乙肝病毒X 蛋白通过激活NF-κB 信号通路上调ABCG2 的表达

目的:研究乙肝病毒X蛋白(HBx)通过核因子-κB(NF-κB)信号通路对半转运蛋白(ABCG2)的调节作用。方法:用特异性的NF-κB信号通路阻断剂PDTC阻断NF-κB信号通路,荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察L02细胞系转染HBx基因前后及PDTC加入前后NF-κB信号通路的激活、失活情况,同时用Real-time PCR和Western Blot技术检测转染前后及PDTC加入前后ABCG2在mRNA及蛋白水平的表达变化。结果:以L02细胞为参照,转染HBx基因后的L02-HBx细胞NF-κB信号通路被激活,ABCG2 mRNA和蛋白水平分别增加3.62±0.15和4.61±0.73倍,差异有统计学意义(P<0.05);PDTC作用24h后L02/HBx细胞NF-κB信号通路阻断,ABCG2 mRNA和蛋白表达分别为2.15±0.32倍和2.37±0.55倍,与未加入PDTC作用的L02-HBx细胞相比均有统计学意义(P<0.05)。结论:NF-κB信号通路是HBx上调ABCG2表达的途径之一。     

乙肝病毒X蛋白通过NF-κB通路调节肝癌细胞迁移、侵袭的研究

慢性乙肝病毒感染是亚洲国家肝癌的常见病因,乙肝病毒所表达的乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)是肝癌发生发展的重要推动因子。核因子-κB(Nuclear factorκB,NF-κB)是模式识别受体下游重要的转录因子,肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)/c-Met途径能够促进NF-κB活化,并通过活化的NF-κB来调节肝癌细胞的迁移、侵袭等生物学环节。但HBx是否直接通过NF-κB通路来调节肝癌细胞的迁移、侵袭尚未明确。为探究HBx通过NF-κB通路调节肝癌细胞迁移、侵袭的作用,本研究采用培养肝癌HepG2细胞并分组,空白对照组用不含药物及质粒的DMEM处理,空白质粒组转染1.2μg的pcDNA3.1空白质粒,HBx质粒组转染不同浓度的HBx表达质粒pcDNA3.1-HBx,HBx+PDTC组转染1.2μg的HBx表达质粒pcDNA3.1-HBx并用含有50μmol/L PDTC的DMEM进行处理;皮下注射HepG2细胞建立移植瘤小鼠模型,称量移植瘤的质量。检测细胞迁移及侵袭活力、细胞及移植瘤中NF-κB通路分子、迁移基因、侵袭基因的表达。结果显示,与空白对照组、空白质粒组比较,HBx质粒组细胞中NF-κB、HGF、c-Met、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的蛋白表达水平及相对愈合面积、侵袭数目均明显增多(P0.05);与HBx质粒组比较,HBx+PDTC组细胞中NF-κB、HGF、c-Met、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的蛋白表达水平及相对愈合面积、侵袭数目均明显减少(P0.05);与空白对照组、空白质粒组比较,HBx质粒组移植瘤的质量及移植瘤中NF-κB、HGF、c-Met的蛋白表达水平明显增加(P0.05)。本研究得出结论,HBx能够促进肝癌细胞的迁移、侵袭,且该作用与激活NF-κB通路有关。     

乙肝病毒X蛋白通过上调NOX4的表达活化肝星状细胞

目的:探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝星状细胞(HSC)活化的影响及其可能的分子机制。方法:构建稳定转染HBx基因的L0_2肝细胞(L0_2-HBx),Western Blot鉴定细胞株中HBx蛋白的稳定表达。以L0_2-HBx、转染空质粒(L0_2-pcDNA3.1)和未转染肝细胞(L0_2)的条件培养基,分别孵育肝星状细胞株LX-2,即LX-2/L0_2-HBx、LX-2/L0_2-pcDNA3.1、LX-2/L0_2,Western Blot检测上述各组细胞α-SMA (肝星状细胞活化标志)和NOX4的蛋白表达。以L0_2-HBx的条件培养基孵育LX-2细胞,分为转染si-NOX4(LX-2/L0_2-HBx+si-NOX4)、无关干扰片段(LX-2/L0_2-HBx+snc-RNA)、未转染(LX-2/L0_2-HBx)3组,Western Blot检测各组LX-2细胞的α-SMA蛋白表达。结果:L0_2-HBx中稳定表达HBx蛋白;LX-2/L0_2-HBx细胞中α-SMA和NOX4的蛋白表达显著高于LX-2/L0_2-pcDNA3.1、LX-2/L0_2细胞(P0.01);LX-2/L0_2-HBx细胞敲减NOX4后(LX-2/L0_2-HBx+si-NOX4),α-SMA的蛋白表达显著低于LX-2/L0_2-HBx+snc-RNA和LX-2/L0_2-HBx细胞(P0.05)。结论:肝细胞中表达的HBx蛋白可以通过HSC中NOX4上调α-SMA的表达,促进HSC的活化。     

