利用微丝（ＭＦ）解聚药物细胞松弛素Ｂ（ＣＢ）处理Ｇ０期小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２成纤维细胞,对Ｇ０至Ｓ期ＤＮＡ合成,胸腺嘧啶核苷激酶（ＴＫ）活性、ＴＫ基因表达、钙调素（ＣａＭ）水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察。Ｇ０期细胞经３ｍｇ／ＬＣＢ处理２ｈ,促ＭＦ解聚增强了血清对Ｓ期细胞ＴＫ活性、ＴＫ基因表达和ＤＮＡ合成的刺激作用,并促进细胞提前进入Ｓ期。血清刺激Ｇ０期细胞进入晚Ｇ１期和Ｓ期时,ＣａＭ     

不同细胞周期大鼠肝实质细胞癌细胞粘弹特性研究

以胸腺嘧啶核苷和秋水仙碱顺序阻断法及胸腺嘧啶核苷双阻断法分别获得同步化Ｇ１期和Ｓ期细胞,从细胞周期角度出发,采用微管吸吮技术对大鼠肝实质细胞癌细胞的粘弹特性进行了测定并以标准线性固体模型对实验数据进行了拟合,结果表明：该细胞具有高弹性和低粘性的总体特征;Ｇ１期细胞与Ｓ期细胞相比具有高Ｋ１值和低μ值的特点,从而显示Ｇ１期细胞比Ｓ期细胞具有更大的强度和更快的被动变形能力。这些结果不仅反映了同步化细胞存在的细胞骨架状态的周期性差异,也提示Ｇ１期细胞可能比Ｓ期细胞更适于在血流中存活和转移。     

细胞转化过程中胞内钙离子浓度的变化

使用钙离子荧光探针Ｆｌｕｏ－３ＡＭ和ＤＮＡ荧光染料Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２联染细胞的方法,利用显微分光光度计ＭＰＶⅡ测量了两种温度敏感细胞—６Ｍ２和ｔｓＲＳＶＮＩＨ３Ｔ３－ＬＡ９０细胞及Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２和转化Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２细胞在不同细胞周期时相内钙的浓度,发现从Ｇ１期到Ｓ期到Ｇ２期,６ｍ２细胞当在３３℃培养时（转化状态）胞内钙的浓度〔Ｃａ＾２＋〕ｉ分别为８５．０,１３８．４２３９．０ｎｍｏｌ     

在肾癌细胞系GRC—1细胞周期不同阶段Wnt—5A基因的？…

Ｗｎｔ基因所编码的蛋白质与许多生长因子一样具有分泌型生长因子的结构特点,其家族成员Ｗｎｔ－５Ａ是许多恶性肿瘤的自分泌生长因子,在肾细胞癌中表达显著升高。为研究在细胞周期的不同阶段生长因子ＷＮＴ－５Ａ在转录水平的表达情况,我们采用胸腺嘧啶双阻断及高压笑气处理的方法,使肾细胞癌细胞系ＧＲＣ－１细胞同步化。用半定量反转录多聚酶链反应对处于细胞周期不同阶段的细胞ｃＤＮＡ进行扩增,Ｓ期与Ｇ１,Ｍ期Ｗｎｔ－５     

外源性Rb基因对平滑肌细胞p21基因表达的影响

应用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组化法测定ｐ２１ｍＲＮＡ及蛋白表达水平;蛋白质印迹法观察Ｒｂ蛋白的磷酸化;流式细胞术分析细胞周期,并以细胞形态观察和β－半乳糖苷酸染色检测细胞衰老。结果发现,外源性Ｒｂ基因导入人脐动脉血管平滑肌细胞后,诱导ｐ２１基因表达,使Ｒｂ主要怍于非磷酸化状态,引起约７０％的细胞生长停滞在Ｇ０／Ｇ１期,平滑肌细胞发生衰老。结果提示,Ｒｂ基因通过诱导ｐ２１基因表达以调节细胞周期和促进细胞衰     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ ＰＡ 对人肝癌细胞系ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞的生长调控、诱导凋亡作用。结果表明： ４ － ＰＡ 对ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞增殖抑制的ＩＣ５０ 为４ －９ｍ ｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０ 增加。作用效果迅速,在０ ．５ 小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ ＰＡ 浓度的增加和作用时间的延长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞凋亡的分析发现：４ － ＰＡ 对细胞增殖期（Ｓ期、Ｇ２ 期） 有较强的抑制和逆转作用,使细胞群截止在Ｇ１ 期。随着作用时间的延长和４ － ＰＡ 浓度的增加,细胞凋亡的比例增加,凋亡细胞多来自于细胞增殖期（Ｓ 期、Ｇ２ 期） 。诱导凋亡和使细胞截止于细胞静息期是４ － ＰＡ 抑制细胞增殖的主要途径。     

