菌草灵芝与段木灵芝的功效成分的比较研究

测定并比较菌草灵芝和不同产地的段木灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率的差异。结果表明,菌草灵芝和不同产地的段木灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率存在着差异,菌草灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率都高于段木灵芝。     

灵芝液态深层发酵三萜类化合物研究进展

三萜类化合物是灵芝中主要的活性化学成分之一,由于其具有多种重要的生理活性,现已成为国内外学者研究灵芝的热点。本文总结了灵芝三萜发酵工艺的优化及其生物合成中的信号转导等方面的进展,并在此基础上提出了灵芝发酵研究中存在的问题,以期为灵芝三萜液态深层发酵的调控研究及发酵生产工艺的开发提供参考和启示。     

影响灵芝三萜类物质液态发酵合成的关键因素研究进展

灵芝是我国名贵的食药两用型菌类,具有广泛的药用价值,其三萜类物质为灵芝中最主要的药理活性物质之一。灵芝液态发酵因具有生长周期短、环境条件可控、目标产物质量稳定及易实现规模化制备等特点而成为获得灵芝三萜类物质最有前景的方式。灵芝三萜代谢途径、发酵工艺及参数、溶解氧控制等是影响灵芝三萜类物质液态发酵合成的关键因素。本文总结了灵芝三萜生物合成的代谢途径和相关的酶(基因)、液态发酵方式和发酵参数调节的溶解氧控制这3个层面对灵芝三萜类物质生物合成的影响,并对今后的研究方向进行了展望,为液态培养灵芝三萜类物质调控及高产提供参考,也为下一步研究提供借鉴。     

HPLC法测定灵芝孢子粉中三萜含量

为准确测定灵芝孢子粉中三萜的含量,运用高效液相建立适合孢子粉的分析测定方法。通过对前处理条件的优化,确定40%乙醇为孢子粉中等极性三萜酸类的最佳提取溶剂,浓缩倍数是子实体提取条件的50倍。通过色谱柱和洗脱条件的优化,建立了包括灵芝酸I、灵芝烯酸C、灵芝酸C2等13种标准品测定方法,方法学考察显示该分析方法精密度、重复性、稳定性的RSD值均小于5%,可以用于灵芝孢子粉中三萜类成分的定量检测。通过5组样品的分析发现,灵芝酸C6、灵芝酸G、灵芝酸A、灵芝酸D、灵芝酸F是灵芝孢子粉中的主要三萜类成分,其中灵芝酸A含量最高,平均占样品三萜总量的比例达19.71%;三萜类成分的溶出量与是否破壁没有相关性。三萜类成分在灵芝孢子粉和灵芝孢子油产品中的含量非常低,孢子粉的三萜含量为14.24-99.70μg/g,仅为子实体的1/100,灵芝孢子油中三萜含量也均低于50μg/g,因此三萜类成分不适合作为灵芝孢子粉及其相关产品的定量检测指标。     

药用大型真菌灵芝中的三萜酸类成分研究

目的对灵芝中的三萜类成分进行结构与活性研究。方法通过氯仿对灵芝新鲜子实体的乙醇提取物进行萃取,进一步通过硅胶柱层析、中压液相(ODS色谱柱)、制备型HPLC对氯仿提取物中的化学成分进行分离、纯化。通过UV、ESI-MS、HRESI-MS、~1H-NMR、~(13)C-NMR、HSQC、HMBC、NOESY等光谱技术对所分离得到的化合物进行准确的结构鉴定。通过α-葡萄糖苷酶抑制模型对所分离得到的三萜类化合物进行活性评价。结果从灵芝子实体中分离鉴定了7个三萜类成分,分别为:(1)Ganoderic acid X1,(2)Ganoderic acid C,(3)Deacetyl-ganoderic acid F,(4)Ganoderic B,(5)Lucienic acid A,(6)7-hydroxy-3,11,15-trioxo-lanosta-8-en-24→20sLactone,(7)Methyl lucidenate D2。化合物1和6显示了一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性。结论灵芝中的主要化学成分类型为羊毛脂烷型三萜及其降碳衍生物,其中化合物1为未见报道的新化合物。该类成分显示了一定的α-葡萄糖苷酶抑制作用,具有较好的研究前景。     

灵芝孢子油三萜类化合物高效液相指纹图谱研究

建立灵芝孢子油所含三萜类组分的高效液相指纹图谱,利用Agilent高效液相色谱仪对10批次灵芝孢子油进行了分析。结果显示,10批次的灵芝孢子油样品均出现10个主要特征峰,相对保留时间分别为0．41,0．33,0．32,0．30,0,29,0,26,0．26,0．28,0．32和0．60,并且10批次的灵芝孢子油样品的10个主峰面积均在80％以上,重叠率均在90％以上。     