β-淀粉样蛋白对BV2小胶质细胞促炎作用的研究

目的探讨β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)促进BV2小胶质细胞产生炎性因子IL-1β和TNFα的作用机制。方法体外培养BV2小胶质细胞,应用Aβ1-42作用于BV2小胶质细胞,或用吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)预孵育再给予Aβ1-42刺激,实时荧光定量反转录聚合酶链反应法(RT–PCR)检测IL-1β和TNFαmRNA表达;免疫印迹法(Western blot)检测胞核中NF-κB p65及其抑制蛋白胞浆中IkBα的表达。结果 Aβ1-42作用于BV2小胶质细胞后,Westernblot显示胞浆内IkBα表达下降,胞核内NF-κB p65表达明显增加,RT-PCR测定IL-1β和TNFαmRNA的表达增加;给予NF-κB信号通路特异阻断剂PDTC后,胞浆IkBα的下降和胞核内NF-κB p65的增加均被抑制,同时IL-1β和TNFαmRNA的表达亦受到抑制,PDTC的抑制效果呈剂量依赖性。结论 Aβ可通过激活小胶质细胞NF-κB信号通路促进IL-1β和TNFα的表达。     

S100A9参与乙型肝炎病毒X蛋白介导的HepG2细胞增殖与迁移

目的:探讨S100A9在乙型肝炎病毒X(HBx)介导的HepG2细胞增殖及迁移中的作用。方法:用表达HBx蛋白的重组腺病毒AdHBx感染HepG2细胞后,用CCK-8实验检测细胞增殖能力及划痕愈合实验检测细胞迁移能力;在HepG2/AdHBx细胞中转染S100A9-siRNA及其对照siRNA后,检测HepG2细胞增殖及迁移能力;在HepG2/Ad HBx和对照组HepG2/AdGFP细胞中,采用Real-time PCR及Western Blot检测S100A9基因及蛋白的表达情况;在HepG2/AdHBx细胞中,加入不同剂量的NF-κB抑制剂BAY11-7082后,检测各组中S100A9的基因及蛋白表达情况。结果:HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移; S100A9-siRNA抑制S100A9的表达后,HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移的作用降低,HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移部分依赖于S100A9; S100A9基因及蛋白表达在HepG2/AdHBx中较对照组HepG2/Ad GFP显著升高,HBx可致S100A9表达增加;抑制NF-κB转录活性后,AdHBx+BAY11-7082组S100A9基因及蛋白表达较对照组显著降低,阻断NF-κB转录活性可部分抑制HBx调控的S100A9表达。结论:HBx可调控S100A9的表达且与NF-κB活化有关,S100A9参与HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移。     

乳酸调控大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的NF-κB信号通路

目的探讨内毒素（LPS）刺激大鼠肠黏膜微血管内皮细胞（RIMMVECs）后,乳酸（LA）调控NF-κB信号通路中磷酸化IκBα和NF-κB p65蛋白表达情况,肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）mRNA表达情况,阐明乳酸发挥作用的最佳时间及其调控NF-κB信号通路的部位。方法提取RIMMVECs总蛋白和总RNA,用Western blotting检测NF-κB p65、IκBα及p-IκBα蛋白表达水平,用real-time PCR对TNF-α和IL-6 mRNA进行定量检测。结果乳酸能降低LPS诱导RIMMVECs分泌的TNF-α和IL-6 mRNA表达水平,并分别于24 h和3 h下调效果最明显;乳酸能抑制IκBα磷酸化及NF-κB转录活性,并于4～8 h达到最佳效果;乳酸发挥作用部位是抑制信号通路中IκBα磷酸化。结论乳酸通过抑制IκBα磷酸化而阻断NF-κB的激活,抑制下游炎性因子表达,进而发挥出很好的预防炎症效果。     

