能发荧光的转基因家蚕

利用同源重组的方法研究了家蚕丝心蛋白链基因的定点替代。将ＩＥ启动子带动的ＧＦＰ基因插入蚕丝心慢白质链基因的上、下游序列之间,构民 重组质粒。将该质粒线性化后导入早期受精卵。当家蚕饲养至五龄期时用紫外灯检测,在约５０００条蚕中发现３条有绿色荧光斑块。ＰＣＲ检测证明ＧＦＰ已整合到家蚕基因组中,对其中一条蚕的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明丝心蛋白重链基因已被成功敲除并被ＧＦＰ报告基因所替代。这条转基因蚕能     

琥珀蚕丝腺转录因子基因AaSGF-1的克隆、原核表达及组织表达分析

【目的】本研究旨在克隆琥珀蚕Antheraea assama丝腺转录因子基因AaSGF-1,分析其序列特征及表达模式并制备多克隆抗体,为探讨该基因的生理功能奠定基础。【方法】采用RT-PCR和RACE技术从琥珀蚕丝腺中克隆AaSGF-1的cDNA序列,并进行生物信息学分析;利用qPCR检测AaSGF-1在琥珀蚕5龄第4天幼虫不同组织(头、中肠、脂肪体、丝腺、血液、表皮)中的表达模式;构建原核表达质粒载体,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达AaSGF-1,利用纯化的融合蛋白免疫新西兰兔子,获得高效的抗体。利用免疫荧光技术检测AaSGF-1在琥珀蚕蚁蚕丝腺和表皮及4龄幼虫丝腺中的表达情况。【结果】克隆了琥珀蚕AaSGF-1的cDNA序列(GenBank登录号： MK889510.1),开放阅读框(ORF)序列长1 050 bp,编码349个氨基酸残基,预测蛋白分子质量为38.8 kD,理论等电点(pI)为8.74。qPCR检测结果显示AaSGF-1在琥珀蚕5龄幼虫丝腺组织尤其是后部丝腺中高量表达,而在其他组织中几乎不表达。免疫荧光结果表明AaSGF-1在蚁蚕及4龄幼虫的丝腺中表达。【结论】本研究原核表达了琥珀蚕AaSGF-1,制备了多克隆抗体,证实了AaSGF-1在琥珀蚕幼虫的丝腺中高表达,为进一步研究该基因在琥珀蚕丝腺发育及丝蛋白合成中的作用奠定了基础。     

日本培育出能吐荧光丝的转基因蚕

新华网东京10月26日电（记者钱铮）日本研究人员最近利用转基因技术，培育出能吐带绿色荧光丝或粉红色荧光丝的蚕。他们认为，这种蚕丝在时装和装饰市场前景看好。     

我国古代养蚕技术上的一项重要发明——人工低温催青制取生种

根据郑辑之《永嘉郡记》(公元四世纪)记载,永嘉地区(即今浙江温州一带)一年能养八批蚕。当时人民已经发现用低温催青蚕卵,有利于产生不滞育卵。为了能在一年四季里分批多次养蚕,创造采用低温催青办法以不断获得产不越年卵的蚕。同时还从蚕丝产量看到养越年化蚕比养不越年化蚕更为有利。所以又利用各代不越年化蚕所产的卵,在自然高温下孵化,以获得各代越年化蚕作为蚕丝生产主要蚕种。这样既解决多次养蛋的蚕种问题,同时又尽可能达到较好的蚕丝生产目的。这是我国古代养蚕技术上的一项重要发明,它充分反映了我国古代人民的勤劳与智慧。     

全国生物技术在蚕丝业应用研讨会

“全国生物技术在蚕丝业应用研讨会”于1988年11月26日至29日在厦门大学召开。会议代表对于我国近年来有关生物技术在蚕丝业上应用的研究成果、现状和发展趋势以及今后的任务进行了认真热烈的讨论。代表们认为,近年来我国应用生物技术在家蚕育种方面取得了以下成果:(1)在染色体工程方面,建立了单雌、单雄无性繁殖系和雌雄蚕基因相同的同质纯合两性纯系;(2)应用     