灵芝子实体中的羊毛脂烷型灵芝酸酯类成分研究

目的系统研究灵芝子实体中的羊毛脂烷型灵芝酸酯类成分。方法通过氯仿对盐酸酸化的灵芝子实体提取物中的羊毛脂烷型三萜酸类成分进行萃取,结合硅胶柱层析、中压柱层析(RP C18色谱柱)、制备型HPLC(RP C18色谱柱)对提取物中的三萜酸酯类化学成分进行系统的分离、纯化。通过UV、ESIMS、HRESI-MS、1 H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、NOESY等波谱学手段结合文献数据对制备得到的三萜类单体成分进行准确的结构测定。结果从灵芝子实体的氯仿提取物中共分离鉴定了10个羊毛脂烷型灵芝酸酯类成分,分别为:(1)Ganoderic acid AP,(2)Methyl Ganoderate G,(3)Ganoderic acid H,(4)12β-Hydroxy-3,7,11,15,23-pentaoxo-5α-lanost-8-en-26-oic acid,(5)Ganoderic acid K,(6)Ganoderenic acid B,(7)Lucienic acid A,(8)Lucidenic acid B,(9)20(21)-Dehydrolucidenic acid A,(10)Lucidone D。结论灵芝子实体中极性较小的化学成分主要为羊毛脂烷型三萜及其降碳衍生物,该类成分多具有羧基或羧酸酯官能团,既而也称灵芝酸类,本文共分离鉴定了10个该系列成分,其中化合物1为新化合物。     

灵芝β-葡萄糖苷酶基因的克隆与功能分析

灵芝是我国著名的药用真菌,具有抗癌、抗肿瘤等功效。灵芝酸属于三萜类化合物,是灵芝的主要活性成分,并已成为评价灵芝品质的重要指标之一。β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)是次生代谢产物合成途径中的关键限速酶,能够调节次生代谢产物的生物合成。本研究通过同源序列比对,注释获得了灵芝β-葡萄糖苷酶基因(GlBG),并通过RNAi技术对灵芝β-葡萄糖苷酶进行功能分析。序列分析结果显示GlBG基因的DNA全长为2 759 bp,包含7个外显子和6个内含子,编码793个氨基酸,其编码的蛋白序列中含有β-糖苷水解酶的2个保守结构域。灵芝β-葡萄糖苷酶基因的沉默转化子中灵芝酸含量比野生型菌株的灵芝酸含量平均降低了38%,并且灵芝酸生物合成途径中的关键酶基因(hmgs、hmgr、fps、sqs和osc)的表达量也显著下降,实验结果表明灵芝β-葡萄糖苷酶在灵芝酸生物合成过程中具有重要作用,并为灵芝次生代谢途径及其调控机制提供了参考。     

栽培灵芝不同生长阶段多糖和 三萜类化合物的含量测定

将灵芝（Ganoderma lucidum）生长过程分为6个阶段,分别对其不同体积分数乙醇沉淀的多糖和三萜类化合物的含量进行了测定.结果表明:灵芝总多糖、40％和80％体积分数乙醇沉淀多耱含量均在菌蕾期最高;65％乙醇沉淀多耱含量以子实体成熟期最高;三萜类化合物的含量在菌盖分化期最高.     

灵芝三萜合成调控与抗肿瘤药理活性的研究进展

三萜类化合物是灵芝的重要药效成分之一,是一类活性天然产物,不仅在保肝、护肾、降血糖、抗缺氧等方面有着重要的应用价值,而且还具有很好的抗肿瘤活性。现就灵芝三萜的发酵培养优化和抗肿瘤药理活性的研究进展进行综述,以期为酸性和中性灵芝三萜类化合物的研究及进一步开发相应抗癌药物提供科学基础。     

灵芝富碘实验中氨基酸含量的探讨

在灵芝TW液体深层富碘培养过程中,碘元素能显著提高灵芝菌丝体中氨基酸的含量,不富碘的灵芝菌丝体氨基酸含量为26.95％,在培养基中添加0．1％碘化钾而获得的富碘灵芝菌丝体及富碘锌锗硒灵芝菌丝体氨基酸含量分别为35．37％、35．86％,另外其氨基酸的组成也相对发生了显著的变化,因而推测碘元素可能是灵芝中某些氨基酸含成过程中的辅基或是其激活因子。     

菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油中脂肪酸组成的比较研究

利用气相色谱法,对菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油中脂肪酸组成、不饱和脂肪酸含量等进行了比较研究。结果发现两者脂肪酸GC指纹图谱极为相似(脂肪酸组成基本相同),说明了菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油一样有同样的开发价值,但是脂肪酸含量不同,菌草灵芝孢子油中亚油酸和油酸占55.61%,不饱和脂肪酸占61.15%;段木灵芝孢子油中亚油酸和油酸占49.87%,不饱和脂肪酸占54.88%。而且两者的外观、气味略不同。     

赤灵芝GL-2发酵液中多糖组分及活性研究

对赤灵芝ＧＬ－２菌株发酵液中胞外多糖的提取进行了研究,通过乙醇分级沉淀对发酵液中多糖进行了分离,并采用凝胶柱层析法检测了各级份中多糖的分子量分布范围,动物实验证明,分级沉淀各级份均能促进小鼠体重增长,增强小鼠白细胞吞噬细胞的能力,提高红细胞中ＳＯＤ酶的活力。其中６０％级份的效果最为明显。     