乙型肝炎病毒X蛋白上调环加氧酶2表达促进肝癌细胞增殖的实验研究

乙肝病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein,HBx）高表达与乙肝相关肝癌的发病密切相关,但HBx发挥促癌作用的机制并不清楚。环加氧酶2（Cyclooxygenase,COX2）具有促进肝癌细胞增殖的功能,乙肝相关肝癌中COX2的表达增加且与HBx呈正相关,提示上调COX2可能是HBx促进肝癌细胞增殖的分子机制。为了阐明HBx是否通过上调COX2促进肝癌细胞增殖,本实验培养了肝癌HepG2细胞并分为对照组、转染pcDNA3.1-HBx质粒的HBx组、转染NC siRNA的si-NC组、转染NC siRNA及pcDNA3.1-HBx质粒的si-NC+HBx组、转染COX2 siRNA及pcDNA3.1-HBx质粒的si-COX2+HBx组。检测细胞增殖活力OD_490nm的水平,COX2、B淋巴细胞瘤2基因（BCL2）、生存素（Survivin）的表达量,前列腺素E2（英文名,PGE2）的含量。实验结果显示,HBx组的OD_490nm水平,细胞中COX2、BCL2、Survivin的表达量,培养基中PGE2的含量均高于对照...     

NF—κB信号通路在绿脓菌素诱导气道上皮表达IL-8的作用

探讨绿脓菌素对人气道上皮细胞株（NCI—H292细胞）表达IL-8的诱导作用及通过NF—κB信号传导通路。采用ELISA法对PCN诱导NCI-H292细胞分泌IL-8进行分析,应用westernblotting检测NF-κB的蛋白表达,观察NF—κB阻断剂对IL-8表达的影响。PCN可促进NCI-H292细胞IL-8分泌。NF—κB的阻断剂PDTC能显著抑制IL培表达（P〈0．01）。PCN可能通过NF-κB信号通路诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达。     

MyD88抑制乙型肝炎病毒复制依赖活化NF-κB信号通路

目的 研究髓样细胞分化蛋白(MyD88)抗乙型肝炎病毒(HBV)效应的作用机制。方法 构建MyD88的截短突变体,获得核因子kappa B(NF-κB)超抑制剂IkBa-SR或者NF-κB信号通路激活剂IKKα/IKKβ的表达质粒,分别与HBV复制型质粒瞬时转染Huh7细胞,检测细胞上清液中HBeAg,HBsAg的表达以及胞质中HBV复制中间体DNA的含量,并以NF-κB依赖的荧光素酶报道系统检测它们活化NF-κB的程度。结果 MyD88全长蛋白和2个截短突变体M(1-151)、M(151-296)活化NF-κB的程度与其抑制HBV蛋白以及复制中间体DNA合成的能力相一致。与空载相比,表达NF-κB信号通路激活剂IKKα/IKKβ的质粒共同瞬转细胞后,转染MyD88和HBV表达质粒的细胞中NF-κB的通路明显活化,同时HBV core蛋白的合成显著降低;而NF-κB的超抑制剂IκBα-SR共同瞬转的细胞中core蛋白的表达量显著增加,检测细胞培养上清液中HBeAg和HBsAg及胞质中HBV复制中间体DNA的合成,得到相似结果。结论 NF-κB信号通路的活化在MyD88抑制HBV复制中发挥了关键作用     

miR-21对心肌缺血大鼠心肌细胞TLR-4/NF-κB通路的影响

摘要 目的：探究微小核糖核酸-21（miR-21）对心肌缺血大鼠心肌细胞Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路的影响。方法：取40只SD大鼠随机分为假手术组（10只）和建模组（30只）,建模组大鼠通过左冠状动脉前降支（LAD）结扎术建立心肌缺血大鼠模型,假手术组大鼠仅开胸后不做其他处理即缝合。将建模成功大鼠随机分为对照组（转染miR-NC慢病毒）、沉默组（转染miR-21 antagomir慢病毒）、过表达组（转染miR-21 mimics慢病毒）,假手术组注射等量生理盐水。苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织损伤情况;原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹法（WB）检测TLR-4、NF-κB、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bax）信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）水平。结果：对照组大鼠心肌纤维排列紊乱,大量心肌细胞肿胀坏死并伴随炎症细胞浸润,沉默组大鼠心肌组织损伤情况进一步加重,而过表达组大鼠心肌组织损伤现象得到明显改善。与假手术组比,对照组、沉默组、过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）;与对照组比,沉默组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA表达与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）,过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平降低,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：下调miR-21表达可促进TLR-4/NF-κB通路表达,加重心肌缺血大鼠心肌损伤。     

