中等纤维在几种人体上皮细胞有丝分裂过程中的行为

本文用间接免疫荧光法和电镜术观察了分别来自人表皮(PcaSE-1)、复层上皮(CNE)和单层上皮(SPC-A-1)的3个上皮细胞系的细胞在有丝分裂过程中中等纤维的行为。结果表明,CNE细胞和SPC-A-1细胞表达两种不同类型的中等纤维系统:角蛋白纤维和波形纤维,而PcaSE-1细胞仅表达角蛋白纤维。当细胞进入有丝分裂时,PcaSE-1细胞的角蛋白纤维维持完整的形态且将有丝分裂纺锤体围绕在细胞中央。相反,在CNE细胞和SPC-A-1细胞中,在细胞有丝分裂时,角蛋白纤维解聚成无定形的胞质小体,然而它们的波形纤维始终保持完整的形态。我们认为(1)在分裂上皮细胞中,角蛋白纤维的解聚与细胞的恶性程度有关,而与间期上皮细胞中是否含有丰富的角蛋白纤维无明显关系。(2)在上皮细胞有丝分裂时,中等纤维可能参于纺锤体的定位和趋中。(3)在分裂CNE细胞中,波形纤维的可能功能是染色体的定位和定向。     

人体肝癌细胞和HeLa细胞中等纤维的比较研究

本文用兔抗角蛋白抗体、豚鼠抗波形纤维蛋白抗体和抗角蛋白单抗AE1的间接免疫荧光抗体法比较了两个人体肝癌细胞系(BEL-7402和BEL-7404)和HeLa细胞中等纤维的分布式样,同时用SDS-PAGE法分析了上述细胞的中等纤维抽提物的多肽组成。结果表明:三种上皮细胞均含有两套不同类型的中等纤维系统:角蛋白纤维和波形纤维。但是,人体肝癌细胞和HeLa细胞的中等纤维分布式样和角蛋白多肽组成均有明显的差别。其中最明显的差别是HeLa细胞具有丰富的桥粒-张力纤维复合物和分子量为40 kd的角蛋白多肽,而在两个人体肝癌细胞系中看不到。     

一种抗不同类型中等纤维的混合型兔自发抗体

本文报道了存在于未免疫家兔血清中的一种自发抗体(SRI)。使用间接免疫荧光法,这种自发抗体能在鸡肌原纤维上染出-线和Z-盘,在CHO细胞和HeLa细胞中能染出不同排列式样的胞质纤维结构。在秋水仙素处理的CHO细胞中,SRI血清仅能染出具有典型凝聚式样的波形纤维。而在秋水仙素处理的:HeLa细胞中,SRI血清同时能染出对秋水仙素不敏感的前角质蛋白纤维和对该药敏感的波形纤维。细胞松弛素B处理和Trito X-100抽提对:HeLa细胞的纤维染色无影响。根据所染纤维的特征,我们认为SRI自体免疫抗血清是一个至少含有抗前角质蛋白抗体和抗波形纤维蛋白抗体的混合抗体。     

鸡新城疫病毒介导的细胞融合

鉴于鸡新城疫病毒(NDV)对人体无致病力、来源方便等优点,本文应用其强毒株NC_(48)CE_8和弱毒株HB_1介导融合体外培养的哺乳类细胞,包括:人体肝癌BEL-7402和BEL-7404系细胞、人宫颈癌Hela 细胞、人羊膜FL 细胞以及小鼠A9/28 DKS 系细胞。在本实验的最适条件下,NC_(48)CE_8株与HB_1株介导BDL-7404系细胞的融合率分别高达86.9%和60.7%。NDV 介导的细胞融合率与其稀释度及细胞的种系密切有关。借显微缩时电影术示范了BEL-7404系细胞在NC_(48)CE_8株与HB_1株介导下的融合过程。亚显微结构的分析,示明BEL-7404系细胞的表面,特别是在细胞紧密邻接的区域存在着大量的微绒毛。文内对此及融合所需的实验条件作了讨论。     

上皮细胞分裂过程中中等纤维的变化

应用制备的血清抗体,采用免疫细胞化学方法观察了两株培养上皮细胞的分裂过程中IF的动态变化过程。实验结果显示,在上皮细胞分裂过程中,IF形态结构及空间分布发生了显著变化,不同细胞之间存在差异,分裂的Vero细胞中角蛋白纤维和波形纤维都维持纤维形态,围绕分裂器形成纤维网罩或纤维束环,随着细胞分裂的进行,IF网的空间组织结构和外观发生动态变化;分裂的HeLa细胞中,角蛋白纤维和波形纤维广泛重组形成颗粒状胞质小体,分裂结束后重建IF网。实验结果表明,IF变化具有细胞周期依赖性和一定的细胞特异性。本文对IF在细胞分裂过程中的功能意义作了讨论。     

