羊肚菌菌丝标识性抗原C6A8在菌丝不同发育阶段含量的变化规律

为找寻、了解羊肚菌(Morchella esculenta)标识性抗原在菌丝不同发育阶段含量的变化规律,建立以抗C6A8抗原的单克隆抗体为包被抗体的ELISA双抗体夹心法;检测分析在液体培养条件下营养菌丝中C6A8抗原随培养时间延长其含量变化情况;检测分析单位质量羊肚菌子实体菌柄、菌盖中C6A8抗原含量差异并与营养菌丝相比较;通过对野生羊肚菌出菇地土壤基质样本的检测,分析了解在出菇时土壤基质中C6A8抗原的含量情况。羊肚菌菌丝在液体培养条件下,单位质量的菌丝内C6A8抗原含量不随着菌丝的增长量及培养时间的增加而变化,基本保持恒定,波长450nm处OD值为0.332±0.026;子实体中C6A8抗原含量菌柄高于菌盖,且子实体柄和盖的含量均高于液体培养的营养菌丝中的含量;在出菇阶段,野生羊肚菌出菇点及周围的单位质量土壤基质样本中C6A8抗原含量范围较广,高含量点比出菇点高出近1倍。     

用乙脑病毒减毒株单克隆抗体分析乙脑病毒强毒株和减毒株的抗原差别

用乙型脑炎(乙脑)病毒强毒株免疫制备的单克隆抗体(McAb)分析证明强毒株之间的抗原差别,已有研究报道。本实验用乙脑病毒减毒活疫苗2-8株免疫制备的McAb分析强毒株和减毒株之间的抗原差别。 一、乙脑病毒株 2-8株和5-3株均为减毒活疫苗株。SA14株和A2株均为强毒株,SA14株是2-8株和5-3株的母株,A2株是国内实验室标准株。     

单克隆抗体对小苍兰褪绿条纹花叶病毒及其决定簇的作用特性

采用杂交瘤技术，得到抗小苍兰褪绿色条纹花叶病毒（FCSMV）六个单克隆抗体P3、4A4，6B、，7A6，7D1和7DS。ELISA效价分别为1：1062－1：10^6。7A6攻7D1属于IgG1亚类，7D8和4A4分属IgG2a和IgG2b亚类，P3和6B1属于IgG2亚类。电镜观察单克隆抗体与病毒形成的复合物发现7D1能使病毒粒子发生严重裂断。6株单克隆抗体中P3，4A4、6B1对应于病毒外壳蛋白上的顺序决定簇。纯化的病毒外壳蛋白经酶裂解和改进的盘状电泳分离，得到八段与多克隆抗体反应的收集液。用顺序决定族的单克隆抗体检出P3对应的肽段22和4A4对应的肽段78。本文还讨论了7D1使病毒粒子发生断裂的原因和与病毒粒子表面结构的关系以及分离抗原决定族所在片段的意义。     

长叶车前花叶病毒单克隆抗体的制备及在病毒分型中的应用

应用细胞杂交技术,将长叶车前花叶病毒杭州分离株(RMVha)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)和北京番茄株(TMVbe-t)免疫的Balb/c小鼠脾细胞与Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选测定,成功地获得了5株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株属于IgG_(2b),其余4株均属于IgG_(?),5株细胞株均制备了腹水抗体,ELISA效价最高达256000,琼脂双扩散效价达128,根据与15个不同RMV和TMV毒株的反应特性,可将5株单克隆抗体分为A、B、C三组,分别针对a、b、c三个不同的抗原决定簇。根据三组单克隆抗体反应性的差异,15个毒株可分为8个血清型,本文讨论了所获得的5株杂交瘤细胞在植物病毒的诊断、病毒病原的鉴定及病毒分型方面的应用价值。     

抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的特异性及其识别抗原表位的初步鉴定

为了明确抗SARS-CoVN蛋白单克隆抗体的特异性,并鉴定其识别表位,首先在E.coli中表达了人类冠状病毒229E(HCoV-229E)和OC43(HCoV-OC4)N蛋白,用Westernblotting和间接免疫荧光方法分别检测了4株抗SARS-CoVN蛋白单克隆抗体(1-1C2、1-1D6、2-8F11和2-2E5)与HCoV-OC43和HCoV-229E及其N蛋白的交叉反应情况,而后应用12种重组截短型SARS-CoVN蛋白对上述4种单克隆抗体的识别表位进行了初步定位。结果显示:(1)在4株抗N蛋白单克隆抗体中,1-1C2、1-1D6和2-2E5不与HCoV-OC43和HCoV-229E及其N蛋白发生交叉反应,为SARS-CoVN蛋白特异性抗体;(2)2-8F11、1-1D6和2-2E5针对的抗原表位位于SARS-CoVN蛋白的aa30-60,1-1C2针对的抗原表位则位于SARS-CoVN蛋白的aa170-184。这一研究为阐明SARS-CoVN蛋白的免疫学特征,建立特异性免疫诊断技术和研究其致病机制提供了必要的依据和材料。     

抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的特异性及其识别抗原表位的初步鉴定

为了明确抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的特异性,并鉴定其识别表位,首先在E.coli中表达了人类冠状病毒229E(HCoV-229E)和OC43(HCoV-OC4)N蛋白,用Western blotting和间接免疫荧光方法分别检测了4株抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体(1-1C2、1-1D6、2-8F11和2-2E5)与HCoV-OC43和HCoV-229E及其N蛋白的交叉反应情况,而后应用12种重组截短型SARS-CoV N蛋白对上述4种单克隆抗体的识别表位进行了初步定位.结果显示(1)在4株抗N蛋白单克隆抗体中,1-1C2、1-1D6和2-2E5不与HCoV-OC43和HCoV-229E及其N蛋白发生交叉反应,为SARS-CoV N蛋白特异性抗体;(2)2-8F11、1-1D6和2-2E5针对的抗原表位位于SARS-CoV N蛋白的aa 30-60,1-1C2针对的抗原表位则位于SARS-CoV N蛋白的aa 170-184.这一研究为阐明SARS-CoVN蛋白的免疫学特征,建立特异性免疫诊断技术和研究其致病机制提供了必要的依据和材料.     

利用基因工程表达核心抗原转化的E抗原制备抗HBeAg单克隆抗体

采用两种变性剂将大肠杆菌基因工程高效表达的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)转化成为E抗原(HBeAg),其ELISA滴度达1:1000以上,而核心抗原滴度为零。用此抗原免疫小鼠,一次融合即获十四株抗乙型肝炎病毒E抗原的单克隆抗体。细胞培养上清抗体滴度为1:10-1:1000以上,腹水滴度为1:1000-1:100,000以上。十三株IgG、一株IgM。其中十株为抗HBeAg(b)决定簇,四株抗(a)决定簇。它们的敏感性及特异性与日本用血清E抗原制备的单克隆抗体效果完全一致。这是国内外首次应用基因工程表达核心抗原转化E抗原成功 地建立分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞株。     

长叶车前花叶病毒上海分离株单克隆抗体的制备及其免疫学特性 Ⅲ 病毒抗原决定簇的单克隆抗体识别

前文分别报道了长叶车前花叶病毒上海分离侏(RMVsh)单克隆抗体的制备及根据它们在不同免疫反应中的特性,将它们分为两组,分别识别性质不同的抗原决定簇。本文采用修改的Friguet方法测定了各组内各单克隆抗体之间的增值反应(Additivity Reaction)特性,并分析了它们识别抗原决定簇的特性。村料与方法一、病毒及单克隆抗体长叶车前花叶病毒上海分离株及其单克隆抗体1H2、7H1、10H1、11H2、12H3、17H6、29H1来源、制备和特性见前文报道。二、抗原饱和曲线的测定抗原饱和曲线测定采用间接ELISA办法,抗原浓度为2μg/ml。     

用单克隆抗体研究鸡新城疫病毒抗原变异与流行病学的相关性

用19株抗鸡新城疫病毒(NDV)单克隆抗体(简称单抗)测定与14个NDV国际参考株和16个NDV国内分离株的反应性,将毒株分为a～h 8个群。该组单抗能较精细地测出流行病学上不同的毒株间的抗原变异,毒株分群显示了抗原变异与流行病学特征的相关性。     

利用酵母展示系统确定空间构象性抗原表位的方法研究

酵母展示系统是研究可溶性蛋白间相互作用的有效系统.利用酵母展示系统可以简单快速地研究抗原与抗体相互作用.充分利用此系统的优势,在确定空间构象性的抗原决定簇方面发展出新的应用.利用酵母同源重组把巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)序列中的不同肽段以及不同点突变体展示在酵母表面,并用3个抗MIF单克隆抗体10C3,2A12和4E10分别标记,流式细胞仪检测抗体与抗原突变体的结合.用酵母展示方法确定了MIF上与3个单克隆抗体结合的关键氨基酸序列,从而建立起一个简便可靠的确定空间构象性抗原决定簇的方法.     

