油酸对培养血管内皮细胞的直接损伤作用

本研究发现:油酸可引起内皮细胞特征性形态变化;内皮细胞与血小板粘附性增强;内皮细胞~(51)Cr释放率、细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度升高,表明油酸引起细胞通透性升高;培养上清液中6-酮-PGF_(1a)含量升高,提示细胞代谢功能的改变。在一定范围内,上述改变与油酸浓度、作用时间有密切关系。结果还表明,油酸对培养血管内皮细胞有直接损伤作用,推测油酸对内皮细胞的直接损伤,在急性肺损伤早期内皮细胞损伤发病机制中占有重要的地位。     

ANG-Ⅱ、ANP对培养的人血管内皮细胞bFGF表达的影响

目的　了解血管紧张素 Ⅱ (Ang Ⅱ ) ,心钠素 (ANP)对人内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)表达的影响。方法　采用培养的人脐静脉内皮细胞 ,将Ang Ⅱ和ANP分别加入培养液内 ,通过免疫组织化学方法 ,原位杂交技术 ,结合图像分析法 ,测定各组内皮细胞bFGF蛋白及mRNA的表达变化。结果　Ang Ⅱ (10 8mol/L)对内皮细胞bFGF表达有明显促进作用 ,蛋白合成比对照组增加 5 9 3% (P <0 0 1) ;ANP (10 -7mol/L)对培养的内皮细胞bFGF表达有明显抑制作用 ,蛋白合成可减少 71 3% ;二者同时加入 ,蛋白合成比正常对照组减少 32 8% (P <0 0 1) ,各组间比较 ,差异具有统计学显著性意义 (P <0 0 1)。内皮细胞bFGFmRNA的变化与蛋白合成的改变基本相似。结论　ANP能拮抗AngⅡ对培养的人内皮细胞bFGF表达的促进作用 ,其作用可能是通过减少mRNA。     

NO供体（SIN—1）损伤内皮细胞的实验研究

选择体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)为研究对象,研究了不同浓度NO供体 SIN-1(3-morpholinosydnonimine)对内皮细胞的作用以及SOD、CAT对内皮细胞的保护作用。结果提示:高浓度SIN-1可严重损伤内皮细胞;SOD、CAT能协同减轻NO对内皮细胞的损伤,说明ONOO~-的产生可能是NO损伤内皮细胞的重要机制。     

高密度脂蛋白促进内皮衍生的一氧化氮抑制血小板聚集的作用

用培养的小牛主动脉内皮细胞与兔水洗血小板直接相互作用的模型 ,探讨高密度脂蛋白对内皮衍生的一氧化氮抗血小板聚集作用的影响。培养的小牛主动脉内皮细胞预先用 10 0 μmol/L阿斯匹林处理 ,抑制细胞内的环氧化物酶活性。凝血酶 ( 0 1U/ml)可诱导兔血小板 ( 2× 10 8/ml) 67 3 3± 7 5 2 %的聚集反应。内皮细胞 ( 1× 10 5～ 1× 10 6 /ml)能抑制凝血酶诱导的血小板聚集 ,抑制强度与内皮细胞的数目正相关。且此作用可被 1mmol/L硝基精氨酸完全取消。表明内皮细胞对凝血酶诱导血小板聚集的抑制作用都是由内皮衍生的一氧化氮所致。在加凝血酶之前加入高密度脂蛋白 ( 1mg/ml)可增强内皮细胞 ( 1× 10 5/ml)的这种作用。高密度脂蛋白 ( 1mg/ml)与内皮细胞共同孵育 1h后 ,将高密度脂蛋白离心弃去 ,内皮细胞对凝血酶诱导血小板聚集的抑制作用不受影响。高密度脂蛋白及内皮细胞对静息血小板均无直接作用。结果表明 ,高密度脂蛋白增强内皮细胞抗凝血酶诱导的血小板聚集反应的作用是通过直接作用于内皮衍生的一氧化氮而产生的     

普伐他汀对溶血磷脂酰胆碱所致血管内皮功能损伤的保护作用及机制探讨

目的:探讨不同剂量的普伐他汀对溶血磷脂酰胆碱(LPC)所致血管内皮功能的影响.方法:用离体血管环和培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为实验模型,以血管内皮依赖性舒张反应(EDR)、内皮细胞活力以及生化参数为指标,用LPC作为损伤因子,用普伐他汀作为保护药,观察LPC对内皮的损伤作用及普伐他汀的保护作用.结果:LPC与血管环共孵或内皮细胞显著性地抑制了血管EDR反应,增加了血管MDA含量,并导致培养的内皮细胞的活力、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性及一氧化氮(NO)含量显著性降低;普伐他汀与血管环或内皮细胞共孵,浓度依赖性地减轻了LPC对血管EDR的抑制作用(P＜0.05),保护了内皮细胞的活力(P＜0.05).恢复了细胞eNOS活性及NO含量(P＜0.05),抑制了内皮细胞活性氧(ROS)的生成(P＜0.05).结论:LPC能直接损伤的血管内皮细胞,普伐他汀对LPC所致的血管内皮细胞损伤有显著性保护作用,其机制可能与LPC触发脂质过氧化反应,从而抑制血管内皮血管内皮细胞NO的合成有关,普伐他汀通过抗氧化而保护血管内皮细胞的功能.     