肝胚瘤细胞株HepG_2中HBx蛋白对SOCS3表达的影响及其机制

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)对肝胚瘤细胞株HepG2表达信号抑制因子3(SOCS3)的影响及其机制。方法将表达HBx蛋白的重组质粒FL1-145HBx转染HepG2细胞,以不同浓度的SRC抑制剂PP2处理转染细胞,运用Western blot和RT-PCR技术分析HBx、SOCS3 mRNA和蛋白的表达情况,并以免疫细胞化学分析转染细胞中p-SRC的表达水平。结果重组质粒FL1-145HBx转染HepG2细胞后,转染细胞HBx能够表达HBx蛋白,并且细胞中SOCS3 mRNA和蛋白表达水平随着HBx蛋白的表达而显著增加(P0.05),同时p-SRC蛋白的表达增强;而SRC抑制剂PP2处理转染细胞后,随着p-SRC蛋白表达的减少SOCS3蛋白表达逐渐下降。结论在肝胚瘤细胞株HepG2中,HBx蛋白很可能通过促进SRC蛋白的磷酸化而诱导SOCS3蛋白的表达。     

HBV X基因的表达及在真核细胞中对内质网压力的作用

运用PCR技术获得HBx基因,分别克隆到原核表达载体pET-his和真核表达载体pcDNA3.1(-)上。重组质粒pET-his-HBx转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,利用Ni柱纯化后的蛋白免疫家兔,获得特异性的抗-HBx兔抗血清。重组质粒pcDNA3.1(-)-HBx分别转染HepG2和Hep3B细胞系后,经RT-PCR和Westernblot检测,证明HBx可以在这两种细胞系中表达。通过报告基因的表达研究了HBx对XBP1和GRP78启动子的激活活性,结果表明瞬时转染HBx的细胞系中,XBP1和GRP78启动子介导的荧光素酶活性比相应的对照细胞增加了3～7倍。通过RT-PCR分析证明,转染了HBx的细胞中XBP1mRNA发生了剪切。因此,可以初步推断HBx在HepG2和Hep3B细胞中的表达可以引起内质网压力反应,为进一步阐明HBx表达对内质网的影响和肝脏病原发生机制奠定了基础。     

HBV X基因的表达及在真核细胞中对内质网压力的作用

运用PCR技术获得HBx基因,分别克隆到原核表达载体pET-his和真核表达载体pcDNA3.1(-)上.重组质粒pET-his-HBx转化大肠杆菌BL21(DE3)后, IPTG诱导表达,利用Ni柱纯化后的蛋白免疫家兔,获得特异性的抗-HBx兔抗血清.重组质粒pcDNA3.1(-)-HBx分别转染HepG2和Hep3B细胞系后,经RT-PCR和Western blot检测,证明HBx可以在这两种细胞系中表达.通过报告基因的表达研究了HBx对XBP1和GRP78启动子的激活活性,结果表明瞬时转染HBx的细胞系中,XBP1和GRP78启动子介导的荧光素酶活性比相应的对照细胞增加了3～7倍.通过RT-PCR分析证明,转染了HBx的细胞中XBP1 mRNA发生了剪切.因此,可以初步推断HBx在HepG2和Hep3B细胞中的表达可以引起内质网压力反应,为进一步阐明HBx表达对内质网的影响和肝脏病原发生机制奠定了基础.     

体外模拟脑缺血再灌注条件下BV-2细胞TLR4信号途径对TLR2表达的影响

研究证实,TLR4和TLR2有可能作为重要炎性受体介导脑缺血再灌注炎性损伤.然而目前还不清楚在此过程中TLR2和TLR4受体之间是否存在着交叉对话可能.本研究首先利用针对TLR4基因的RNA干扰技术阻断体外模拟脑I/R条件下BV-2细胞TLR4信号传导途径,观察此时TLR2受体表达变化,初步探讨TLR4信号途径对TLR2表达的影响.然后利用NF-κB抑制剂PDTC阻断NF-κB活性来观察体外模拟脑I/R条件下BV-2细胞TLR2和TLR4受体表达变化,进一步阐明NF-κB在TLR2和TLR4交叉对话中的作用.结果表明：（1）体外模拟脑I/R条件下阻断BV-2细胞TLR4信号传导途径可以明显抑制TLR2和NF-κB表达的上调;（2）PDTC预处理后在体外模拟脑I/R条件下BV-2细胞TLR2和TLR4的表达均下调.结果提示,脑I/R损伤中TLR4受体激活后有可能通过NF-κB的介导,进一步影响TLR2的表达,从而导致炎症反应的链式放大,两者协同加重了脑损伤的过程.     