原生质体紫外诱变选育竹红菌甲素高产菌株

采用原生质体紫外诱变技术选育竹红菌甲素高产菌株。结果表明:以竹黄菌Shiraia sp.S8为出发菌株,当使用混合酶系(5 mg/mL纤维素酶和10 mg/mL蜗牛酶)在30℃处理菌丝2 h,获得菌丝原生质体3.24×106个/mL。以竹黄菌原生质体在距离15 W紫外灯30 cm处照射诱导,获得诱变菌株C6。其竹红菌甲素产量达到28.1 mg/L,比原始出发菌株提高了53.7%,且遗传稳定,具有较高的医药与工业应用价值。     

Radiation leukemia virus-induced thymic lymphomas express a restricted repertoire of T-cell receptor V beta gene products.

We have investigated the phenotypic changes that take place during the process of neoplastic transformation in the thymocytes of C57BL/Ka mice infected by the radiation leukemia virus (RadLV). By the combined use of antibodies against the envelope glycoprotein gp70 of RadLV, the transformation-associated cell surface marker 1C11, and the CD3-T-cell receptor (TCR) complex, we found that in the RadLV-infected thymus, the earliest expression of viral gp70 is in 1C11hi cells; a small but significant percentage of these cells also express CD3. A first wave of viral replication, manifested by the expression of high levels of gp70 in thymocytes (over 70% positive), reaches a peak at 2 weeks; during this period, no significant changes are observed in the expression of 1C11 or CD3. The population of gp70+ cells is drastically reduced at 3 to 4 weeks after infection. However, a second cohort of gp70+ cells appears after 4 weeks, and these cells express high levels of 1C11 and TCR determinants as well. RadLV-induced lymphomas differ from normal thymocytes in their CD4 CD8 phenotype, with domination by one or more subsets. Characterization of TCR gene rearrangements in RadLV-induced lymphomas shows that most of these tumors are clonal or oligoclonal with respect to the J beta 2 TCR gene, while the J beta 1 TCR gene is rearranged in a minority (4 of 11) of lymphomas. TCR V beta repertoire analysis of 12 tumors reveals that 6 (50%) express exclusively the V beta 6 gene product, 2 (17%) are V beta 5+, and 1 (8%) each are V beta 8+ and V beta 9+. In normal C57BL/Ka mice, V beta 6 is expressed on 12%, V beta 5 is expressed on 9%, V beta 8 is expressed on 22%, and V beta 9 is expressed on 4% of TCRhi thymocytes. Thus, it appears that RadLV-induced thymic lymphomas are not randomly selected with respect to expressed TCR V beta type.     

幼虫密度对马铃薯块茎蛾生长发育及繁殖的影响

室内观察了块茎中不同虫口密度(5、10、15、20、25、30头/块茎)对马铃薯块茎蛾Phthorimaea operculella(Zeller)生长发育、后代发育和繁殖的影响。结果显示:幼虫密度显著影响马铃薯块茎蛾的生长发育及繁殖。对其生长发育影响的结果表明:幼虫的发育历期(7.1～9.1d)、蛹的历期(8.8～9.9d)、雌雄成虫的历期(分别为6.4～12.9d,6.7～11.6d)随幼虫密度的增加而延长;幼虫存活率(70.3%～93.3%)、蛹的羽化率(69.8%～91.7%)随幼虫密度的增加显著下降;单头蛹重(9.2～11.4mg)、单雌产卵量(136.8～166.0粒)、成虫的雌∶雄比(0.54～2.17)随幼虫密度的增加而下降。对其后代发育及繁殖的影响的结果表明:卵的发育历期(3.0～4.4d)、幼虫的发育历期(6.2～10.8d)、蛹的历期(8.1～10.0d)、雌雄成虫的历期(分别为7.4～11.8d,6.6～10.5d)、世代发育历期(24.4～36.1d)随幼虫密度的增加而从延长;卵的孵化率(73.1%～79.0%)、幼虫存活率(55.0%～96.8%)、蛹的羽化率(63.3%～93.3%)、世代的存活率(25.6%～71.5%)随虫口密度的增加而下降;单头蛹重(8.9～9.9mg)、单雌产卵量(93.5～155.6粒)、成虫的雌∶雄比(0.45～2.20)随虫口密度的增加而下降;种群趋势指数(I)(7.44～76.43)随幼虫密度的增加而下降。马铃薯块茎蛾的饲养密度建议以1头/13.0～26.0g块茎为宜。     