细胞松驰素B促微丝解聚对DNA合成的作用

利用微丝（ｍｉｃｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ,ＭＦ）解聚药物细胞松驰素Ｂ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ,ＣＢ）处理Ｇ_０期小鼠Ｃ_３Ｈ_（１０）Ｔ_（１／２）成纤维细胞,对Ｇ_０至Ｓ期ＤＮＡ合成,胸腺嘧啶核苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性、ＴＫ基因表达、钙调素（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察,Ｇ_０期细胞经３ｍｇ／ＬＣＢ处理２ｈ,促ＭＦ解聚增强了血清对Ｓ期细胞ＴＫ活性、ＴＫ基因表达和ＤＮＡ合成的刺激作用,并促进细胞提前进入Ｓ期．血清刺激Ｇ_０期细胞进入晚Ｇ_１期和Ｓ期时,ＣａＭ水平明显升高,而ＣＢ预处理则使ＣａＭ含量进一步增加,特别是ＣＢ处理促使Ｓ期ＣａＭ增加向核内转移．ＣＢ处理明显增强血清对ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达的刺激作用,而ＰＫＣ抑制剂Ｈ_７则抑制ＣＢ处理对这些基因转录的刺激作用,说明ＣＢ使Ｇ_０期细胞ＭＦ解聚刺激ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的转录活性与ＰＫＣ的作用有关．结果表明Ｇ_０至Ｓ期早期ＭＦ的重组可促进细胞进入Ｓ期,增强ＤＮＡ合成．     

人重组Fas配体体外诱导细胞周期特异性凋亡模型的建立及其意义

以Molt-4、Jurkat细胞株和外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)为靶细胞,检测细胞膜上Fas的表达。人重组Fas配体(recombinanthumanFasligand,rhFasL)诱导细胞6～36h后用改良后的API等方法检测细胞凋亡及诱导凋亡过程中细胞周期蛋白的变化,探讨Fas介导的细胞凋亡与细胞周期的关系。结果显示:rhFasL诱导Molt-4、Jurkat细胞株和植物血凝素刺激进入细胞周期的PBL的凋亡具有细胞周期特异性并始动于G1期;而G0期PBL的细胞膜上虽然也有Fas的表达,但不能诱导细胞凋亡。研究还发现rhFasL诱导细胞凋亡时G1期的细胞周期蛋白D3明显升高,细胞周期蛋白E明显下降。以上结果表明rhFasL体外诱导的细胞凋亡发生在晚G1期,细胞凋亡的发生与细胞是否通过限制点进入细胞周期有关,细胞凋亡发生于晚G1期是G1期细胞周期蛋白E的下降和检测点的监督导致DNA受损的细胞不能通过G1/S交界的结果。     

M期启动调节的普遍机制

细胞周期内发生的事件是细胞正常繁殖所必需的。对于所有的细胞周期来说,有两个事件是主要的:S期和M期。前者是染色体复制时期,后者是复制了的染色体分离并进入两个子细胞的时期。本文讨论细胞周期中M期启动的调控。据现在所知,所有的真核细胞存在一个共同的调控机制,其中心是蛋白激酶P34~(cdc2),它在有丝分裂及减数分裂的M期都被活化。在活化时,该激酶的磷酸化状态需要发生改变,并要和周期素(cyclin)相互作用。周期素是一类在细胞周期过程中水平发生变化的蛋白质。P34~(cdc2)被认为可以     

LZ—410盼生安对肝癌细胞细胞周期时相的影响及对DNA损伤效应…

ＬＺ－４１０盼生安是一种广谱抗肿瘤药物。本文以５－Ｆｕ作为阳性对照药物从对ＢＥＬ－７４０２肝癌细胞周期时相的影响及对ＤＮＡ损伤效应两个方面进行了初步探讨。结果表明,ＬＺ－４１０能将细胞阻滞在Ｇ０／Ｇ１期,抑制了细胞的生长增殖作用。并且在本实验条件下,ＬＺ－４１０并不引起ＤＮＡ的损伤。这表明ＬＺ－４１０抑制肝癌细胞生长增殖不是通过对ＤＮＡ损伤引起的,而主要是通过阻滞肿瘤细胞于Ｇ０／Ｇ１期实现的。     