遗传工程还能给人类带来什么

在可以予见的未来,遗传工程还能给我们带来什么呢? 畜牧学家将能利用无性繁殖技术培养出体大如象的奶牛,一年能提供牛奶四万多磅,而且抗病力强、食用饲料少,六个月就完全成熟。人们把蚕的遗遗传基因移入某种细胞里,由此造出蚕丝。如果能够把某些海洋生物耐盐或处理盐的基因分离出来,并把它转移到农物作的细胞里,那么,它们就成为耐盐植物,以后我们可以取之不尽的海水灌溉这种作物了。     

利用同源重组改变家蚕丝心蛋白重链基因

在家蚕丝心蛋白重链基因5‘和3‘端序列之间插入以绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）基因（gfp）与人工合成丝心蛋白样基因的融合基因,利用电穿孔方法导入蚕卵中,卵孵化、发育和结茧后,用紫外灯检查,在约5400个茧中有73个“亮茧”,茧蛋白在ELISA应中可以与GFP的多克隆抗体反应。“亮茧”对应的蚕蛾进行交配、制种。对其后代进行了基因鉴定,Southern杂交的结果表明,gfp基因和人工合成丝心蛋白样基因都存在于家蚕基因组DNA中且发生了预期的同源重组事件。上述结果说明“亮茧”这一表型能用于筛选转基因蚕,融合基因已通过同源重组进入家蚕基因组。     

利用基因工程使家蚕分泌绿色荧光蚕丝

《ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ》１９９９年１７卷５期４１２页报道：日本京都工艺研究所的科学家茂理及其同事利用基因工程使杆状病毒将编码家蚕丝心蛋白的基因与编码绿色荧光蛋白的基因相互融合。再用这种病毒感染家蚕。这就使病毒中的上述工程基因通过同源重组过程而替代了家蚕的内源丝心蛋白基因。观察表明,含有这种融合工程基因的家蚕丝腺和蚕丝都可发出绿色的光泽。这种技术的主要优点是可将异源ＤＮＡ特异地导入家蚕本身的丝心蛋白基因部位,使其可接受家蚕内源启动基因的调控。而利用转座子诸如Ｐ因子的方法,则是将外…     

家蚕丝心蛋白H链基因的荧光原位杂交(FISH)

蚕丝业在国民经济中占有极为重要的地位. 家蚕作为重要的模式生物和生物反应器, 历来为人们所关注. 有关蚕丝基因的结构、表达调控和分子进化都已有较详细的研究和报道, 但关于蚕丝结构基因的分子细胞遗传学基因定位的研究, 几乎尚无报道. 经用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)对家蚕丝心蛋白H链基因(Fib-H)的分子细胞遗传学定位研究结果, 初步将家蚕丝心蛋白H链基因定位在了分子细胞遗传学第25连锁群染色体的端部, 即25~0.0的位置, 从而解决了该基因迄今尚未定位的问题, 并证实了丝心蛋白H链基因在染色体位置上为单一座位.     

利用转化技术生产丝绸

日本Kyoto Institute of Technology-Faculty of Textile Science的研究人员利用专门设计的病毒载体,将萤火虫虫荧光素酶基因导入蚕中。他们还成功地导入了外源基因,并成功地获得了后代。 以Hajime Mori为首的研究人员将虫荧光素酶基因导入苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV),置于Drosophila热激蛋白基因启动子调控之下。用重组病毒接种蚕的第5次蜕皮期的幼虫时,在病毒侵染的幼     

日本通过转基因蚕制出荧光丝

据日本共同社报道,日本农业生物资源研究所与群马县蚕丝技术中心等研究组成功大量培养出可结出荧光色蚕茧的转基因蚕,并研发出能保持发光特性而将蚕茧转为生丝的方法。     

中国养蚕科技新进展

<正> 中国是世界蚕业发祥地。蚕丝是中国传统的出口商品,1990年创汇25亿美元,产茧47.5万吨,占世界总产量65％,生丝出口占国际市场90％以上,丝绸出口占45％左右,都占世界第一位。本文简述我国养蚕科技最新进展及其对蚕业生产发展所起的作用。     

