不同动物制备的抗血清对病毒抗原免疫反应的差异

血清学技术是病毒诊断、鉴定、分类及亲缘关系分析的重要手段。一般常用以制备抗病毒血清的动物是家兔,但也有采用其它动物的,如蛙、羊、豚鼠、鸡及小鼠等。本文比较了Balb/c小鼠、昆明种小鼠和新西兰大白兔对长叶车前花叶病毒上海分离株(RMVsh)和烟草花叶病毒普通株(TMVc)的免疫反应特征。     

单克隆抗体亲和层析纯化长叶车前花叶病毒

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)单克隆抗体1H2,经纯化后以溴化氰活化法偶联于Sepharose 4B上制成亲和层析柱。HRVsh感染的三生烟提取液,经一次聚乙二醇沉淀初步纯化,悬浮液上亲和层析柱,于磷酸缓冲液中吸附,蒸馏水洗脱。收集的病毒制剂接种心叶烟有感染性,电镜观察见典型的HRVsh粒子,紫外吸收光谱与常规方法提纯的病毒相似,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带。结果表明单克隆抗体亲和层忻得到高度纯化的HRVsh。最后讨论了单克隆抗体亲和层析方法的优点。     

长叶车前花叶病毒上海分离株单克隆抗体的制备及其免疫学特性 Ⅲ 病毒抗原决定簇的单克隆抗体识别

前文分别报道了长叶车前花叶病毒上海分离侏(RMVsh)单克隆抗体的制备及根据它们在不同免疫反应中的特性,将它们分为两组,分别识别性质不同的抗原决定簇。本文采用修改的Friguet方法测定了各组内各单克隆抗体之间的增值反应(Additivity Reaction)特性,并分析了它们识别抗原决定簇的特性。村料与方法一、病毒及单克隆抗体长叶车前花叶病毒上海分离株及其单克隆抗体1H2、7H1、10H1、11H2、12H3、17H6、29H1来源、制备和特性见前文报道。二、抗原饱和曲线的测定抗原饱和曲线测定采用间接ELISA办法,抗原浓度为2μg/ml。     

长叶车前花叶病毒上海分离株单克隆抗体的制备及其免疫学特性——Ⅰ单克隆抗体制备、亚类测定及免疫沉淀反应

采用杂交瘤技术,以长叶车前花叶病毒上海分离株(RMVsh)为扎原免疫BALB/c小鼠,取脾脏细胞与骨髓瘤SP2/O细胞融合,经筛选克隆,共获得1H2、7H1、10H1、11H2、12H3、17H6、29H17株分泌RMVsh单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以双抗夹心ELISA方法测定亚类;1H2属IgG_3,7H1属IgG_(2b),其余均为IgC_1。7个杂交瘤植入鼠体内均产生腹水。在免疫双扩散反应中1H2、12H3能与RMVsh产生免疫沉淀线,而其余5个单克隆抗体均不能与RMVsh产生沉淀线。制备的单克隆抗体可用于病毒病害的诊断鉴定,也可用于进一步分析病毒的抗原特性。     

长叶车前花叶病毒上海分离株单克隆抗体的制备及其免疫学特性——Ⅱ单克隆抗体免疫反应方法及在株系鉴别上的应用

采用两种不同的ELISA方法比较了长叶车前花叶病毒上海分离株(RMVsh)7种单克隆抗体对完整病毒及其外壳蛋白的反应。结果表明不同的单克隆抗体在两种ELISA方法中的反应特性各异。这可能由于ELISA方法对抗原结构的影响而导致抗原抗体结合的不同。比较烟草花叶病毒群的7个分离株对RMVsh单克隆抗体和兔多克隆抗体的反应。结果表明单克隆抗体能与属于RMV的3个分离株起反应,并能将它们区分开来,与属于TMV的4个分离株均无反应。而兔多克隆抗体与这7个分离株均有较强的反应,但难以区分各株系。表明单克隆抗体在株系鉴别上具有高度的特异性。     

水稻等作物组份I蛋白大小亚基的等电聚焦分析

组份I蛋白广泛存在于植物界,分子量ft 为55万道尔顿［[10a。该蛋白具有核酮搪-1,,一二 磷酸毅化酶／加氧酶的活性,是光合作用以及 光呼吸作用中重要的酶类〔3,。它由8个大亚基 （分子量为55,000）和s个小亚基（分子量戈 15,000）构成。大亚基由叶绿体DNA编码,并在 叶绿体内合成;而小亚基则由核DNA编码,并 在细胞质中合成［[7]。组份I蛋白经接甲基化后, 在育材,一尿素中进行等电二聚焦电泳,大亚基可分 出3条电泳带,而小亚基可分出1--4条电泳带, 电泳带的位置因品种不同而异。因此,被用作 核基因和细胞质基因的表型标记闭,是研究进 化、遗传、核质关系以及体细胞杂交等方面十分 有用的指标山。     

单克隆抗体对小苍兰褪绿条纹花叶病毒及其决定簇的作用特性

采用杂交瘤技术，得到抗小苍兰褪绿色条纹花叶病毒（FCSMV）六个单克隆抗体P3、4A4，6B、，7A6，7D1和7DS。ELISA效价分别为1：1062－1：10^6。7A6攻7D1属于IgG1亚类，7D8和4A4分属IgG2a和IgG2b亚类，P3和6B1属于IgG2亚类。电镜观察单克隆抗体与病毒形成的复合物发现7D1能使病毒粒子发生严重裂断。6株单克隆抗体中P3，4A4、6B1对应于病毒外壳蛋白上的顺序决定簇。纯化的病毒外壳蛋白经酶裂解和改进的盘状电泳分离，得到八段与多克隆抗体反应的收集液。用顺序决定族的单克隆抗体检出P3对应的肽段22和4A4对应的肽段78。本文还讨论了7D1使病毒粒子发生断裂的原因和与病毒粒子表面结构的关系以及分离抗原决定族所在片段的意义。