中药M对兔内皮细胞增殖影响的初步研究

目的　旨在探讨中药M对兔内皮细胞增殖的影响 ,试图阐明单味中草药品种M的活性成分促进血管生成的生物学机制。方法　建立兔胸主动脉内皮细胞体外培养模型 ,制备不同浓度的兔中药血清加入 96孔内皮细胞培养板 ,以MTT比色法测定内皮细胞增殖情况。结果　生脉素能够促进内皮细胞的增殖 (P <0 0 5 )。结论　中药M可能通过促进内皮细胞的增殖和分裂而达到其促进血管生成的作用     

肺微血管内皮细胞的原代培养

目的:建立简单高效获取大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)的培养方法.方法:(1)组织块贴壁法培养大鼠PMVECs;(2)光镜下观察细胞的形态;(3)扫描电镜和透射电镜分别观察细胞表面及内部的结构特征;(4)免疫荧光法鉴定PMVECs.结果:(1)获得的PMVECs长满后呈典型的铺路石或鹅卵石状;(2)扫描电镜下可见内皮细胞表面存在微绒毛等特殊结构;(3)透射电镜观察可见细胞浆内存在韦伯潘力氏小体(Webel Palade body,WPB);(4)免疫组化结果显示细胞浆中有Ⅷ因子相关抗原存在.结论:改良的组织块法培养肺微血管内皮细胞是一种简单、快捷,有效的方法.     

γ分泌酶抑制剂对肝血窦内皮细胞的影响

目的:在建立高纯度小鼠肝血窦内皮细胞的体外培养的基础上研究γ分泌酶抑制剂(DAPT)对肝血窦内皮细胞活性的影响.方法:首先通过胶原酶灌注消化、percoll梯度离心和选择性贴壁分离得到高纯度、可在体外条件下培养的肝血窦内皮细胞,其次用不同浓度的DAPT(15 μmol/L、45 μmol/L、75 μmol/L)处理细胞,然后通过MTT检测细胞增殖情况、Real time PCR检测相关分子改变.结果:在体外条件下DAPT对肝血窦内皮细胞的增殖起到促进作用,这种促进作用随着DAPT浓度的增加相应的增加;DAPT能够导致肝血窦内皮细胞Notch信号下游分子Hes1表达下调,VEGF信号中VEGFR1表达下调,VEGFR2表达上调.结论:γ分泌酶抑制剂(DAPT)通过抑制肝血窦内皮细胞Notch信号,引起肝血窦内皮细胞表面VEGFR1表达下调,VEGFR2 表达上调显著增加肝血窦内皮细胞的活性.     

氰酸盐诱导人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤

该研究探讨尿素水解产物氰酸盐(cyanate)对体外培养的血管内皮细胞氧化应激和功能障碍的作用。培养人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过CCK8法检测氰酸盐对内皮细胞活力的影响;采用DCFH-DA法检测ROS水平;用比色法测定NO水平;分别用细胞免疫荧光和Western blot检测ICAM-1(intercelluar adhesion molecule-1)、e NOS(endothelial nitric oxide synthase)表达。氰酸盐呈浓度依赖性影响内皮细胞活力,与对照组相比,当氰酸盐浓度为1.00 mmol/L时,细胞活力受到明显抑制(P0.05);与正常组和阴性对照组(甘露醇组)相比,氰酸盐诱导内皮细胞内ROS水平明显升高;NO水平明显减少(P0.05)。免疫荧光结果显示,氰酸盐作用内皮细胞24 h后,ICAM-1荧光明显增强,e NOS明显减弱(P0.05)。Western blot结果显示,内皮细胞内ICAM-1水平随氰酸盐浓度升高和负荷时间延长上调,而e NOS水平下调(P0.05)。氰酸盐诱导血管内皮细胞氧化应激产生和功能障碍。     

炎症介质通过延迟嗜中性粒细胞凋亡促进内皮细胞的损伤

本研究采用分离纯化的人外周血NTP,以LPS/TNF激活后5:1和10:1与内皮细胞共同培养或隔离培养,加或不加10ng/ml IL-6、10%(v/v)烧伤血清,24h后观察NTP凋亡对体外培养内皮细胞损伤程度的影响及其关系。结果表明激活的NTP对内皮细胞没有明显损伤,但是加入IL-6和烧伤血清后,NTP凋亡延迟,内皮细胞受到损伤,表现为发生坏死,并且NTP对内皮细胞的损伤需要两种细胞的直接接触。