Identification of an immunogenic protein of Giardia lamblia using monoclonal antibodies generated from infected mice

The humoral immune response plays an important role in the clearance of Giardia lamblia. However, our knowledge about the specific antigens of G. lamblia that induce a protective immune response is limited. The purpose of this study was to identify and characterise the immunogenic proteins of G. lamblia in a mouse model. We generated monoclonal antibodies (moAbs) specific to G. lamblia (1B10, 2C9.D11, 3C10.E5, 3D10, 5G8.B5, 5F4, 4C7, 3C5 and 3C6) by fusing splenocytes derived from infected mice. Most of these moAbs recognised a band of ± 71 kDa (5G8 protein) and this protein was also recognised by serum from the infected mice. We found that the moAbs recognised conformational epitopes of the 5G8 protein and that this antigen is expressed on the cell surface and inside trophozoites. Additionally, antibodies specific to the 5G8 protein induced strong agglutination (> 70-90%) of trophozoites. We have thus identified a highly immunogenic antigen of G. lamblia that is recognised by the immune system of infected mice. In summary, this study describes the identification and partial characterisation of an immunogenic protein of G. lamblia. Additionally, we generated a panel of moAbs specific for this protein that will be useful for the biochemical and immunological characterisation of this immunologically interesting Giardia molecule.     

骆驼刺发根农杆菌转化系的原生质体培养和植株再生

从发根农杆菌A4转化的荒漠植物—璐驼刺毛状根愈伤组织中分离的原生质体培养的结果表明,酶解新转代7～10d的淡黄色松软愈伤组织,可获得大量有活力的原生质体。原生质体在附加有1．5mg．L-1 2,4．D、0．2mg．L-1 6．BA、0．3m01．L-1甘露醇、2％（W/V）蔗糖和500mg·L-1水解酪蛋白的DPD培养基中进行液体浅层培养可持续分裂。培养基的最适渗透压为（450±3）mOsm·kg-1,原生质体的最适植板密度为4×10^5个．mL-1。制备原生质体的愈伤组织以低温（4℃）预处理后,原生质体的产率和分裂频率均提高,分裂频率最高可达50％。原生质体分裂形成的愈伤组织转移在附加1-2mg．L-1 6-BA（或KT）和0．2mg·L-1NAA的MS培养基上培养后,可以分化并获得再生植株。纸电泳检测表明,原生质体再生的愈伤组织和分化植株仍然含有毛状根转化系的特异产物——冠瘿碱。     

150例酵母样真菌的菌种分布及其耐药性分析

目的分析引起医院酵母样真菌感染的菌种分布及其耐药性,以指导临床合理用药。方法对2007年10月-2008年10月的住院患者送至真菌室所分离的150株酵母样真菌,采用血清学鉴定及API 20C AUX酵母样真菌鉴定试剂条进行鉴定,采用ATB FUNGUS3进行药敏试验。结果分离到150株酵母样真菌,其中自假丝酵母菌94株（62．67％）,光滑假丝酵母菌14株（9．33％）,热带假丝酵母菌12株（8．00％）,无名假丝酵母菌10株（6．67％）,季也蒙假丝酵母菌6株（4．00％）,近平滑假丝酵母菌6株（4．00％）,其他酵母菌8株（5．33％）。以呼吸内科（54．67％）、老年科（9．33％）、皮肤性病科（9．33％）、血液科（8．67％）分离率最高。150株酵母菌对5氟胞嘧啶（5-FC）、两性霉素B（AmB）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）、伏立康唑（VRC）的敏感菌株分别为144、150、131、104、147株,敏感率分别为96．00％、100％、87．33％、69．33％、98．00％。结论真菌感染的因素有很多,临床分布科室广泛,临床上应重视真菌检测及真菌药敏试验,根据检测结果合理应用抗真菌药物。     