细胞周期蛋白

Ｐ３４＾ｃｄｃ２激酶在真核生物细胞周期的调节中起着核心作用,它由催化亚基与调节亚基共同组成,催亚基主要有两种亚型,分别在细胞周期的不同时相发挥作用,调节亚基称为细胞周期蛋白,亦不止一种,可相应地分为Ｇ１期细胞周期蛋白与Ｍ期细胞周期蛋白。     

缺血缺氧对体外培养星形胶质细胞细胞活化和细胞周期的影响

目的观察缺血缺氧损伤对星形胶质细胞细胞活化和细胞周期的影响。方法用流式细胞仪及BrdU掺入法检测缺血缺氧后不同时间点星形胶质细胞细胞周期变化和细胞的增殖活力;用荧光免疫细胞化学技术测定胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)及细胞周期蛋白cyclinD1的表达水平。结果体外缺血缺氧损伤后星形胶质细胞S期较正常组明显增高,6h达高峰,BrdU掺入法显示损伤后6h星形胶质细胞的增殖活力最高,而随后S期细胞数目及细胞增殖活力都呈下降趋势。在缺血缺氧早期,GFAP阳性染色增强,6h最高;缺血缺氧12h后GFAP阳性染色变弱,而cyclinD1的表达在损伤后逐渐增加,在24h时达高峰。结论缺血缺氧损伤激活星形胶质细胞,使其进入新的细胞周期,出现细胞的增殖反应;cyclinD1参与了损伤后星形胶质细胞的修复和增殖;细胞周期事件与星形胶质细胞的增殖活化密切相关。     

细胞周期抑制蛋白Kip及Ink4研究进展

真核细胞的细胞周期由细胞周期素依次激活相应的Ｃｄｋ所推动,细胞能否通过限制点从Ｇ１期进入Ｓ期很大程度上取决于Ｇ１期细胞内ＣｙｅｌｉｎＤ１／ＣｙｃｌｉｎＥ／ＣｙｃｌｉｎＡ的积累,Ｃｄｋ４／Ｃｄｋ６／Ｃｄｋ２,Ｋｉｐ的化学剂量关系及Ｉｎｋ４的活ｉｐ和Ｉｎｋ４是目前已知的两类结构不同、作用方式也不尽相同的细胞周期抑制蛋白;Ｋｉｐ主要以化学剂量方式,一方面抑制与ＤＮＡ复制相关的蛋白质的ｍＲＮＡ的转录;另一     

细胞周期特异性细胞凋亡的形态学观察

目的观察喜树碱诱导Molt-4细胞凋亡形态的细胞周期时相性变化,建立一种新的细胞周期特异性细胞凋亡分析方法.方法以凋亡诱导剂喜树碱(终浓度为0.15μmol/L)影响下的Molt-4细胞为检测对象,应用流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化;用琼脂糖凝胶电泳的方法探测断裂的DNA片段存在,进一步证实细胞凋亡的存在;碘化丙啶(PI)染色后,再应用流式分选术结合激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microsope, LSCM)观察各期细胞形态从而对已凋亡细胞进行形态学确认.结果①琼脂糖凝胶电泳可见清晰的DNA梯形条带(DNA ladder); ②喜树碱导致Molt-4细胞周期的S期水平明显下降,并伴随有一明显的细胞凋亡峰; ③只在S期细胞中可见到已凋亡细胞.以上说明喜树碱可以诱导Molt-4细胞凋亡,并细胞凋亡发生在细胞周期中的S期,与传统的结论一致.结论通过DNA直方图分选后细胞凋亡形态学分析可以对细胞凋亡的细胞周期特异性进行检测.这种方法使细胞周期特异性凋亡的分析更加可靠全面.     

荔枝核离子交换树脂分离物对肝癌细胞体外增殖及凋亡的影响

为探讨荔枝核提取物对人肝癌细胞HepG-2增殖的影响,采用MTT法检测样品对HepG-2细胞的增殖抑制活性,选取活性最好的组分进行Hoechest 33258染色,检测其对HepG-2细胞的致凋亡能力;细胞凋亡率及细胞周期的改变采用PI染色和流式细胞术进行测定。结果表明,荔枝核提取物及纯化后的多个组分都显示出对HepG-2细胞的增殖抑制活性,其中组分L2．3效果最好,对HepG-2细胞有明显的剂量依赖性增殖抑制作用（P〈0．05）;倒置显微镜下可见经也．3处理72h后细胞形态明显变小变圆,正常存活的细胞随药物浓度增加而减少;Hoechest 33258染色后处理组HepG-2细胞染色质固缩,出现呈致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体;在100、50μg／mL浓度时,L2．3处理48h后HepG-2细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）,G0／G1期细胞减少（P〈0．05）,S期细胞增多（P〈0．01）,G2／M期细胞减少。以上结果证明荔枝核提取物可通过诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布抑制HepG-2细胞增殖。     