乙型肝炎病毒X蛋白调节TRAIL诱导的肝细胞凋亡

观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导肝细胞凋亡的影响并初步探讨其分子机制. 构建包含HBx基因的真核表达载体pcDNA-HBx, 转染BEL7402肝癌细胞, 建立可稳定表达HBx的肝癌细胞系BEL7402-HBx, 同时设立空载体pcDNA3转染对照组细胞BEL7402-cDNA3. 台盼蓝染色计数, Caspase3活性检测和TUNEL法检测TRAIL诱导BEL7402, BEL7402-cDNA3, BEL7402-HBx细胞凋亡的情况, 并通过流式细胞术分析3组细胞表面TRAIL受体的表达水平. 此外, 利用硫代反义寡核苷酸封闭HBV全基因转染肝癌细胞系HepG2.2.15中HBx蛋白的表达, 观察阻断前后对TRAIL诱导凋亡敏感性的改变, 进一步反向验证HBx对TRAIL诱导凋亡的调节作用. 台盼蓝染色计数提示TRAIL 对BEL7402, BEL7402-cDNA3, BEL7402-HBx均有剂量依赖性的细胞毒作用, 但在相同浓度TRAIL作用下, BEL7402-HBx细胞较BEL7402, BEL7402-cDNA3细胞有更高的敏感性. Caspase3活性检测结果分析发现, TRAIL作用后BEL7402-HBx细胞在较短时间内有更高的Caspase3活化水平. TUNEL结果显示, 10 mg/LTRAIL作用下, BEL7402-HBx细胞凋亡率可达(41.4±7.2)%, 显著高于对照组细胞. 反义封闭HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达可部分阻断TRAIL诱导的凋亡. 两组实验结果均显示HBx的表达变化并不影响细胞表面TRAIL受体的表达模式. HBx蛋白参与调节TRAIL诱导的细胞凋亡, 可能在HBV相关疾病的发生中起一定作用, 这一作用与TRAIL受体表达水平无关. 从两个不同的侧面证实了HBx对TRAIL诱导细胞凋亡的调节作用, 为进一步论证凋亡失衡在HBV感染相关肝炎及肝癌发生中的作用提供了新的论据.     

抑制NF-κB信号通路对缺氧诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤的影响

本研究试图从细胞衰老和凋亡方面,探讨NF-κB信号通路抑制剂PDTC对缺氧诱导的小鼠海马神经细胞HT22的影响。实验研究以小鼠海马神经元细胞HT22细胞为细胞模型,设置4组,分别是Control组、缺氧组、缺氧+PDTC组、PDTC组(PDTC, NF-κB信号通路抑制剂)。用CCK-8法检测细胞存活率;hochest33258染色观察细胞凋亡情况;Elisa检查细胞Caspase-3水平;Western blotting检测衰老相关蛋白P16和P21的表达。CCK-8结果发现,与缺氧组比较,缺氧+PDTC组中HT22细胞数存活率明显升高;hochest33258染色结果示:与缺氧组比较,缺氧+PDTC组中hochest33258染色阳性HT22细胞数目显著降低;Elisa结果显示,缺氧+PDTC组HT22细胞中Caspase-3水平与缺氧组比较显著降低。Western blotting结果显示:与缺氧组比较,缺氧+PDTC组HT22细胞中衰老相关蛋白P16和P21表达明显降低。本研究初步结果表明,运用PDTC抑制NF-κB信号通路能有效拮抗缺氧对小鼠海马细胞HT22细胞的损伤作用。     