桑黄液体发酵工艺的研究

通过对桑黄液体发酵培养基、培养条件优化实验研究,以获得具有与桑黄子实体相似功效成分的桑黄菌丝体液体发酵工艺。以菌丝体收率为主要考察指标,采用单因子及L9(34)正交实验的方法,对桑黄液体发酵培养基及培养条件进行优化,确定桑黄液体发酵工艺条件。桑黄液体发酵最佳培养基及培养条件:玉米粉2%,葡萄糖3%,酵母膏0.5%,蛋白胨0.5%,KH2PO40.3%,Mg SO4·7H2O 0.15%,VB120μg/100 m L,p H5.5,接种量8%,培养温度28℃,摇床转数180 r/min,培养周期82 h。优化条件下所获得桑黄菌丝体粉为土黄色,菌丝体平均得率为1.67%,菌丝体黄酮含量(0.84%)与桑黄子实体(0.88%)相当,菌丝体多糖含量(5.15%)是子实体(1.71%)的3倍。可见,该桑黄液体发酵工艺具有较大的推广应用价值。     

中国人参花化学成分研究

目的:对人参(Panax ginseng C.A.Mey.)花蕾的化学成分进行研究。方法:采用多种柱色谱技术进行分离纯化,并通过波谱分析方法鉴定化合物的结构。结果:分离鉴定了9个化合物,分别鉴定为咖啡碱(1)、胡萝卜苷(2)、豆甾醇3-O-葡萄糖苷(3)、α-菠甾醇(4)、7-豆甾烯-3β-醇(5)、人参皂苷Rk3(6)、人参皂苷Re(7)、人参皂苷Rg2(8)、谷甾醇(9)结论:其中化合物1为五加科植物中首次分离得到,化合物3、4、5为人参花中首次分离得到。     

草果果实中的酚性成分

从草果（Amomum tsao-ko）果实的甲醇提取物中分离得到了9个酚性化合物,其中一个为新的糖基被酰化的酚性配糖体。用1D,2D NMR和MS等现代波谱学方法鉴定为2-甲氧基-1,4-二苯酚-1—0-[6-O-（3-甲氧基-4-羟基苯甲酰基）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）。8个已知化合物分别为3’,5＇-二-C-β-D-吡喃葡萄糖基根皮素（2）、芦丁（3）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、邻苯三酚（5）、邻苯二酚（6）、对羟基苯甲酸（7）、原儿茶酸（8）和香草酸（9）。化合物2,3,5,7—9均为首次从草果果实中分离得到。     

响应面法优化有机溶剂极端耐受性菌株Burkholderia sp．ZYB002产脂肪酶条件

Burkholderia sp．脂肪酶具有较高的有机溶剂耐受性和转酯活性,广泛应用于手性化合物的拆分。本研究利用统计学方法对一株具有有机溶剂极端耐受性的脂肪酶高产茵株Burkholderia sp．ZYB002在摇瓶培养条件下产脂肪酶条件进行了优化。通过单因素实验,首先确定了最适碳源、氮源、诱导荆等。以Plackett—Burrman设计筛选影响Burkholderia sp．ZYB002产酶的主要因素,通过最陡爬坡实验和响应面分析法确定产酶最适条件。K2HP04、大豆油乳化液和起始RH确定为影响菌株产酶的3个主效因素。最佳产酶条件为：糊精0．3％（W／V）,牛肉膏2．0％（W／V）,MgSO4．7H2O．075％（W／V）,K2HPO4 0．14％（W／V）,大豆油乳化液4．89％（V／V）,pH8．11,玻璃珠10颗／瓶,接种量2．0％（V／V）,30℃,250r／min,发酵时间22h。在此条件下,发酵液脂肪酶酶活最高达45．6U／mL,较发酵基本培养基发酵液的脂肪酶酶活提高了3．44倍。