EGFR反义脱氧寡核苷酸及其硫代修饰片段抑制人肝癌细胞系BEL-7404细胞生长

本文旨在研究针对EGFR mRNA的反义寡核苷酸片段对BEL-7404细胞EGFR基因表达及其对细胞生长的影响。合成了互补于EGFR基因5′起始编码区的21聚脱氧寡核苷酸(ODNs)。实验结果显示,3.2μmol/L ODNs明显抑制BEL-7404细胞生长,[~3H]TdR掺入抑制试验显示其对细胞DNA合成的抑制作用表现剂量依赖性;密度扫描分析显示ODNs处理6、24h后,肝癌细胞EGFR mRNA分别下降10.5%和14.3%,ODNs处理4天后,细胞EGFR含量下降37.4%,同时观察了同一长度、针对同一靶基因区域的硫代磷酸型反义寡核苷酸对BEL-7404细胞的作用,表明3.2μmol/L ODNs在作用30h内,细胞DNA合成抑制率达62.1%,但此后渐下降,而SODNs在作用96h后达相应的抑制率(此后作用仍持续),提示S-ODNs在体外培养体系中有较好的稳定性。结果表明,针对EGFR基因的反义脱氧寡核苷酸片段可通过部分封闭EGFR基因表达而抑制BEL-7404细胞的生长,而硫代修饰型比未修饰型反义核酸片段具有更好的稳定性。     

转录抑制因子GCF2促进肝癌细胞BEL-7404迁移相关靶基因的初步鉴定

GCF2是转录抑制因子,为了研究GCF2蛋白在肝癌细胞BEL-7404迁移中的作用,并根据芯片结果验证GCF2调控参与迁移的靶基因,我们采用siR NA沉默GCF2蛋白表达,然后通过transwell实验检测GCF2沉默前后BEL-7404细胞迁移的变化,最后荧光定量RT-PCR和Western blot验证芯片结果中与迁移相关基因的表达。研究结果显示siR NA干扰GCF2成功后进行迁移实验,si RNA-GCF2组,FAM-siR NA-NC组,脂质体组,和未处理野生型BEL-7404组24 h后细胞穿过8滋m微孔滤膜的数目(x±s)分别为41.66±1.52、41.66±1.15、41.33±1.5、18.66±0.577,差异均有统计学意义(p约0.01)。QRT-PCR验证9个候选基因中,MyD 88在si RNA-GCF2组内表达显著高于其余三组(p约0.05)。Western blot检测siR NA干扰GCF2后肝癌细胞BEL-7404的MyD 88的蛋白表达显著高于其余三组(p约0.05)。结果表明si RNA沉默转录因子GCF2蛋白表达可抑制肿瘤细胞BEL-7404迁移,推测GCF2作为转录因子可能通过抑制靶基因MyD 88的表达参与细胞的迁移。     

Leukamenin E诱导人宫颈癌HeLa细胞胞质骨架重排和迁移抑制的研究

为了探索对映-贝壳杉烷二萜leukamenin E对细胞骨架和细胞迁移的影响,该文采用MTT法、吉姆萨染色、流式细胞术及免疫荧光技术研究了leukamenin E诱导HeLa细胞的3种胞质骨架重排,细胞迁移抑制及可能的作用机制。结果显示,0.4～1.0μmol/L的leukamenin E可导致G_1期阻滞,抑制细胞增殖,使细胞形态及核形态发生显著变化,细胞伪足减少以及"肾形核"细胞数量增多,并抑制细胞迁移;Leukamenin E可显著改变HeLa细胞微管和角蛋白纤维的排布,诱导微管和角蛋白纤维在核周聚集,但减少胞质中应力纤维数量。Leukamenin E显著升高HeLa细胞内活性氧(ROS)水平,但加入活性氧清除剂NAC可明显减弱leukamenin E诱导的细胞形态改变、细胞骨架重排以及细胞迁移的抑制作用,表明活性氧途径与上述变化相关联。上述结果说明,leukamenin E通过ROS水平升高调节相关信号途径,导致HeLa细胞骨架重排而引起细胞及细胞核形态改变,同时导致了细胞的迁移的抑制效应。     

骆驼蓬种子中一种具抗肿瘤活性蛋白的分离纯化及鉴定

骆驼蓬种子经浸提、硫酸铵沉淀、CM阳离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析分离纯化得到一种具有抗肿瘤细胞增殖活性的蛋白(命名为PhLTP),经Tricine-SDS-PAGE检测为单一蛋白条带,高效液相色谱检测其表观分子量为14.8 kDa左右,表明PhLTP是由两条相同的亚基组成的蛋白.采用Edman降解法对该纯化蛋白的N-末端进行氨基酸测序,其N-末端序列与其他植物非特异性脂转移蛋白相似.对PhLTP抗肿瘤活性进行研究,结果表明其对HeLa、Eca-109、MGC-9和BEL-7404细胞都有增殖抑制活性,其中对HeLa细胞增殖的抑制作用较好,并具有浓度和时间依赖性,其IC50为45 μg/mL.通过Hoechst33258染色观察细胞形态,发现PhLTP能诱导HeLa细胞发生凋亡.     