分析蚕在吐丝过程中的结构

农林水产省农业生物资源研究所、蚕丝和昆虫农业技术研究所、神奈川大学共同分析解明了蚕吐丝的全部机制。该研究组用偏光显微镜等观察,成为丝线基础的蛋白质的纤维以琼胶样的胶体状蓄积在蚕体内后,成为液晶状态,在细管内流动,在这个过程中分子排列地很漂亮。这时胶状体的纤维由钙离     

转基因方法让家蚕吃得少吐得多

科学家曾通过传统杂交手段获得高产、抗病的新家蚕品种,使养蚕业获益匪浅。但好景不长,这种方法很快遭遇蚕丝产量停滞的瓶颈。科学家又突发奇想,能否将转基因的方法运用于提高蚕丝产量上,让蚕“吃得少、吐得多”呢？2011年3月15日,中国科学院上海生命科学研究院的李胜研究员和西南大学的夏庆友教授及其研究团队发表在由中国科学家主办的国际生物学学术期刊《细胞研究》上的论文研究结果显示,这个“贪婪”的想法可以付诸实现。     

家蚕丝蛋白基因启动子调控β－半乳糖苷酶在家蚕细胞系中的瞬时表达

家蚕丝蛋白基因启动子调控β－半乳糖苷酶在家蚕细胞系中的瞬时表达华刚,钱斌,吴祥甫（中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）关键词丝蛋白启动子;β－半乳糖苷酶基因;瞬时表达家蚕丝蛋自基因（Ｗｂ：Ｆｉｂｒｏｉｎｇｅｎｅ）在发育后期幼虫的后部丝腹中主要...     

家蚕丝素重链启动子驱动DsRed的瞬时分泌表达

根据家蚕丝蛋白基因的启动子活性高、丝蛋白具有高效分泌的特性,克隆了家蚕丝素重链基因(Fib-H)启动子及其下游的信号肽序列(FibHS),将DsRed基因与信号肽序列融合构建了分泌型瞬时表达载体;转染细胞实验显示,该载体能在家蚕BmN细胞中瞬时表达DsRed;家蚕注射载体后,可在丝腺腔中检测到红色荧光,表明瞬时表达的DsRed分泌到丝腺腔,推测所克隆的序列具有信号肽的功能。此外,本研究为家蚕丝腺生物反应器分泌表达外源基因的研究奠定了基础。     

应用昆虫激素类似物增加桑蚕产丝量的研究初报

蚕丝生产在我国有悠久历史,特别是无产阶级文化大革命以来,在毛主席革命路线指引下,贯彻“以粮为纲,全面发展”的方针,蚕丝生产有了很大发展,同时对桑蚕科学技术的研究,也提出了更高的要求。昆虫保幼激素类似物在蚕业上应用的研究,就是探讨增产蚕丝的新途径。昆虫激素的研究,自1967年查明了大柏天蚕(Platysamia cecropia)天然保幼激素的化学结构后,国外对保幼激素类似物的人工合成和生物活性的研究进展较快。如美国加强保幼激素的研究主要是为了创     