血管平滑肌细胞增殖与Cdk抑制蛋白p27的表达

ｐ２７蛋白是细胞周期素依赖性激酶（Ｃｄｋ）抑制蛋白家族中的一种,主要对外部促进或抑制细胞增殖的信号起反应。本研究应用流式细胞仪（ＦＣＭ）双标记的方法观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）、血管加压素（ＡＶＰ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）细胞周期百分比和ｐ２７蛋白表达量的影响。静止状态培养的ＶＳＭＣｓ加入ＡｎｇⅡ,ＡＶＰ,ＰＤＧＦＢＢ后,在不同时间收集细胞,用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ,以确定细胞所处的周期。用ｐ２７蛋白的单抗和标记了ＦＩＴＣ的二抗标记细胞,通过流式细胞仪测定被激发出的荧光量来确定细胞ｐ２７蛋白表达的相对量。结果显示,ＡｎｇⅡ刺激ＶＳＭＣｓ增生,其蛋白含量增加了４３６％（Ｐ＜００１）,但不抑制ｐ２７蛋白的表达;ＡＶＰ可轻度抑制ｐ２７的表达,有轻度促进ＶＳＭＣｓ增殖和增生的作用（Ｐ＜００５）;ＰＤＧＦ明显抑制ｐ２７的表达,引起细胞增殖。本研究结果提示,ｐ２７蛋白抑制ＶＳＭＣｓ通过Ｇ１期进入Ｓ期,是抑制ＶＳＭＣｓ增殖的重要调节因子。     

适宜的低温能有效地积累分裂期细胞

适宜的低温能有效地积累分裂期细胞肖桂芝（河北省承德医学院０６７０００）在植物染色体研究工作中，无论是对染色体计数还是进行染色体组型分析，以及细胞有丝分裂的观察等，均希望有较多的分裂期细胞。但在细胞周期中，分裂期（Ｍ期）持续的时间很短，所以，在通常最适...     

索拉菲尼联合阿霉素对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用

目的：探讨索拉非尼（Sorafenib）和阿霉素（adriamycin）联合用药对肝癌细胞株nepG2的作用及可能的机制。方法：以不同浓度索拉非尼和不同浓度阿霉素分别组成单药组和索拉非尼＋阿霉素联合用药组作用于HepG2细胞,MTT法检测增殖抑制率、流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果：索拉非尼、阿霉素单药与联用均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量依赖效应,两药联用有协同效应（P〈0.01）。索拉非尼、阿霉素单药与联用均能诱导HepG2细胞凋亡,并以联合组更为明显,与对照组比较有显著的统计学意义（P〈0.01）。索拉非尼及阿霉素单药作用均可使细胞周期阻滞于G0-G1期,联合用药组G0/Gl期细胞比率低于索拉非尼及阿霉素单药组,S期细胞比率高于单药组;阿霉素能抑制HepG2细胞Survivin mRNA表达诱导细胞的凋亡。结论：索拉非尼与阿霉素联合作用于人肝癌HepG2细胞具有协同作用,其机制可能是通过多途径共同抑制HepG2细胞增殖及诱导细胞凋亡。     

黄芪对儿童哮喘T细胞亚群细胞周期的影响

目的:观察黄芪对发作期哮喘患者T细胞亚群细胞周期的影响,揭示黄芪在哮喘治疗中的意义。方法:课题以儿童哮喘病人T细胞亚群为研究对象,对CD4+、CD8+T细胞进行分离,采用细胞培养技术,用黄芪对其进行体外处理,使用流式细胞仪测定经黄芪处理和未经黄芪处理的CD4+、CD8+T细胞的细胞周期分布情况。结果:儿童哮喘患者CD4+、CD8+T细胞分别在经黄芪处理和未经黄芪处理的条件下培养,在CD4+T细胞中,黄芪组的S期CD4+T细胞百分比显著低于对照组,有统计学意义(P<0.01);G1期细胞百分比显著高于对照组,有统计学意义(P<0.01)。在CD8+T细胞中,黄芪组的S期CD8+T细胞百分比低于对照组,有统计学差意义(P<0.05);G1期细胞百分比高于对照组,有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪抑制发作期哮喘患者CD4+、CD8+T细胞DNA合成,进而调节细胞周期使之停滞在G1期。黄芪对发作期儿童哮喘患者有一定的治疗意义。