人体原发性肝癌细胞相关胚胎抗原的原位观察

以前我们曾用免疫荧光技术和铁蛋白标记抗体的免疫电镜方法,证明离体培养的3株人体肝癌细胞(BEL-7402,BEL-7404,BEL-7405)表面存在着与胚胎肝细胞表面有交叉免疫反应的膜抗原。然而,近年来不断发现在离体培养条件下,人体黑色素瘤细胞和胚胎细胞,大鼠肉     

注射装载孕酮的红细胞膜泡诱发蟾蜍卵成熟的研究

中华大蟾蜍长足的卵母细胞,经注入装载水相孕酮的红细胞膜泡,能被诱发成熟;直接注入水相孕酮的卵母细胞,无能恢复成熟分裂。将蛋白酶处理的红细胞制备成装载水相孕酮的膜泡,注入卵内,照样能诱发其成熟分裂;然而,分别用根皮素结合或磷脂酶A_2水解红细胞膜磷脂,制备的膜泡,虽亦包裹着水相孕酮,但注射的卵母细胞都未能被诱发成熟。这些结果表明,在通过红细胞膜转运孕酮诱发卵母细胞成熟过程中,红细胞膜上的某些膜蛋白可能不是必要的成份,而膜磷脂类却是关键成份,它不仅可能保证孕酮不被迅速代谢,且保证孕酮从卵母细胞内部诱发成熟分裂。     

金鱼精子质膜和核膜的区域特异性

本文结合采用扫描和透射电子显微镜(包括冷冻断裂-蚀刻、超薄切片以及细胞化学染色法),研究了金鱼精子的超微结构特征,结果表明金鱼精子的质膜和核膜都具有区域特异性:1)精子质膜内大部分区域含有许多蛋白颗粒,但在特定区域内,蛋白颗粒呈有序排列,构成晶格状结构。2)精子头颈部和尾部均有液泡密集之处,凡是覆盖着液泡区的质膜内,几乎都不含有蛋白颗粒。3)液泡区能被细胞化学方法染成致密色,表明内含糖蛋白。4)核膜孔只集中存在于靠近颈部的核膜上,而其他部分则没有。本文对上述诸点进行了讨论。     

多种神经活性物质在幼年猫和鸡视网膜神经细胞中的共存(简报)

视网膜起源于前脑泡,结构简单层次分明,因此常被视为脑的简化模型。但近期工作证明,视网膜包含的神经活性物质(神经递质、调质和神经肽)种类之多、分布之复杂并不亚于脑。尤其是无长突细胞不仅包含多种递质和肽类,而且还有递质与肽类或肽类与肽类在一个细胞中的共存。对视网膜神经递质、调质和神经肽的研究将是探索脑奥秘的有效途径。     

血管内皮生长因子蛋白在大鼠睾丸和附睾的表达和定位研究

为探讨血管内皮生长因子(VEGF)在雄性生殖系精子发生发育和成熟过程中的调控作用,应用免疫组化、Periodic acid-Schiff(PAS)染色及蛋白质免疫印迹技术,检测VEGF蛋白在成年大鼠睾丸和附睾的表达和定位情况。Western-blots显示,在大鼠睾丸和附睾内均有VEGF蛋白(约45kD)的表达;免疫组化显示,睾丸内VEGF见于圆形和长形精子细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞,免疫阳性产物位于细胞质内。精子细胞的VEGF表达伴随精子细胞顶体发育的全过程,精子残余体呈强阳性。附睾内VEGF表达于附睾管上皮,且有区域和细胞特异性。附睾起始段的所有上皮主细胞内都有VEGF阳性颗粒;头、体、尾各段的VEGF阳性细胞多数与含PAS阳性颗粒的细胞重合,证明为亮细胞;近端附睾的管腔内可见精子头部呈VEGF阳性染色。睾丸、附睾间质血管内皮为VEGF阴性。上述结果表明,VEGF蛋白可由生殖细胞和附睾管上皮细胞直接产生,它可能以自分泌和/或旁分泌的形式共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞和血管内皮,直接或间接影响精子的发生、发育和成熟过程,特别是精子顶体的形成过程,并可能与精子在附睾内的成熟有关。     