琥珀蚕孵化酶基因AaHE的克隆及启动子活性分析

【目的】琥珀蚕Antheraea assama具有典型的野蚕特征,蚕卵孵化不齐,严重影响琥珀蚕的室内规模化饲养。本研究旨在探究对琥珀蚕卵孵化起关键作用的孵化酶(hatching enzyme)基因及其启动子序列特征,为进一步选择合适的抑制剂或促进剂调节琥珀蚕卵的孵化奠定基础。【方法】采用RACE技术克隆琥珀蚕孵化酶基因的cDNA全长序列,对基因序列进行生物信息学分析;采用qRT-PCR检测琥珀蚕孵化酶基因在琥珀蚕不同发育天数卵中及5龄第3和4天幼虫不同组织(丝腺、马氏管、头、中肠、脂肪体、表皮、血液、精巢和卵巢)中的表达情况;采用染色体步移克隆琥珀蚕孵化酶基因的启动子序列,构建昆虫细胞重组表达载体转染家蚕Bombyx mori BmN细胞,检测琥珀蚕孵化酶基因启动子活性。【结果】获得了琥珀蚕孵化酶基因AaHE(GenBank登录号： KT336227.1)全长cDNA序列,长993 bp,编码294个氨基酸,预测蛋白质分子质量为33.7 kD,理论等电点为5.17。AaHE氨基酸序列含有一个信号肽和一个ZnMc结构域,AaHE是一种含有HExxH锌结合位点的锌依赖性蛋白水解酶,该类酶既是肽酶,同时又是一种消化酶。AaHE在琥珀蚕孵化前的卵及5龄幼虫中肠中特异性高表达,分别与AaHE的肽酶和消化酶的属性相吻合。AaHE启动子核心区存在多个转录因子结合位点,这可能与转录因子参与调节AaHE的表达有关。启动子活性分析表明,AaHE启动子在家蚕BmN细胞中能够启动EGFP基因的表达,具有明显的启动子活性。【结论】AaHE是锌依赖性蛋白水解酶,其启动子核心区存在多个转录因子结合位点。本研究为选择合适的抑制剂或促进剂调节琥珀蚕卵的孵化率提供了参考。     

基于细胞转基因平台创制抗BmNPV的细胞素材

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是影响蚕业生产最为严重的病原之一,每年对我国蚕业生产方面造成很大的经济损失。通过RNA干扰技术(RNAi)干扰BmNPV的增殖关键基因可以有效地抑制病毒的增殖复制。本研究以BmNPV侵染关键基因gp64和lef-1为靶标基因,并利用病毒诱导型启动子LEF3P和39KP共构建了4种RNAi干扰表达载体,分别命名为:piggyBacA3-EGFP-39KP-gp64、piggyBacA3-EGFP-39KP-lef-1、piggyBacA3-EGFP-LEF3P-gp64、piggyBacA3-EGFP-LEF3P-lef-1。经瞬时转染和筛选稳定表达的家蚕细胞系抗病毒检测结果表明,通过RNAi技术能够有效的抑制病毒增殖复制,并确定了39KP启动效果优于LEF3P启动子,干扰gp64基因的抗病毒效果优于lef-1基因。这些研究结果为后期转基因品系培育和家蚕抗病毒研究提供了基础。     

昆虫遗传转化品系的常用标记

遗传转化标记是将遗传修饰昆虫从野生型种群中分辨出来的根据,遗传转化昆虫的鉴定、转化品系的维持及其遗传稳定性的监测都依赖于可靠的标记系统,发展易于应用和监测的转化标记能够极大地促进害虫遗传防治的相关研究。用于遗传修饰昆虫的转化标记主要有昆虫眼睛颜色标记基因、抗药性标记基因和荧光蛋白标记基因等。非果蝇类昆虫首个遗传转化品系的鉴定是通过眼睛颜色突变而实现,但大多数昆虫物种没有可用的突变体或缺少相应基因的信息,从而限制了眼睛颜色标记的应用。抗药性基因标记虽然能够通过对转化昆虫进行集体选择而大幅度提高筛选转化体的效率,但由于其鉴定的准确性不高且存在安全性问题,未得到广泛应用。荧光蛋白标记基因的发展则显著拓宽了能够转化的昆虫种类。从水母分离的绿色荧光蛋白(GFP)经突变方法获得了多种不同荧光性质的突变体,经人为修饰后与适宜的强启动子构成转化标记载体,能够有效鉴定更多昆虫物种的遗传转化个体,其中应用较多的是增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。此外,从珊瑚属海葵中分离得到的红色DsRed标记基因提供了多样化的红色荧光蛋白选择,在某些生物中DsRed与GFP联合应用的表现明显优于GFP突变体,所以其应用前景也非常广泛。本文着重从眼睛颜色、抗药性和荧光蛋白等3个方面阐述了标记基因的发展历史与现状,并对其今后的发展方向进行了展望。