Secondary metabolites from Ganoderma lucidum and Spongiporus leucomallellus

The hydrodistillates and solvent extracts of the fruit bodies of Ganoderma lucidum (Fr.) P. Karst. and Spongiporus leucomallellus (Murril) A. David were investigated. The constituents in both oils comprised hydrocarbons, monoterpenes, sesquiterpenes, and fatty acids. Major volatiles of G. lucidum were trans-anethol, R-(-)-linalool, S-(+)-carvone and alpha-bisabolol, while the essential oil of S. leucomallellus contained relatively large amounts of R-(-)-1-octene-3-ol, R-(-)-linalool, 1-hepten-3-one and (Z)-nerolidol. From the n-hexane extract of G. lucidum, the steroid ester ergosta-7,22-diene-3beta-yl pentadecanoate could be identified. From S. leucomallellus two constituents showing structures of 3,4-seco-lanostane type triterpene acids were identified as (+)-23-oxo-3,4-seco-lanosta-4(28),7(8),9(11),24(31)-tetraene-3,26-dicarboxylic acid and (+)-20-hydroxy-23-oxo-3,4-seco-lanosta-4(28),7(8),9(11),24(31)-tetraene3,26-dicarboxylic acid, respectively. Cytotoxicity and antimicrobial activity of selected compounds were investigated using standard tests.     

灵芝三萜酸分批发酵的非结构动力学模型

研究了灵芝胞内和胞外三萜酸在30L发酵罐中分批发酵的动力学特征。利用Sigmoid函数构建了灵芝细胞生长、底物消耗、胞内和胞外三萜酸的非结构动力学模型,并根据Boltzmann拟合求解出各模型参数。结果表明,各模型预测值能够较好地吻合实验实测值。灵芝细胞比生长速率在第2.5天达到最大值（μmax）,为0.700d?1;葡萄糖比消耗速率在第2.4天达到最大值（qS, max）为1.060d?1;胞内三萜酸比合成速率在第4.7天达到最大值（qITA, max）为11.345mg/(g·d);胞外三萜酸比合成速     

生物富硒对灵芝营养成分的影响

在人工栽培灵芝中,通过外施硒盐以生物转化法获得富硒灵芝,以不同含硒量的富硒灵芝子实体为试样,系统研究了灵芝生物富硒后对其主要营养成分多糖、蛋白质、氨基酸和矿物质等的影响。结果表明：硒可以明显提高灵芝中多糖、蛋白质以及氨基酸的含量,但并不改变灵芝蛋白质的分布和蛋白质中氨基酸的组成配比,而对矿质元素则有不同的影响,如富硒灵芝子实体中人体必需微量营养元素硒有极明显地增加,而铜和钼等人体必需微量元素的含量有一定量的增加,但铁、钙、锶等矿质元素的含量则有所下降。     

SEFA-PCR法克隆灵芝鲨烯合酶基因启动子及其序列分析

鲨烯合酶是灵芝三萜生物合成的关键酶,灵芝鲨烯合酶基因的表达和活性的高低决定了灵芝中三萜含量的高低。根据已经获得的灵芝鲨烯合酶全长cDNA序列设计一对专一引物,通过PCR扩增得到了灵芝鲨烯合酶基因的基因组全长,序列长1984bp,含有3个内含子。根据其基因组序列设计引物,采用SEFA-PCR的方法,以总DNA为模板,克隆了灵芝鲨烯合酶基因的启动子序列,长1042bp。序列分析发现灵芝鲨烯合酶基因启动子中没有明显的TATA和CAAT框,但是含有CCAAT-bindingfactor、GATA-1、GC-box、TFⅡD等重要的转录因子的结合位点,以及在人和酿酒酵母鲨烯合酶基因启动子中发现的甾醇调节相关的顺式调控元件。     

灵芝液体发酵条件的研究

本文研究了某些因素对灵芝液体发酵的影响。4天菌龄的液体菌种发酵效果最好;300毫升三角瓶以装入60毫升培养液发酵较合适;蔗糖、花生饼粉分别为灵芝液体发酵的理想碳、氮源;液体发酵培养基最佳配方为:蔗糖4％、花生饼粉3％、硫酸铵0.15％、磷酸二氢钾0.15％,可得灵芝菌丝体百分干重为0.83,每100毫升发酵液得粗多糖0.3克。     

雷公藤解毒持效双向发酵工艺的建立

采用双向发酵的原理,运用"发酵过程动态比较法"研究了灵芝接种于雷公藤药性基质上发酵不同时间所得菌质的化学成分、急性毒性和免疫功能的变化,以其确定雷公藤解毒持效双向发酵的最佳发酵终点。研究结果表明:发酵第30天所得的菌质(G30)总二萜的含量最低,为0.57%;与雷公藤生药比较,G30的LD50最高,且发酵第30天所得菌质的体液免疫和细胞免疫抑制作用最强。综合对成分含量、毒性及药效的动态数据联系比较、分析,确定了雷公藤解毒持效双向发酵的发酵终点与适宜的发酵周期是菌丝长满瓶后的第30天。