粪肠球菌脂磷壁酸通过 激活NF-κB活化NLRP3炎性体

目的检测粪肠球菌脂磷壁酸(LTA)对NLRP3炎性体的活化机制。方法粪肠球菌LTA及NF-κB抑制剂作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7上,运用Western blot及ELISA法检测NLRP3炎性体相关因子mRNA及蛋白的表达,检验LTA对NLRP3的活化是否借助NF-κB信号通路,免疫荧光染色检测NF-κB的核转位。结果LTA可直接活化RAW264.7细胞的NLRP3炎性体。LTA作用于细胞后NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表达明显高于对照组(P0.05)。NF-κB抑制剂可有效抑制NF-κB P65的核转位,而一旦NF-κB信号通路被抑制,NLRP3炎性体蛋白的表达均明显降低。结论 LTA能直接激活小鼠巨噬细胞系RAW264.7的NLRP3炎性体的表达,NF-κB信号通路参与此过程。     

乙型脑炎病毒NS1蛋白激活NF-κB通路诱导神经元细胞炎性焦亡

乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）是黄病毒科,单股正链RNA病毒,JEV感染主要引起中枢神经系统炎性损伤。细胞焦亡（pyroptosis）是一种依赖于胱天蛋白酶的炎性细胞程序性死亡。非结构蛋白1(NS1)是黄病毒科类病毒与宿主相互作用的重要蛋白,在病毒的复制、致病及免疫逃逸过程中起关键作用。为了阐明NS1蛋白是否影响JEV诱导的神经元细胞炎性焦亡及其作用机制,本研究以神经元细胞SH-SY5Y为研究对象,以转染pcDNA3.1空载质粒为对照组、转染pcDNA3.1-NS1为实验组进行实验。结果表明,与转染pcDNA3.1空载质粒组相比,转染pcDNA3.1-NS1组中JEV的病毒载量、焦亡相关因子NLRP3、Caspase1、IL-1β及IL-18基因的表达量显著上升,并且与转染pcDNA3.1空载质粒组相比,转染pcDNA3.1-NS1处理组中p-P65/P65蛋白的表达量显著上调,p-IκBα/IκBα蛋白的表达量显著下调,表明NS1蛋白能激活细胞中NF-κB信号通路。随后使用NF-κB激动剂LPS及NF-κB抑制剂BAY 11-7082探...     

单纯疱疹病毒US3衣壳蛋白在TRAF6泛素化时或之前抑制Toll样受体2信号通路

单纯疱疹病毒（HSV ）能通过多种策略来调节宿主免疫反应。通过对 HSV开放读码框架的筛选发现, HSV编码的额外蛋白能影响核因子κB（NF-κB）信号通路,确定了病毒US3衣壳蛋白是NF-κB信号通路的抑制剂。该研究发现,在感染早期 US3蛋白能抑制病毒感染引起的Toll样受体2（TLR2）信号通路激活。US3在转染细胞中过表达能抑制酵母多糖引起的 TLR2信号通路激活,且这种抑制作用发生在MyD88的下游和p65的上游。在TLR2信号通路中,TRAF6的泛素化至关重要。使用US3-null和US3激酶突变病毒株,证明HSV US3蛋白能降低TRAF6泛素化,且US3激酶活性是这种作用所必需。结果提示,US3是有效抑制TLR2信号通路所必需且发生在TRAF6泛素化时或之前。     

二苯乙烯苷通过抑制NF-κB的激活减轻MPP＋诱导的PC12细胞凋亡

目的：探讨2,3,5,4＇-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷（2,3,5,4＇-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside,TSG）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methy-4-phenylpyridinium,MPP＋）诱导PC12细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色试验检测PC12细胞活性;Hoechst33258染色法测定细胞凋亡;Westernblotting检测NF-κB（P65）和IκBα蛋白的表达。结果：MPP＋（300μmol/L）作用于PC12细胞24h后,与正常对照组比较,细胞存活率降低（53.3±3.4%）（P〈0.01）;细胞染色质固缩,细胞核呈致密浓染。TSG（1,5,10μmol/L）预处理24h后,细胞存活率增加（60.8±1.9%）,（70.1±1.8%）（P〈0.01）,（81.2±1.9%）（P〈0.01）;细胞核凝聚明显减少,且具有量一效关系。另外,MPP＋可使PC12细胞核中NF-κB（P65）蛋白表达升高,细胞浆中IκBα蛋白表达降低;与MPP＋处理组细胞相比,TSG预处理后,PC12细胞核中高表达的NF-κB（P65）蛋白水平明显降低,细胞浆中低表达的IκBα蛋白水平升高。结论：TSG对MPP＋诱导的PC12细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能与抑制NF-κB的激活有关。