低分子量神经丝蛋白(NF-L)的体外组装

利用超速离心和离子交换层析技术,从牛脊髓中分离纯化了神经丝蛋白三组分:NF-L,NF-M和NF-H。应用电镜负染色和金属投影方法研究神经丝的形态结构与NF-L的体外组装,结果表明:神经丝由10nm的核心纤维与外周的丝状突起组成;在近似生理条件下,NF-L可在60min内组装成10nm纤维,纤维由4根亚丝缠绕而成;在碱性缓冲液中,NaCl能促进NF-L装配成短纤维,这种10nm的短纤维无法连接成长纤维。     

花背蟾蜍蝌蚪发生类坏死的皮肤在恢复过程中的超微结构

本实验以花背蟾蜍后肢芽期的蝌蚪为材料,用0.001 mol/L氨水(氨水组)和0.01mol/L醋酸(醋酸组)处理皮肤使之发生类坏死。以细胞核、细胞表面、细胞质及细胞间隙等的超微结构变化为指标,研究了各组皮肤发生类坏死后恢复过程中的可逆变化。结果观察到:两组均能引起核染色质浓缩,粘液分泌,液泡增多,线粒体及内质网膨大变形,细胞间隙变窄;醋酸还引起张力原纤维的凝集及紊乱等。恢复过程中,细胞核内染色质的分布趋于均匀,粘液的分泌渐正常,液泡减少,线粒体及内质网的形态逐步恢复,但细胞间隙一直很??窄;醋酸组中张力原纤维恢复成束且排列较整齐。作者认为氨水及醋酸引起蝌蚪皮肤发生类坏死后,在一定时间内是可以恢复的,而且此可逆变化也反映在超微结构的变化上。     

Chlorophyll isolation,structure and function: major landmarks of the early history of research in the Russian Empire and the Soviet Union

This paper covers major events of the early history of chlorophyll research in the Russian Empire and the Soviet Union from 1771 until 1952, when the modern period of studies on photosynthesis began in full swing. Short biographical sketches of key scientists, reviews of their major research contributions and some selected photographs are included. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

磁场对丘脑下部一氧化氮含量的影响及与丘脑下部神经内分泌核团的关系

应用硝酸还原酶反应—分光光度法测定和NADPH-d组织化学技术,对磁场处理后丘脑下部一氧化氮量的变化及其可能的原因进行了研究,发现磁场可促使丘脑下部一氧化氮量(OD值)显著升高,并具有显著滞后效应。NADPH-d阳性神经细胞及NADPH-d和血管加压素(AVP)双染阳性神经细胞集中分布在丘脑下部室旁核、室周核和视上核,但不存在 于视交叉上核,提示室旁核、室周核和视上核一氧化氮能神经细胞是丘脑下部的一氧化氮的主要来源。磁场处理后大鼠丘脑下部一氧化氮含量(OD值)较正常对照组显著升高应归因于这些神经细胞受磁场作用表达增强。一氧化氮和血管加压素的共存可能对磁场调节内分泌具有一定意义。     

荧光脂质体导入黄瓜悬浮细胞原生质体的研究

用“脱水再加水法”制成包裹荧光黄的脂质体,通过PEG诱导融合或保温共培养法,成功地将脂质体导入了黄瓜悬浮细胞原生质体。PEG处理组摄入脂质体的细胞可达80—90%,其中50—60%的细胞荧光较强,均匀一致。脂质体/原生质体保温共培养半小时,荧光细胞达95%以上,荧光较弱,在细胞中呈点状分布,3—4天后脂质体逐渐破裂,点状荧光变为均匀一致的荧光。导入荧光黄脂质体的原生质体经持续分裂形成愈伤组织和胚状体,进一步分化出芽和根。     

重组人pLXSN-CD80逆转录病毒载体的构建及在CHO和PA317细胞中的表达

CD80是表达于抗原提呈细胞表面的分化抗原,它提供T细胞活化的协同刺激信号,并在抗肿瘤免疫应答中起着重要作用。我们在克隆了CD80全长。cDNA的基础上,将其与逆转录病毒pLXSN表达载体连接,构建成表达质粒,并用磷酸钙沉淀法将其转染PA317和CHO细胞,经G_(418)筛选获得抗G_(418)的PA317和CHO细胞克隆。以RIA,FACs和Westernblot检测CD80分子在PA317和CHO细胞上的表达、分布和分子量,结果显示,pLXSN-CD80转染的CHO细胞可表达较高丰度的CD80分子,其表观分子量为40kD。pLXSN-CD80转染的PA317和CHO细胞经5个月连续传代培养,无论存在G_(418)的选择压力与否,仍然持续表达CD80分子,表明我们构建的pLXSN-CD80表达载体具有应用于试验性治疗的潜能。